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全葡聚糖颗粒对DC诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响被引量：3: 2020年; 目的研究全葡聚糖颗粒(whole glucan particle,WGP)对DC诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)。用MACS磁珠分选法对OT-Ⅱ小鼠的脾脏和淋巴结中CD4^+T细胞进行纯化,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),与DC共培养。实验分组为:CON组、WGP组、TGP-β组、WGP+TGF-β组,培养5 d后,利用流式细胞术(FCM)检测各组中CD4^+T细胞增殖和Th17细胞变化情况,ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量,Q-PCR检测各组细胞中Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt(retinoid-related orphan receptor-γt,ROR-γt)mRNA表达水平。结果TGF-β可以促进DC诱导CD4^+T细胞向Th17分化,而经WGP激发后,T细胞显著下调ROR-γt的转录水平,并减少对IL-17A的分泌。结论WGP显著抑制TGF-β诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。; 谢叶文宁永玲潘洁陈洁戚春建; 关键词：DC细胞转化生长因子-Β TH17细胞

β葡聚糖促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟并增强其迁移能力被引量：7: 2016年; 目的研究β葡聚糖对体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)成熟及迁移能力的影响。方法β葡聚糖体外处理小鼠BMDC,应用流式细胞术检测BMDC表面分子的表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测对照组和β葡聚糖组BMDC中CC趋化因子受体1(CCR1)、CCR2、CCR5、CCR7 mRNA的表达;ELISA检测BMDC上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p40、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的水平;TranswellTM迁移实验检测BMDC对CC趋化因子配体19(CCL19)和CCL21的趋化反应性;体内迁移实验检测从皮下迁移至引流淋巴结的DC数目。结果与对照组相比,β葡聚糖能上调BMDC表面分子MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD80、CD40的表达,同时促进BMDC分泌IL-6、TNF-α和IL-12p40,CCR7 mRNA水平增加,增强BMDC对CCL19/CCL21的趋化反应性,并且显著增加从皮下注射部位迁移至引流淋巴结中BMDC数目。结论β葡聚糖不仅能促进BMDC分化成熟,还能增强其体内外迁移能力。; 徐冬勤张晓航王勇宁永玲丁骏钱科卿戚春建; 关键词：树突状细胞迁移趋化因子受体

鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟被引量：3: 2017年; 目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。; 张淑雯冯同保宁永玲张晓航戚春建; 关键词：Β-葡聚糖树突状细胞

lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠树突状细胞成熟中的作用: 2021年; 目的:研究lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟和免疫应答中的作用及可能机制。方法:通过转录组测序和实时定量PCR,研究经β-葡聚糖诱导成熟的DC中差异表达的lncRNA;转染小干扰RNA(siRNA)敲低lncRNA12753的表达;流式细胞术检测DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)及共刺激分子CD86、CD80和CD40等的表达;ELISA检测DC培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6和IL-10等的水平;OT-Ⅱ转基因小鼠T细胞共培养检测DC诱导抗原特异性CD4^(+)T细胞增殖和分化的方向。结果:经β-葡聚糖诱导成熟后,DC中lncRNA12753水平显著上调;敲低lncRNA12753表达后,成熟DC表面MHCⅡ分子表达下调,同时降低Th1细胞因子IL-12的分泌,而增加Th2细胞因子IL-10的产生。进一步研究发现下调lncRNA12753会制约DC诱导OVA特异性CD4+T细胞的增殖和IFN-γ+Th1细胞分化的能力。String蛋白相互作用网络分析结果表明,lncRNA12753调节DC免疫功能可能是通过IRF7来实现的。结论:lncRNA12753参与了β-葡聚糖诱导的DC成熟,通过调节DC抗原提呈分子MHCⅡ的表达和Th1细胞极化细胞因子的分泌影响其诱导CD4+T细胞的增殖和分化。; 苏明明沈凯丁骏宁永玲戚春建; 关键词：Β-葡聚糖树突状细胞 T细胞分化

三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用被引量：1: 2023年; 目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激发后, 荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs, pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后, 流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达, ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8^(+)和CD4^(+)T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA), 与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8^(+)或CD4^(+)T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF), 将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs, 经LPS激发后, 流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。结果经LPS激发后, BMDCs中Trim23表达水平显著下调;过表达Trim23后, 其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降;与T细胞共培养结果显示, 过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4^(+)T细胞增殖分化以及诱导CD8^(+)T细胞增殖的能力;Western blot结果显示, 过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较, RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。结论过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能, 其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域, 本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细; 丁骏段雪含谢叶文潘洁夏蕾宁永玲何树燕戚春建; 关键词：树突状细胞功能域免疫功能

全葡聚糖颗粒促进肿瘤微环境驯化的小鼠树突状细胞成熟并抑制调节性T细胞分化被引量：4: 2017年; 目的体外模拟肿瘤微环境驯化免疫抑制性树突状细胞(TEDC),研究全葡聚糖颗粒(WGP)对其免疫功能的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),同时加入白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)共培养,诱导得到TEDC,再加入WGP激发2 d。磁珠分选出OT-Ⅱ小鼠淋巴结和脾脏中的CD4+T细胞,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),再与TEDC共培养。流式细胞术检测细胞的CD11c、CD86、CD40、CD80、MHC-Ⅱ的水平和CD4+FOXP3+调节性T细胞(Treg)的分化情况。实时荧光定量PCR检测TEDC的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12p40、IL-10、IL-6、IL-4、TGF-β1 m RNA水平;ELISA检测TEDC培养上清中的TNF-α、IL-23、IL-12p70、IL-4水平。结果WGP可以上调TEDC表面MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40的表达,提高TNF-α、IL-12p40、IL-6水平,降低TGF-β1水平;抑制其诱导CD4+FOXP3+T细胞分化能力。结论β-葡聚糖可以改变TEDC的成熟和分化状态,改善其免疫抑制功能。; 白煜白煜宁永玲周洪

β葡聚糖抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成并促进其迁移能力: 2018年; 目的研究β葡聚糖对巨噬细胞源性泡沫细胞的形成和迁移能力的影响。方法培养RAW264. 7巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其为泡沫细胞。油红O染色观察对照组、ox-LDL组和β葡聚糖干预组(β葡聚糖+ox-LDL孵育)泡沫细胞的形成;实时定量PCR检测各组细胞炎症因子肿瘤坏死因子α和转化生长因子β及白细胞介素6和10、CC趋化因子受体1(CCR1)、CCR2、CCR5和CCR7的mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞表面趋化因子受体的表达; TranswellTM迁移实验检测细胞对CC趋化因子配体19 (CCL19)和CCL21的趋化能力。结果 ox-LDL处理后细胞被油红O染成暗红色,而β葡聚糖干预组中细胞染色变浅;与ox-LDL组比较,β葡聚糖可下调泡沫细胞肿瘤坏死因子αmRNA的表达,并上调CCR7的表达,明显促进泡沫细胞向CCL19/CCL21的趋化反应(均为P <0. 05)。结论β葡聚糖不仅抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,还可通过促进泡沫细胞CCR7的高表达,增强其迁移能力。; 丁骏谢叶文吴奇勇潘洁陈洁宁永玲戚春建; 关键词：泡沫细胞迁移动脉粥样硬化

肿瘤细胞外泌体在肿瘤免疫中的作用被引量：5: 2017年; 外泌体作为一种纳米级囊泡逐渐成为现在肿瘤免疫的研究热点。外泌体中含有大量的蛋白质、脂质、核酸等物质,在细胞间的信息传递中起着重要作用[1]。肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor-derived exosome,TEX）不仅可以抑制宿主免疫应答,促进肿瘤转移,在一定条件下也能够起到抗肿瘤免疫作用,因此探索肿瘤来源外泌体对免疫应答的影响及相关机制在肿瘤免疫治疗中具有重要意义。; 张晓航张淑雯宁永玲戚春建; 关键词：肿瘤免疫治疗外泌体肿瘤细胞宿主免疫应答 EXOSOME 细胞来源

CD40配体对胃癌细胞AGS生长的影响及其作用机制被引量：2: 2010年; 目的:研究CD40配体激发CD40信号对胃癌细胞AGS生长的影响,并探讨其分子机制,为治疗胃癌的药物研发提供实验依据。方法:以1 mg/L可溶性CD40配体(sCD40L)处理AGS,苔盼兰计数检测CD40激发对细胞增殖的影响;酶联免疫反应检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平,并用抑制剂阻断VEGF信号通路,用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法探讨sCD40L对细胞增殖影响的分子机制。结果:sCD40L处理明显引起AGS细胞增殖;sCD40L激发促进细胞大量分泌VEGF(P<0.05),磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂能完全阻断这种效应(P<0.05);VEGF受体抑制剂能显著减弱sCD40L对AGS细胞的增殖作用(P<0.05),而抗VEGF封闭型抗体则不能(P>0.05)。结论:CD40配体激发信号通过激活VEGF受体信号通路而诱导AGS细胞增殖。因此在CD40作为肿瘤治疗的靶分子时,需要慎重考虑它的激发方式。; 宁永玲戚春建钱科卿; 关键词：CD40 SCD40L VEGF 胃癌

乳腺癌细胞EGFR表达水平与长春瑞滨敏感度的相关性研究: 2014年; 乳腺癌是较早开始个体化治疗的肿瘤之一。表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达与乳腺癌组织学分期、生长速度呈正相关,可作为乳腺癌患者预后的指标之一。临床上,长春瑞滨(Vinorelbine,NVB)主要作为耐药性晚期乳腺癌的挽救性化疗药物,单药治疗亦具有一定疗效。该研究结果发现,乳腺癌组织EGFR表达与NVB的敏感性相关(P=0.001),而与紫杉醇、阿霉素及5-氟尿嘧啶无相关性。EGFR阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435s对NVB耐药,而EGFR阳性细胞MCF-7则敏感,但是EGFR中和性抗体会降低敏感性。进一步研究发现,NVB会引起MCF-7表面EGFR表达上调,以及胞内ERK1/2激酶的磷酸化,且这一效应会被抗EGFR抗体部分抑制。研究结果表明,乳腺癌细胞对NVB的敏感性与膜表面EGFR表达水平相关,提示EGFR可作为NVB治疗敏感性的预测分子。; 宁永玲谢叶文陈洁周洪戚春建; 关键词：表皮细胞生长因子受体乳腺癌

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宁永玲

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