吕承育
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 靶向慢病毒载体RNA干扰小鼠血管内皮细胞异种抗原的研究
- 2010年
- 目的 使用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）方法抑制小鼠血管内皮细胞异种抗原半乳糖α1,3-半乳糖（Galα1,3-Gal）的表达.方法 经体外设计合成针对α1,3-半乳糖基转移酶（α1,3-GT）mRNA的序列特异性小发夹RNA（shRNA）,并构建携带α1,3-GT shRNA的重组慢病毒载体,以慢病毒感染小鼠血管瘤内皮细胞系EOMA细胞.采用荧光实时定量聚合酶链反应检测转染后的EOMA细胞α1,3-GT mRNA表达水平的变化;免疫荧光法和流式细胞术检测转染后的EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal表达水平的变化.并将转染后的EOMA细胞与人血清混合培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞存活率.结果 成功获得携带α1,3-GT shRNA的成熟重组慢病毒颗粒,转染EOMA细胞效率可达75%.与空白对照组、空转染组以及阴性siRNA对照组比较,重组慢病毒转染EOMA细胞后,能有效抑制α1,3-GT的表达,抑制率为88%（P＜0.05）;Galα1,3-Gal抗原表达水平明显降低（P＜0.05）;而空白对照组、空转染组和阴性siRNA对照组间的差异无统计学意义（P＞0.05）.重组慢病毒转染后的EOMA细胞与人血清混合培养后的存活率较各对照组明显提高（P＜0.05）.结论 成功构建靶向α1,3-GT基因的重组慢病毒载体,通过RNAi沉默α1,3-GT基因,抑制EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal的表达,在体外实验中可减轻异种超急性排斥反应.
- 戚峰谷雅川吕承育章志翔何向辉朱理玮
- 关键词：异种移植RNA干扰慢病毒超急性排斥反应
- 慢病毒介导RNA干扰α1,干扰α1,3GT、NF-κB控制异种心脏移植排斥反应研究
- 本研究构建了针对小鼠α1，3半乳糖基转移酶(α1，3 galactosyltransferase，α1，3GT)和核转录因-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)RelA亚基基因的短发夹状RNA...
- 吕承育
- 关键词：异种心脏移植核转录因子-ΚB超急性排斥反应RNA干扰
- NF-κB与异种移植排斥反应被引量：2
- 2007年
- 实体器官移植和细胞移植已经成为治疗脏器功能衰竭的一种重要方法，而外科手术技术的进步和环孢素的出现使同种异体器官移植取得了突破性的进展。但是。器官移植供者短缺问题日渐突出。异种移植如果能够应用于临床，则可为人类提供无限的供体器官来源。极大地推动器官移植技术的发展。然而。异种移植后将出现比同种异体移植更为复杂的排斥反应。其中包括：超急性排斥反应（hyperacuterejection，HAR）、延迟性排斥反应（delayedrejection，DXR）、急性细胞性排斥反应（acutecellularrejection，ACR）等。其中HAR主要由“异种抗原”——半乳糖α1，3-半乳糖抗原（Galoα1，3-Gal）所引发。而延迟性排斥反应和急性细胞性排斥反应则与核转录因子一KBnuclearfactor-κB．NF—κB）有着密切关系。
- 吕承育朱理玮
- 关键词：异种移植排斥反应
- 小鼠α1,3-半乳糖基转移酶RNA干扰重组慢病毒的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 背景:研究表明,通过抑制α1,3-半乳糖基转移酶的生成而减少甚至避免供体Galα(1,3)Gal的生成,是渡过器官移植后超急性排斥反应的一条切实可行的方法。目的:构建小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的RNA干扰慢病毒载体,有效沉默小鼠血管内皮细胞的α1,3-半乳糖基转移酶基因表达,以期为有效控制异种移植超急性排斥反应提供稳定的转染细胞载体。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-05在天津医科大学总医院普外研究所完成。材料:慢病毒载体系统(四质粒)购自Tronolab公司,包装细胞293T细胞株购自中科院上海细胞所。方法:在线软件设计小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因发卡小分子干扰RNA片段。合成的双链DNA片段并将其连接到Tele-sh003/U6.2载体的黏性末端,产生重组质粒Tele-sh003/U6.2-shRNA/α1,3-半乳糖基转移酶。对干扰质粒做测序分析。用磷酸钙法将得到的阳性重组子与慢病毒包装质粒共转化293T细胞,72h后收集含病毒上清液,超速离心后得到重组慢病毒。用实时定量聚合酶链反应测定病毒滴度。主要观察指标:干扰质粒的测序分析,慢病毒颗粒的包装和滴度测定。结果:小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因小发卡RNA片段被成功克隆进Tele-sh003质粒中,测序结果显示干扰质粒小干扰RNA编码序列与设计片段的序列完全一致。所得慢病毒亦为阳性克隆,经定量聚合酶链反应测定病毒滴度为2×108Tu/mL。结论:成功构建出小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的小发卡RNA慢病毒RNA干扰表达载体,为进一步控制异种移植超急性排斥反应提供了稳定的转染细胞的载体。
- 吕承育谷雅川戚峰朱理玮
- 关键词：Α1,3-半乳糖基转移酶RNA干扰质粒慢病毒小鼠
- 慢病毒载体介导RNA干扰质粒转染小鼠血管瘤内皮细胞的条件优化被引量：2
- 2009年
- 目的优化在慢病毒介导下将含有针对小鼠α1，3GT的RNA干扰质粒导入小鼠血管瘤内皮细胞（EOMA）时的转染条件。方法按是否加入促转染剂Polybrene（8μ/ml），感染复数（MOI）分别为1、5、10、15和20，感染时间分别为4、6、12和24h，将EOMA细胞分为40个组，分别加入相应的慢病毒转染混合液，于转染后140h在荧光显微镜下计数阳性细胞率，台盼蓝染色法检测各转染条件下的EOMA细胞活性。结果不同病毒感染复数、不同感染时间及有、无促转染剂Polybrene的各组间病毒对EOMA细胞的转染效率差异有统计学意义，其中当加入Polybrene（8μg／ml），MOI=5，感染时间为6h时，转染效率达到最高（83％），细胞活性良好，存活率为96％，此后再增加MOI值和感染时间，转染效率未继续增加，而对细胞的毒性作用明显增强。结论加入Polybrene（8μg／ml），MOI=5，感染时间为6h时可以实现慢病毒载体对EO-MA细胞的高效转染并保持较高的细胞活性。
- 吕承育戚峰谷雅川朱理玮
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰转染血管内皮细胞
- 慢病毒介导RNA干扰α1，3GT、NF-κB控制异种心脏移植排斥反应研究
- 本研究构建了针对小鼠α1,3半乳糖基转移酶(α1,3 galactosyltransferase,α1,3GT)和核转录因-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)RelA亚基基因的短发夹状RN...
- 吕承育
- 关键词：异种移植核转录因子-ΚB超急性排斥反应急性血管性排斥反应
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