周静然
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：第三军医大学更多>>
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- 小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．
- 罗娜白云周静然宋敏王艳艳杨晓亚许雪青段文元熊加祥
- 关键词：小神经胶质细胞细胞活力肿瘤坏死因子
- 人补体杀伤小鼠N9小胶质细胞及亚溶破模型的建立
- 2006年
- 目的:探讨正常人血清(norm al hum an serum,NHS)补体杀伤小鼠N9小胶质细胞的机制,建立人补体攻膜复合物(sub lytic m embrane attack comp lex,sMAC)N9细胞亚溶破刺激模型。方法:用阻断补体活化途径的方法探讨N9细胞活化人补体系统的机制;采用微量补体反应性溶破法,以酵母多糖(Zymosan,Z)活化急性期病人血清制备补体优球蛋白C56,EDTA-NHS作为C7-C9的来源,组装N9细胞sMAC亚溶破模型;CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积;脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力。结果:未致敏N9细胞可通过旁路途径直接活化人血清补体系统;当C56稀释度在1∶500以上,NHS(含1 mmol/L EDTA)稀释度为1∶20时,膜攻击复合物(m embrane attack comp lex,MAC)活性逐渐降低,细胞溶破减少,确定C56 1∶500,NHS 1∶20为N9细胞亚溶破补体量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积于N9细胞表面;亚溶破剂量MAC刺激N9细胞后与对照组相比细胞脱落增加(P<0.05),而细胞活力正常。结论:探讨了小鼠N9细胞活化人补体的机制;通过建立N9细胞人补体sMAC亚溶破模型,证实sMAC刺激N9细胞后可降低细胞黏附力但不影响细胞活力;为sMAC对中枢神经系统小胶质细胞亚溶破刺激效应的深入研究提供了理论与实验基础。
- 罗娜白云周静然
- 关键词：补体
