吴晓凤
- 作品数：15 被引量：12H指数：2
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向髓样分化蛋白—2特异性抗炎多肽的优化
- 2015年
- 目的对原始多肽即靶向髓样分化蛋白-2（MD-2）拮抗多肽T6、T11 进行突变多肽库的构建、筛选和功能鉴定,以获得具有更高抗炎活性的多肽.方法：以前期合成的可阻断MD-2 与内毒素（LPS） 结合但效率不高的原始多肽T6 和T11 序列为基础,每次随机突变相邻的3~5 个氨基酸,保留剩余氨基酸,并同时在肽链的氨基端和羧基端引入额外的两个氨基酸,构建大容量的噬菌体突变肽库;再用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合的多肽.最后用细胞实验和动物实验验证所获特异多肽的抗炎效果：①用获得的多肽200 μg/ml 分别孵育巨噬细胞和人单核白细胞2 h,再用内毒素（LPS）1 μg/ml 刺激6 h.以单纯细胞培养液培养的细胞和LPS 刺激6 h 的细胞作对照.② C57 小鼠腹腔注射获得的多肽200 μg/ml, 1 h 后腹腔注射LPS 400 μg/ml,6 h 后取血.以腹腔注射生理盐水1 ml 或LPS 的小鼠作对照.每组5 只小鼠.采用ELISA 法测定各组细胞培养上清和各组小鼠血清的肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平.结果：成功构建出原始多肽T6 和T11 序列为基础的突变肽库,用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合多肽A8、H2、F5、H5、H9,通过细胞实验筛选得到有抑炎效果的多肽2 条（A8、H2）,可以明显抑制LPS 所致细胞分泌TNF-α 和IL-6 水平的增高.动物实验发现只有1 条多肽（H2）可以明显抑制LPS 所致小鼠血清TNF-α 和IL-6 水平的增高.结论：成功构建了突变肽库,并从中筛选出一条具有高效抗炎效应的多肽.
- 谭燕吴晓凤翁珣闫红
- 关键词：抗炎
- 靶向TGF-Ⅱ型受体的核苷酸配基阻抑人成纤维细胞增殖的实验研究
- 谢琳朱晓燕李磊谭燕吴晓凤李海军
- Fibronectin致敏人外周血单核细胞TLR4增加炎症因子释放
- 熊健谭燕吴晓凤刘华渝赵玉峰刘枫李刚沈岳李磊
- 创伤与择期手术患者外周血单核细胞TLR4表达变化差异
- 目的研究创伤患者与择期手术病人外周血单核细胞内内毒素复合受体--Toll样受体4(TLR4)mRNA及蛋白的不同表达变化,观察其相互间的差异及与临床预后的关系。方法分别于术后及创伤后1d,3d,5d采集35例创伤患者(损...
- 刘枫徐发良郑仲谨李元朝谭燕吴晓凤刘华渝李磊
- 优化的靶向MD-2的高效抗炎多肽
- 以T6、T11为基础，采用NNK策略构建突变肽库，以MD-2全长蛋白为靶蛋白，通过对突变肽库进行亲和筛选，得到高亲和力的噬菌体克隆。通过细胞因子生成抑制实验和检测动物血清中的炎性介质的表达，发现1个噬菌体克隆所展示的融合...
- 闫红李磊谭燕吴晓凤
- 优化的靶向MD-2的高效抗炎多肽
- 以T6、T11为基础，采用NNK策略构建突变肽库，以MD‑2全长蛋白为靶蛋白，通过对突变肽库进行亲和筛选，得到高亲和力的噬菌体克隆。通过细胞因子生成抑制实验和检测动物血清中的炎性介质的表达，发现1个噬菌体克隆所展示的融合...
- 闫红李磊谭燕吴晓凤
- 文献传递
- 转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用被引量：2
- 2017年
- 背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义。目的观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响。方法将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组，分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16ng／ml TGF-β2继续培养24h，采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化，确定最适TGF-β2刺激质量浓度。用4ng／ml TGF-β2分别处理培养的TFs6、12、24和48h，采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化。采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4ng／ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布。结果Western blot法检测显示，正常对照组及2、4、8和16ng／ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加，各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较，差异均有统计学意义（F=37．338、13．438、31．067、11．767、15．167，均P〈0．01）。细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性。正常对照组及4ng／ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48h组，细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0．68±0．07、1．09±0．10、1．32±0．07、1．50±0．06和1．89±0．12，其表达强度呈时间依赖性，总体比较差异有统计学意义（F=82．832，P=0．000）。正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱，主要位于细胞质中，TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的�
- 郭凤朱晓燕陈侠张勇谭燕吴晓凤刘锐李磊鲜光军谢琳
- 关键词：TENON囊成纤维细胞赖氨酰氧化酶
- 纤连蛋白对人外周血单核细胞TLR4介导的脂多糖反应的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究纤连蛋白(Fn)刺激对人外周血单核细胞(PBMCs)炎症因子释放和Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法采用梯度离心法从浓缩人外周血白细胞中分离出PBMCs,设立空白对照组、Fn刺激组、LPS刺激组以及Fn+LPS复合刺激组,分别刺激PBMCs 0.5、2、4、8、12h后收集细胞培养上清,采用酶联免疫法(ELISA)检测其炎症因子人白介素6(IL-6)、人白介素10(IL-10)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;采用Western blotting法检测各刺激物对TLR4表达的影响。结果 4、8h复合刺激组IL-6释放量分别为727.00±37.73和918.25±26.78pg/ml,明显高于同时间点其他3组(P<0.05);2h复合刺激组TNF-α释放量明显增加,且高于同时间其他3组(P<0.05);0.5、2、4h复合刺激组IL-10释放量呈缓慢递增,8、12h分别达784.74±91.96、1081.74±57.98pg/ml,与同时间其他3组比较明显增加(P<0.05)。Western blotting结果显示,1、2h复合刺激组TLR4的表达水平明显高于各时间点的其他3组(P<0.05)。结论单纯Fn或LPS刺激即可促进PMBCs TLR4表达上调,Fn复合LPS刺激可进一步增强TLR4的表达,并导致炎症介质IL-6、TNF-α释放的显著增加,提示Fn可增强PMBCs对LPS刺激的敏感性。
- 熊健谭燕吴晓凤刘华渝赵玉峰沈岳李磊
- 关键词：纤连蛋白类脂多糖类单核细胞TOLL样受体
- 脑出血后血红素通过白介素-1受体诱导神经元发生程序性坏死被引量：2
- 2019年
- 目的探讨脑出血后游离血红素对神经元死亡的影响及其可能的分子机制。方法(1)实验一:将24只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、生理盐水组、5 mmol/L血红素组、10 mmol/L血红素组,每组6只。后2组分别注射20 μL 5 mmol/L、10 mmol/L血红素溶液至纹状体制备成脑出血模型,生理盐水组注射20 μL生理盐水。12 h后采用Western blotting检测海马组织中血红素氧合酶-1(HO-1)及受体间相互作用蛋白(RIP)1、RIP3、混合谱系激酶域样蛋白(MLKL)的蛋白表达。将3只C57BL/6小鼠注射20 μL 10 mmol/L血红素溶液至纹状体制备成脑出血模型,24 h后采用免疫荧光双标染色检测海马组织冰冻切片上神经元特异性核蛋白(NeuN)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。(2)实验二:将原代培养的海马神经元分别用0、10、20、40、80 μmol/L血红素刺激6 h后及用40 μmol/L血红素刺激0、1、2、4、6 h后,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测神经元毒性损伤情况。将原代培养的海马神经元分别用40 μmol/L血红素刺激0、1、2、4、6 h后,采用Western blotting检测神经元中白介素-1(IL-1)受体(IL-IR)1、RIP1、RIP3、MLKL及Caspase-3的蛋白表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)水平。将原代培养的海马神经元分别用0、40 μmol/L血红素刺激6 h后,采用免疫荧光双标染色检测神经元中NeuN和Caspase-3的表达。(3)实验三:将原代培养的海马神经元分别用0、0.5、1.0、1.5 μg/mL IL-IR拮抗剂预孵育1 h后再用40 μmol/L血红素刺激6 h后,采用LDH法检测神经元毒性损伤情况,采用Western blotting检测神经元中IL-IR1、RIP1、RIP3、MLKL的蛋白表达。结果(1)实验一:与假手术组、生理盐水组比较,5 mmol/L血红素组、10 mmol/L血红素组HO-1、RIP1、RIP3、MLKL蛋白表达均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。10 mmol/L血红素注射后24 h时的小鼠海马组织冰冻切片上Caspase-3有明显表达,但�
- 吴晓凤初翔谭燕李磊
- 关键词：脑出血血红素神经元程序性坏死白介素-1受体
- 创伤大鼠单核细胞、肺泡巨噬细胞基因表达的差异性研究
- 目的研究单核细胞及肺泡巨噬细胞的异质性在创伤后的免疫功能障碍中的作用。方法通过大鼠双后肢股骨部位砸伤复合LPS刺激模型,采用SMART和SSH方法,构建创伤大鼠单核细胞与肺泡巨噬细胞的差异表达基因显示文库,并对验证为阳性...
- 刘枫谢志坚张伟李元朝谭燕吴晓凤李磊
