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崔进: 作品数：14 被引量：42H指数：3; 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国际科技合作与交流专项项目广州市科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>

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PRRSV XH-GD株NSP7缺失感染性克隆的构建: 2014年; PRRSV的非结构蛋白NSP7是病毒的一种高度保守的非结构蛋白,NSP7可以进一步水解产生NSP7α,NSP7β。目前对于NSP7的研究相对较少,对其生物学功能尚不清楚。为了进一步了解PRRSV NSP7对于病毒的复制的作用,本试验通过反向遗传平台在PRRSV XH-GD全长病毒骨架中分别对NSP7α,NSP7β,NSP7编码区进行缺失,构建NSP7以及NSP7部分缺失株的全长cDNA的重组质粒,并对构建的重组质粒进行病毒拯救。结果表明,对NSP7α,NSP7β,NSP7缺失对病毒的拯救是致死性的,推测NSP7对于病毒的复制具有重要作用,本研究结果对于NSP7的相关功能研究提供一定的参考依据。; 谢杰雄崔甜甜陈耀张民泽崔进查云峰孙龙赵孟孟邓胜朝张桂红; 关键词：PRRSV

鸡β干扰素的原核表达及抗病毒活性研究: 吴斯宇黄鉴妮崔进冯赛祥廖明焦培荣

鸡β干扰素的原核表达及抗病毒活性检测被引量：2: 2016年; 根据大肠杆菌密码子的偏好性对GenBank中发表的鸡β干扰素基因序列进行密码子优化与人工合成,构建原核表达质粒pET-28b-ChIFN-β,重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,产物主要以包涵体形式存在。包涵体进行变性、复性和镍柱亲和纯化后,SDS-PAGE、Western blot分析表明pET-28b-ChIFN-β表达正确,并且表达量较高。重组鸡β干扰素蛋白在DF-1细胞上能明显抑制水疱性口炎病毒繁殖,抗病毒活性达2.73×10-6UI/mg。本研究结果为鸡β干扰素在临床防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础。; 吴斯宇黄健妮崔进冯赛祥欧阳国文向程威郭旸廖明焦培荣; 关键词：原核表达抗病毒活性

5株口蹄疫病毒VP1和3A基因的序列分析被引量：4: 2016年; 为了解广东地区口蹄疫病毒(FMDV)遗传进化情况,本研究从广东采集5份疑似FMDV感染病料,对样品进行RT-PCR扩增,经克隆测序后,对FMDVs基因序列比对和遗传进化分析。鉴定结果显示,这些病料样品中2份为O型FMDV感染,3份为A型FMDV感染。2个FMDV O型样品中VP1基因的全长均为639 bp,编码213个氨基酸,3A基因的全长均为459 bp,编码153个氨基酸;3个FMDV A型样品中VP1基因的全长均为636 bp,编码212个氨基酸。3A基因的全长均为459 bp,编码153个氨基酸;与国内外分离的O/A型病毒株VP1基因核苷酸序列相比较发现,2个O型病毒VP1基因与O/BY/CHA/2010株核苷酸序列相似性最高(95.0%),均属于耿马谱系FMDV(属ESA基因型);3个A型病毒VP1基因与A/GDMM/CHA/2013株核苷酸序列相似性最高(99.2%),均属于Asia型FMDV。本研究通过对FMDV遗传进化分析为我国FMDV流行病学的研究提供了基础数据,同时对临床上不同型疫苗的选择提供依据。; 石庆伟冯嘉萍陈耀白小磊崔甜甜崔进王林川张桂红; 关键词：口蹄疫病毒 VP1基因 RT-PCR

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7特异性抗体体外抑制病毒复制被引量：3: 2015年; 为进一步探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(Nsp7)在病毒复制过程中发挥的生物学作用,本研究在获得Nsp7可溶性重组蛋白的基础上,首先制备了抗Nsp7蛋白兔源多克隆抗体。确定抗体的免疫活性后,将其与PRRSV共同接种Marc-145细胞。孵育1h后弃掉混合物,加细胞维持液继续培养48h,应用TaqMan探针Real Time PCR方法对培养物中病毒拷贝数进行检查。结果显示,本研究制备的多克隆抗体可以和大肠杆菌表达的Nsp7α、Nsp7β重组蛋白发生特异性结合,并有效用于病毒感染Marc-145细胞后其Nsp7蛋白分布情况的原位检测;更为重要的是,与正常家兔血清相比,不同稀释倍数的抗Nsp7多克隆抗体均可对病毒的复制产生抑制作用,其中10-3倍稀释血清的抑制率可达88.4%。结果表明,Nsp7特异性抗体可有效用于PRRSV抑制试验的研究;Nsp7作为PRRSV复制酶多聚蛋白成员之一,在病毒复制过程中发挥着重要作用。; 刘荣昌张桂红崔进谢杰雄宁章勇王衡; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒抑制

2007-2011年华南地区PRRSV ORF5基因序列分析显示可能出现新亚群: 引言猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的高度接触性传染病.为了更好的了解广东地区PRRS病毒分子流行病学情况,在200...; 谢本雄查云峰张民泽黄震王衡崔进孙龙赵孟孟张桂红

鸽TLR7基因的克隆、鉴定及表达分析被引量：3: 2014年; 【目的】克隆鸽Toll样受体(Toll-like receptor 7,TLR7)全基因,预测其主要功能区域并分析在鸽的各种组织中的表达情况.【方法】通过RT-PCR、RACE、相对荧光定量PCR、生物信息学软件分析方法进行研究.【结果和结论】研究发现鸽TLR7基因cDNA全长3 516 bp,ORF全长3 175 bp,编码1 048个氨基酸.其蛋白结构主要由胞外的富含亮氨酸的结构域(LRRs)、跨膜域(TM)和胞内的Toll/白介素-1受体结构域(TIR)3部分构成.鸽TLR7基因编码的氨基酸序列与鸿雁Anser cygnoides、绿头鸭Anas platyrhynchos、鸡Gallus gallus和麻雀Taeniopygia guttata的相似性均高于78%,与哺乳动物的相似性约为60%,与鱼类的相似性低于55%.鸽TLR7基因在小肠、脾脏、肾脏、肝脏中表达量较高,而在大脑、肺脏、气管、心脏、胰腺、肌肉、皮肤中表达量相对较低.该研究克隆了鸽TLR7全基因,并预测其主要功能区域.; 韩翡焦培荣韦良孟何静宋亚芬康银峰崔进张烁廖明任涛; 关键词：受体表达

广东部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查被引量：18: 2016年; 本试验对临床上猪腹泻相关的病原进行了检测并对广东部分地区的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)展开了分子流行病学的调查。对采集自广东地区的14个规模化猪场的19份腹泻病料进行了RT-PCR检测,并对检出的12株PEDV的COE、ORF3、M以及N基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,临床的腹泻案列多为混合感染所致,检出的主要病原有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、PEDV、猪嵴病毒(PKV)、猪A群轮状病毒(PoRV)以及牛流行性腹泻病毒(BVDV)。与参考毒株CV777相比12株PEDV的COE、ORF3、M、N基因均存在不同程度、不同位点的氨基酸突变。COE、ORF3、M以及N基因的遗传进化分析显示:广东地区的12株PEDV毒株属于同一个分支彼此间的亲缘关系较近但与CV777疫苗毒株以及2012年之前广东地区分离的毒株CHGD-01、CH-GDGZ-2012、GD-1以及GD-A等毒株分属于2个不同的分支,亲缘关系相对较远。结果表明,广东地区现阶段流行的PEDV优势毒株与2012年之前相比可能已经发生了改变,CV777疫苗毒株的免疫效果如何还有待于通过更多的临床实验来验证。; 白小磊崔进崔甜甜陈耀石庆伟冯嘉萍王林川张桂红; 关键词：猪腹泻 PEDV 分子流行病学亲缘关系

鸡α干扰素基因真核表达载体pCAGGS-IFN-α的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2: 2014年; 为了构建鸡α干扰素基因真核表达载体,试验采用RT-PCR方法从鸡胚成纤维细胞中扩增α干扰素基因序列,将扩增产物定向插入到pMD18-T克隆载体中,进行序列测定;测序正确的质粒经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切,将目的基因片段定向克隆到真核表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-IFN-α;将重组质粒转染293T细胞,使用间接免疫荧光、Western-blot等方法检测目的蛋白。结果表明:已成功扩增出582 bp大小的鸡α干扰素基因片段,测序结果与GenBank报道的序列基本一致。说明阳性重组质粒pCAGGS-IFN-α真核表达载体构建成功,能正确表达鸡α干扰素。; 龚浪林宏文崔进宋亚芬张烁邢凯祥李梦徐成刚焦培荣廖明; 关键词：真核表达

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离、鉴定及遗传进化分析被引量：3: 2014年; 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特点,本试验从广东省疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场采集的血清中分离到2株PRRSV,经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,能产生明显细胞病变。2株病毒分别命名为LZ-GD和LB-GD株PRRSV。对2株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和进化分析,结果显示,LZ-GD和LB-GD株的ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株Lelystad株的同源性相对较远,分别仅为63.5%和63.8%,与美洲株经典毒株VR-2332的同源性分别为88.7%和89.1%,与中国高致病美洲毒株JXA-1的同源性分别为99.2%和99.3%。在分离病毒的Nsp2上存在30个氨基酸的不连续缺失,与中国高致病性变异株JXA-1的缺失位置一致,且同源性为99.1%和98.9%,结果表明分离的2株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。; 孙龙刘宇黄震谢杰雄崔进魏春娅陈耀邓胜朝粟硕张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒进化分析

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