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周勇: 作品数：62 被引量：47H指数：4; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项北京市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>

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基因治疗制品质量控制通用技术要求考虑要点: 2022年; 本文旨在为基因治疗产品研发者开展制品研发和生产等活动提供必要质量控制原则,适用于以病毒为载体的基因治疗制品,也适用于溶瘤病毒类制品。本文通过借鉴类似制品成熟的、有效的、实用性被证明的策略和方法阐述基因治疗制品质量控制生物通用技术要求,希望对整个行业的发展提供帮助。基因治疗制品制造和质量控制应依照风险评估、全过程控制和全生命周期管理理念,以保障制品质量为最终目的,并通过对各个制造环节的控制实现制品的低安全风险的稳定生产。; 史新昌秦玺于雷王光裕陶磊李响裴德宁李永红周勇; 关键词：病毒载体

重组新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区9型腺相关病毒的构建方法: 重组新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区9型腺相关病毒的构建方法：将2段RBD序列用柔性Linker串联连接，再在前面加上tPA分泌表达信号肽，以BamHI和SalI两个酶切位点，插入pAAV‑MCS表达载体。本发明构建的重组...; 饶春明秦玺李永红李山虎李响丁有学裴德宁刘兰史新昌于雷周勇郭莹韩春梅朱留强

人粒细胞刺激因子生物学活性协标品均匀度分析: 2022年; 目的:分析人粒细胞刺激因子生物学活性协作标定样品(以下简称协标品)均匀度。方法:利用协标品协作标定数据中同一次实验中A组和B组配对数据差值估算协标品引入的不确定度,进而估算协标品的均匀度;以数据两两间差值的标准差和协标品引入的不确定度共同估计国际标准品引入的不确定度。结果:协标品的不确定度为0.27×10^(6)IU·支^(-1);扣除实验影响,协标品均匀度约为3%;国际标准品带来的不确定度为0.49×10^(6)IU·支^(-1)。结论:探讨生物学活性协标品均匀度分析方法,为其他标准品协作标定提供方案参考,也为该标准品的应用提供数据支持。; 朱留强刘兰于雷丁有学史新昌周勇; 关键词：生物学活性均匀度不确定度

PEG 化重组人促红素质量控制方法和标准研究: 目的：建立PEG 化重组人促红素质量控制方法和质量标准。　　方法：用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性，使用iCE毛细管等电聚焦电泳分析异构体，用离子色谱确定N-糖链指纹图谱，反相HPLC 进行Lys-C 蛋白...; 周勇王丽于传飞杨鹏云王箐舟侯继锋王军志; 关键词：离子色谱

国产重组人促红素质量控制现状: ＜正＞～～; 周勇; 文献传递

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制: 2023年; 目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10^(12)copies/mL,95%置信区间为2.48×1012~2.64×10^(12)copies/mL。结论研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。; 郑红梅于雷李永红史新昌安怡方郭莹韩春梅饶春明周勇; 关键词：国家标准品

重组腺相关病毒(rAAV)基因治疗制品质控检验技术重点考量: 2023年; 近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。; 秦玺于雷陶磊毕华王光裕史新昌周勇; 关键词：重组腺相关病毒

rAAV2-ND4注射液基因转录水平的生物学活性检测方法: 2023年; 目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),以每孔360μL)感染HEK293T细胞(3.0×105cells·mL^(-1),每孔0.8 mL,37℃5%二氧化碳培养预培养24 h)后2 h,加适量培养基继续培养24 h,收集细胞;按细胞总RNA提取试剂盒操作细则提取细胞总RNA(裂解细胞、吸附、去蛋白、去杂质和洗脱);将提取后的细胞总RNA为模板,用qPCR方法分别检测ND4的mRNA Ct值和β-actin内参基因mRNA Ct值。通过同时设立rAAV2-ND4参比品进行平行检测,通过β-actin内参基因和rAAV2-ND4参比品双重校正检测rAAV2-ND4相对于其参比品的生物学活性。对所建立方法进行方法学验证,包括准确性、精密度、线性和专属性等。另考察了3批制品的批间一致性。结果:qPCR检测ND4 mRNA转录量和参比品校正的方法检测结果提示ND4 mRNA与rAAV2-ND4感染细胞滴度之间存在量效关系。经方法学验证,方法的检测值与预期值之间偏离率在100%~130%;不同时间不同人员的9次结果RSD为13.75%;rAAV2-ND4滴度在1.0×10^(10)~5.0×10^(10)vg·mL^(-1)范围内方法线性r>0.97;方法具有很好的专属性。3批rAAV-ND4检测值的RSD为9.3%。结论:初步建立了rAAV2-ND4转录水平的生物学活性检测方法。; 秦玺陈龙史新昌杨靖清潘燕群于雷毕华裴德宁安怡方潘悦李响周勇; 关键词：生物学活性实时定量PCR 内标法基因治疗

一种测定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白生物学活性的新方法: 本发明涉及一种测定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白生物学活性的新方法。所述方法利用SIE萤光素酶报告基因质粒，转染CHO‑K1细胞后加压筛选获得稳定表达SIE萤光素酶的单克隆细胞株。利用IL‑6/sIL‑6Rα复合物...; 王军志饶春明于雷贾春翠周勇姚文荣史新昌秦玺裴德宁; 文献传递

rAAV5基因组滴度测定的数字PCR方法研究: 2023年; 目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理r AAV5样品,用微滴数字PCR测其基因组滴度,对病毒样品前处理试剂进行优化;在其他试验条件不变的情况下,分别设置微滴数字PCR的退火温度为60、58、54、52℃,以WPRE引物扩增,比较扩增效果,对数字PCR的退火温度进行优化;分别采用微滴数字PCR和芯片数字PCR测定rAAV5的基因组滴度并比较。结果:终浓度为1%SDS和62.5 mmol·L^(-1)EDTA按1∶1(v/v)的比例混合后前处理rAAV5,测定的基因组拷贝数较高,前处理液裂解效果较好;当退火温度为54℃时,微滴数字PCR中阳性微滴和阴性微滴分离效果最好,扩增特异性最强;2种测定结果的试验室内精密度和回收率接近,测定同一裂解样本的结果较为接近(在1个数量级)。结论:初步建立了数字PCR方法并验证,为后续的进一步验证奠定基础。; 郑红梅秦玺李永红于雷毕华饶春明朱留强杨靖清史新昌周勇; 关键词：基因治疗

周勇

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