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化学酶法合成γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸被引量：1: 2008年; 以Bacillus subtilisNX-2产γ-谷氨酰转肽酶为催化剂,以L-谷氨酰胺和S-苄基-L-半胱氨酸为底物,利用转肽反应合成了S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸,考察了反应时间、初始酶浓度、供体/受体比以及投料方式等条件对反应过程的影响。结果表明,在L-谷氨酰胺浓度为20 mmol/L,S-苄基-L-半胱氨酸浓度为20 mmol/L,酶浓度为0.0208 U/mL以及pH 9条件下,于40℃水浴中反应3 h,S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸得率为5.14 mmol/L,对谷胺酰胺的转化率为25.7%。采用分批投料方式可有效提高谷氨酰供体转化率。S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸以三氟甲磺酸脱除苄基保护基,经RPC纯化后可得产物GGC,产物纯度为91.2%,收率为75.7%。; 吴明刚姚忠李松周治荀志金徐虹韦萍; 关键词：脱保护

酶法制备S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸的动力学模型: 2009年; 以Bacillus subtilis NX-2产γ-谷氨酰转肽酶(GGT)为催化剂,以L-谷氨酰胺(L-Gln)为γ-谷氨酰基供体,S-苄基-L-半胱氨酸(S-Bzl-Cys)为受体,催化合成了S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-Bzl-GGC)。在反应机理分析的基础上,建立了定量描述该过程的动力学模型,模型计算值和实测值能较好吻合,平均相对误差为5.57%。通过模型分析得知,供体浓度的增加有利于转肽反应,但更多的是自转肽反应;受体浓度增加对提高转肽产物S-Bzl-GGC有一定的作用,对自转肽反应几乎没有影响;酶含量增加提高了反应速率,但不提高转肽产物的最大浓度。; 吴明刚姚忠周治徐虹韦萍; 关键词：反应机理动力学模型

酶法制备S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸的动力学模型: 本文以Bacillus subtilis NX-2产γ-谷氨酰转肽酶为催化剂合成S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-bzl-γ-L-glutamyl-L-cysteine)为研究体系,采用L-谷氨酰胺为γ-谷氨酰...; 吴明刚姚忠邓海霞周治荀志金徐虹韦萍; 关键词：酶工程半胱氨酸动力学模型

离子交换法分离S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸被引量：1: 2009年; 采用离子交换法对酶法合成的S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-Bzl-GGC)进行了分离纯化.研究了QSephroseFF阴离子交换树脂对S-Bzl-GGC的吸附等温线,很好地符合Sips吸附等温线模型.考察了pH值、洗脱梯度、流速和进样量等条件对纯化效果的影响,建立了一套基于QSephroseFF阴离子交换树脂的纯化方案.结果表明,在pH8.2、洗脱梯度0～30%B(Tris-HCl缓冲液+1mol/LNaCl)12mL、流速2mL/min、进样量500μL的优化条件下,经一步分离,产物纯度可达98.5%,经1H-NMR鉴定产物结构正确.; 刘步云周治姚忠吴明刚宋希文佘维娜肖彦羚韦萍; 关键词：吸附等温线离子交换纯化

一种酶法合成L－茶氨酸的方法: 本发明公开了一种用L－谷氨酰胺－铜(II)配合物为供体酶法制备L－茶氨酸的方法，包括：利用化学法合成L－谷氨酰胺－铜(II)配合物；将γ－谷氨酰转肽酶加入到含有底物L－谷氨酰胺－铜(II)配合物和乙胺的混合水溶液中反应。...; 姚忠邓海霞周治吴明刚徐虹韦萍; 文献传递

以L-谷氨酰胺-铜(Ⅱ)配合物为供体酶法制备茶氨酸被引量：9: 2008年; A novel method for enzymatic synthesis of L-theanine using copper(Ⅱ)-L-glutamine[Cu(Gln)2]as donor substrate was proposed.The structure of Cu(Gln)2 was identified by infrared spectrum analysis and its stability was also investigated under the reaction conditions.The enzymatic synthesis of L-theanine catalyzed by γ-glutamyltranspeptidase was carried out by using Cu(Gln)2 and L-glutamine as donor substrate respectively,and the product yield and conversion rate of donor substrate were compared under the conditions of different ratios of donor and acceptor.The results showed that the transpeptidation reaction could be effectively enhanced by using Cu(Gln)2 as donor substrate.The conversion rate of donor would increase by 51.5%,44.9% and 27.1% under different reaction conditions,compared to that using L-Gln as donor substrate.When the molar ratio of donor to acceptor was 6∶100,a higher donor conversion of 71.3% was obtained.; 邓海霞姚忠周治吴明刚荀志金徐虹韦萍; 关键词：茶氨酸 Γ-谷氨酰转肽酶酶法合成

重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的稀释复性被引量：1: 2008年; N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(N-Acetylornithine deacetylase,NAO)是一种重要的用于手性拆分的酶,具有广泛的底物选择性,常用于多种活性氨基酸的酶法拆分。采用稀释复性法研究了重组NAO包涵体的复性条件,如蛋白浓度、复性液中尿素浓度、pH、GSH浓度及c(GSH)/c(GSSG)比例,同时对稀释操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件。结果表明,尿素能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,随着蛋白质浓度的增加,复性效果变差。当复性缓冲液中尿素浓度为2 mol/L,GSH浓度为5 mmol/L,c(GSH)/c(GSSG)为2.5,pH为8.5,在4℃下进行分批稀释复性操作,复性后重组NAO的活性为1.077 U/mL,比酶活达到14.943 U/mg,与可溶性表达的NAO比较,复性率达到21.48%。; 黄东健姚忠刘步云吴明刚邓海霞; 关键词：包涵体复性

酶法制备S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸的动力学模型: 本文以Bacillus subtilis NX-2产γ-谷氨酰转肽酶为催化剂,以L-谷氨酰胺为γ-谷氨酰基供体,S-苄基-L-半胱氨酸为受体,催化合成S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-bzl-γ-L-gluta...; 吴明刚姚忠周治徐虹韦萍; 关键词：动力学模型酶法合成; 文献传递

重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的表达、纯化和复性研究被引量：7: 2007年; 报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶,比酶活为1193.2u/mg蛋白。诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例。37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高。低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素。稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性。在合适的条件下以稀释法复性时,约有17.78%包涵体可顺利复活。包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后,获得了高纯度的NAOase。; 李环陈悦翁秋萍吴明刚韦萍欧阳平凯; 关键词：包涵体复性

酶法制备γ-D-glutamyl-L-tryptophan的动力学模型被引量：5: 2008年; 以酶法合成γ-D-glutamyl-L-tryptophan(γ-D-Glu-L-Trp)为研究体系,采用D-谷氨酰胺为γ-谷氨酰基供体,L-色氨酸为受体,测定得到了转肽反应的米氏常数(Km)为5.11mmol.L-1,催化常数(Kcat)为3.92mmol.min-1,γ-D-Glu-L-Trp的水解反应米氏常数(K′m)为2.31mmol.L-1,催化常数(K′cat)为1.46mmol.min-1。采用顺序反应机制建立了酶法制备γ-D-Glu-L-Trp的过程动力学模型,并进行了参数优化。经验证,所建模型可准确预测该体系中的反应进程,模型数值解与实验值的平均相对误差小于5%。; 汪前姚忠吴明刚荀志金周治徐虹韦萍; 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶动力学模型

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吴明刚