孟祥兵
- 作品数：14 被引量：65H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- DNA损伤反应中细胞周期检查点蛋白p27^(Kip1)表达及其调控机制被引量：3
- 2004年
- 为了研究DNA损伤反应中p2 7Kip1的表达及其调控机制 ,应用免疫印迹的实验结果表明 :10Gy 60 Coγ射线照射后 3h ,HeLa细胞中p2 7Kip1蛋白水平开始下降并持续到 2 4h ,进而失去它对CDKs的抑制功能 .Northern印迹结果显示 ,电离辐射 (IR)对p2 7Kip1mRNA表达水平无明显影响 ,说明电离辐射诱导p2 7Kip1表达水平的降低主要与蛋白质降解相关 ,但其具体的调控机制还不清楚 .已知在G1—S期p2 7Kip1蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway) .酶动力学研究结果揭示 :电离辐射后细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性增高 ,12h细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性达到最大 .当在照前用细胞周期蛋白E Cdk2抑制剂olomoucine (10 μmol L)抑制细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性时 ,p2 7Kip1蛋白表达水平增加 .此外 ,还观察到电离辐射可诱导p2 7Kip1泛素化水平的增高 ,而在使用蛋白酶体抑制剂MG 132 (5 μmol L)处理HeLa细胞后 ,可抑制辐射诱导p2 7Kip1蛋白水平的下调 .研究结果提示 :泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P2 7Kip1蛋白表达下调的降解机制 .
- 张枫孟祥兵宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤
- 关键词：电离辐射泛素化蛋白酶体抑制剂
- DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用被引量：1
- 2003年
- 目的 :研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法 :用Flag抗体Western印迹检测 ,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c_ret;用HA myc抗体Western印迹检测 ,HA_retTK +myc_LZPR免疫共沉淀蛋白复合物 ;荧光蛋白标记的亚细胞定位。结果 :PTC1可以与ATM激酶相互作用 ,此作用不依赖于电离辐射 ,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素 (wortmannin)所抑制 ,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合 ;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域。构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示 ,PTC1以弥散形式分布于细胞质内。结论 :胞浆蛋白PTC1可能借助某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位 。
- 铁轶毛建平孟祥兵刘斌宋宜梅柱中董燕孙志贤
- 关键词：RETATM电离辐射蛋白相互作用原癌基因
- Skp2参与HeLa细胞G_2/M周期检查点的调控被引量：5
- 2005年
- 具癌基因特性的Skp2在大多数肿瘤组织和肿瘤细胞中异常高表达,它作为SCFSkp2复合物的底物识别亚基调控p27KIP蛋白的稳定性而促进细胞G1/S期转换.为进一步明确Skp2与G2/M周期检查点的关系,在HeLa细胞中过表达Skp2以及通过反义寡核苷酸抑制Skp2表达.结果发现:Skp2能促进细胞周期运转,表现为S期细胞增多和G2/M期细胞减少,其中F-box结构域具有重要的功能意义;反义寡核苷酸抑制Skp2表达后,HeLa细胞发生显著的G2/M期阻滞;MTT检测结果表明,400nmol/L的Skp2的反义寡核苷酸能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;Western印迹结果表明,HeLa细胞中Skp2可能通过负调控p21WAF的稳定性来参与G2/M检查点调控,这在用放线菌素D处理HeLa细胞的实验中得到验证.这些结果初步揭示了Skp2参与HeLa细胞G2/M周期检查点调控的分子机制.
- 钱俊杰孙国敬孟祥兵宋宜梅柱中刘斌董燕孙志贤
- 关键词：SKP2
- 缺血与正常小鼠脑内钙调素结合蛋白的研究被引量：1
- 1993年
- 脑缺血是当今严重威胁人类健康的疾病。为了寻找对其有效的防治手段,目前对缺血机理的研究非常活跃。特别是Ca^(2+)在缺血细胞损伤中的作用最引入关注。用离子敏感的微电极测得缺血过程中胞外Ca^(2+)迅速降低,同时伴有大量神经递质释放。用^(45)Ca^(2+)
- 孟祥兵魏群
- 关键词：钙调素结合蛋白
- 毛细血管扩张性共济失调突变蛋白在细胞凋亡过程中被Caspase┐3降解被引量：5
- 1998年
- 新近的研究揭示：ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能．一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被ｃａｓｐａｓｅ特异切割，其中参与ＤＮＡ损伤修复过程的聚ＡＤＰ核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）以及ＤＮＡ依赖的蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ），在细胞凋亡过程中被ｃａｓｐａｓｅ选择性切割具有特殊的功能意义．为探索与ＤＮＡ－ＰＫ催化亚基有较高同源性，含有ｃａｓｐａｓｅ切割位点，且功能上目前也被认为是感受ＤＮＡ损伤和参与信号传导途径的ＡＴＭ（Ａｔａｘｉａｔｅｌａｎｇ－ｉｅｃｔａｓｉａｍｕｔａｔｅｄ）蛋白，是否在凋亡过程中也可被切割而降解？应用体外转录与翻译系统获得ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域，同时通过建立无细胞反应体系获得含ｃａｓｐａｓｅ活性的细胞抽提液，将两者在体外共同保温．结果发现：ＡＴＭ蛋白与ｃａｓｐａｓｅ－３能免疫共沉淀，ＡＴＭ蛋白的ＰＩ３Ｋ结构域可被ｃａｓｐａｓｅ－３特异切割，并观察到辐射诱发细胞调亡中ＡＴＭ蛋白的降解．从而进一步证实了ＤＮＡ损伤修复的抑制，促进细胞凋亡的发生．
- 童新孟祥兵董燕孙志贤
- 关键词：CASPASE-3细胞凋亡DNA损伤修复ATM
- DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化被引量：13
- 2002年
- 毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1
- 宋宜孟祥兵梅柱中刘斌董燕孙国敬孙志贤
- 关键词：DNA损伤生物学反应ATMP21^WAF1/CIP1蛋白磷酸化
- 从人白细胞cDNA文库筛选凋亡素相互作用蛋白被引量：10
- 2001年
- 来源于鸡贫血病毒的小分子蛋白 凋亡素 (apoptin)能够选择性诱导肿瘤细胞凋亡 ,为研究其选择性诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 ,利用酵母双杂交系统筛选从人白细胞cDNA文库筛选apoptin相互作用蛋白 ,核酸序列分析及同源性检索表明 ,其中一个与ABP2 80 (actin bindingprotein 2 80 )有高度同源性 .细胞免疫共沉淀实验结果显示 :在哺乳动物细胞水平仍能够检测到apoptin与ABP2 80片段的特异的相互作用 .分别构建缺失C端 11个氨基酸、中间 33～ 46位氨基酸和二者均缺失的apoptin的 3个突变体 ,突变体与ABP2 80相互作用研究表明 :apoptin的 33～ 46位氨基酸 (核外运信号 )对于apoptin与ABP2 80的相互作用是必需的 ,而C端核定位信号 /DNA结合序列对于apoptin与ABP2
- 孙国敬童新孟祥兵董燕孙志贤
- 关键词：凋亡素酵母双杂交免疫共沉淀人白细胞CDNA文库
- ATM参与辐射损伤细胞学反应的研究
- 孟祥兵毛建平巩波孙志贤
- 文献传递
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制被引量：18
- 2004年
- 背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。
- 孙国敬钱俊杰孟祥兵宋宜张枫梅柱中董燕孙志贤
- 关键词：HL-60细胞G2/M期阻滞细胞凋亡蛋白酶体抑制剂P21蛋白负调控因子
- p53及其效应分子p21和Gadd45在纺锤体检查点调控中的作用被引量：1
- 1999年
- 目的：观察ｐ５３效应分子ｐ２１、Ｇａｄｄ４５是否参与人源细胞纺锤体检查点调控。方法：利用基因转染技术构建稳定表达ｐ２１、Ｇａｄｄ４５反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞系，观察纺锤体抑制剂诺考达唑（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）是否诱导多倍体细胞产生，细胞纺锤体检查点调控是否异常。结果：诺考达唑诱导２３ｈ、６０ｈ均未观察到稳定表达ｐ２１、Ｇａｄｄ４５反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞多倍体产生，但表达ｐ２１反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞，诺考达唑引起的细胞Ｍ期聚集明显延迟。结论：ｐ２１参与细胞Ｇ２／Ｍ期转换的调控，但人源细胞具有除ｐ５３、ｐ２１外复杂机制调控细胞纺锤体检查点，防止多倍体产生，保持基因组的稳定。
- 孟祥兵董燕孙志贤
- 关键词：P53P21GADD45
