张博润
- 作品数：162 被引量：1,305H指数：22
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 具有α-淀粉酶分泌活性以及低双乙酰产量的啤酒酵母工程菌的构建被引量：4
- 2008年
- 扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)因具有较强的α-淀粉酶以及葡聚糖酶活性,使其在以淀粉为唯一碳源的培养基上能够良好的生长。从其基因组中克隆了α-淀粉酶的编码区,构建了由酵母磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子、酿酒酵母α-因子信号序列以及扣囊复膜酵母α-淀粉酶基因编码序列组成的基因表达盒。将该表达盒插入到质粒pPLZ-2的ILV2基因序列内部,使其两翼具有ILV2基因的同源区。将该表达盒通过同源重组的方式整合到啤酒酵母工业菌株YSF-5的α-乙酰乳酸合成酶(AHAS)基因ILV2内部。在以淀粉为唯一碳源的培养基上进行转化子的筛选。通过多对引物PCR、α-淀粉酶活性以及AHAS活性分析对转化子进行鉴定,得到一株具有α-淀粉酶分泌表达活性、较低AHAS活性,并且发酵液中双乙酰产量也相对较低的啤酒酵母工程菌。该菌株在非选择压力条件下连续培养50代后仍然保持其遗传稳定性。还对pH、温度以及金属离子对该转化菌株的α-淀粉酶活性的影响进行了研究。由于所构建的菌株不含有非酵母来源的DNA,所以生物安全性相对较高,对酵母育种以及啤酒生产工业都具有较为重要的意义。
- 张峰王肇悦刘楠何秀萍张博润
- 关键词：Α-淀粉酶双乙酰
- 采用自克隆技术构建高SOD、低双乙酰的啤酒酵母工程菌被引量：1
- 2009年
- 用来源于啤酒酵母自身的超氧化物歧化酶基因SOD1、铜抗性基因CUP1、3-磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子和α-factor基因取代α-乙酰乳酸合成酶基因ILV2内部约1.1kb的片段,得到重组质粒pMC572,采用同源重组的方法将用内切酶酶切质粒pMC572得到的含有SOD1、CUP1、PGK1和α-factor以及ILV2两端序列的片段转化啤酒酵母工业菌株YSF31,并通过铜抗性、PCR和AHAS酶活测定筛选得到转化子。结果表明啤酒酵母工程菌胞内的SOD能够分泌到胞外,乙偶姻的含量也只有受体菌的50%,而其他发酵指标并没有发生变化。
- 母茜蔡勇王肇悦张博润任正隆
- 关键词：啤酒酵母超氧化物歧化酶乙偶姻
- 低双乙酰抗老化啤酒酵母工程菌的构建被引量：29
- 2005年
- 用来源于啤酒酵母的γ_谷氨酰半胱氨酸合成酶基因(GSH1)和铜抗性基因(CUP1)取代质粒pLZ_2中α_乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)内部约2.3kb的DNA片段,构建成重组质粒pICG。限制酶酶切质粒pICG后获得在基因GSH1和CUP1两端含有ILV2序列的6.0kb的DNA片段。用此片段转化啤酒酵母YSF31,得到铜抗性高的转化子。并通过PCR和α_乙酰乳酸合成酶(AHAS)活性测定筛选到酵母工程菌。小试实验结果表明酵母工程菌谷胱甘肽含量比受体高34%,而双乙酰含量是受体的75%。其他发酵指标并没有发生改变。中试实验表明酵母工程菌发酵周期缩短3d,而且成品啤酒的保鲜时间延长50%。由于DNA操作过程中没有外源基因介入,因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株,具有重要的实际应用价值。
- 张吉娜何秀萍郭雪娜刘楠张博润
- 关键词：酿酒酵母谷胱甘肽双乙酰工程菌
- 低乙醇脱氢酶Ⅱ活性的抗老化啤酒酵母工程菌的构建被引量：2
- 2008年
- 采用自克隆技术,破坏啤酒酵母工业菌株YSF31的ADH2基因,在ADH2基因位点插入来源于YSF31的编码γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的GSH1基因和铜抗性筛选标记CUP1基因。通过铜抗性筛选转化子,经PCR和乙醇脱氢酶Ⅱ(ADHⅡ)活性测定验证,获得了1株啤酒酵母工程菌。10°P麦芽汁发酵实验显示,自克隆菌株的乙醇脱氢酶Ⅱ活性是受体菌的65%,谷胱甘肽含量比受体菌YSF31的高34%。其他发酵指标并没有发生明显改变。由于DNA操作过程中没有外源基因介入,因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株,具有重要的应用价值。
- 蔡勇母茜王肇悦张博润晏本菊
- 关键词：谷胱甘肽
- 衔接重复序列对酵母菌絮凝蛋白功能的调控作用被引量：6
- 2012年
- 【目的】了解絮凝基因FLO1中重复DNA序列B和D对絮凝蛋白Flo1p功能的影响,为构建遗传稳定的最小絮凝功能基因奠定理论基础。【方法】通过PCR和融合PCR方法分别克隆到完整的絮凝基因FLO1、重复DNA序列B和D分别缺失的衍生基因FLO1b和FLO1d,分析这些基因在非絮凝酵母中表达对细胞絮凝特性的影响。【结果】与完整絮凝基因相比,重复DNA序列B和D分别缺失后对酵母细胞絮凝强度没有明显影响,但不同基因在酵母菌中表达产生的絮凝特性受环境因素,如甘露糖浓度和pH等的影响有明显差异。FLO1中重复DNA序列B和D缺失后,细胞絮凝特性受甘露糖抑制的敏感性降低;同时对环境pH的改变具有更广泛的适应性。【结论】重复DNA序列B和D对絮凝蛋白Flo1p结构和功能具有调控作用,二者缺失后,特别是D缺失后会使絮凝蛋白在极端酸碱环境下更稳定。
- 李娥娥常琦郭雪娜何秀萍张博润
- 关键词：絮凝
- 酵母类生物饲料产品开发、应用及发展趋势
- 酵母菌在生物饲料生产和产品开发中具有重要作用.本文介绍了与酵母菌相关的生物饲料产品的开发、种类、功能和应用,对基于酵母细胞及细胞内容物的饲用生物制品,以及酵母菌生物发酵饲料相关产品的国内外发展现状进行了综述,并对酵母菌相...
- 白雪晶郭雪娜张博润
- 关键词：生物饲料酵母菌生理机制
- 文献传递
- 纯生啤酒泡沫稳定性的影响因素及改善策略被引量：8
- 2006年
- 简要介绍了纯生啤酒泡沫稳定性的主要影响因素———泡沫阳性蛋白和酵母蛋白酶A对啤酒泡沫的影响及影响机理,并简要介绍了改善纯生啤酒泡沫的主要策略。
- 王肇悦何秀萍刘楠张博润
- 关键词：纯生啤酒蛋白酶A基因敲除
- 中子活化法研究富铬酵母中铬的含量和分布被引量：13
- 1999年
- 利用中子活化法测定了富铬酵母细胞中的生物活性物质、细胞壁以及原生质体中铬的含量。铬通过细胞壁进入细胞后，８０％ 的铬存在于细胞的原生质体内；富铬酵母中的铬主要以生物活性物质的形式存在。表明无机铬化合物在富铬酵母细胞的培养过程中，被酵母细胞吸收。
- 丁文军钱琴芳侯小琳柴之芳丰伟悦陈春英张博润王柯
- 关键词：有机铬铬
- 生物合成γ-氨基丁酸酿酒酵母谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达被引量：5
- 2015年
- 为了提高酵母菌的γ-氨基丁酸产量,本研究以十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethy ammonium bromide,CTAB)提取的酿酒酵母28基因组DNA为模板,扩增得到序列长度为1 758 bp的GAD1基因,经比对与S.cerevisiae S288c的一致性达到98.58%,并设计引物扩增包括GAD1基因上游启动子及调控序列,下游终止子在内的全长基因序列,长度为3 490 bp。将全长基因序列克隆至高拷贝质粒p UG6,构建重组质粒p28。以菌株28作为出发菌株进行转化,经G418抗性筛选得到转化子,进一步经过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)实验验证,质粒提取及酶切验证,确证得到重组子DL28。经重组质粒p28的特性研究得知,重组质粒p28具有良好的遗传稳定性,无抗性传代培养10次重组质粒不丢失。转化后进行酶活力测定,重组子DL28的谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)酶活力比菌株28提高73.8%。通过以上实验结果得出结论,GAD基因高表达菌株DL28具有更高的G418抗性和GAD酶活性。
- 乌云达来张博润郭雪娜王肇悦
- 关键词：酿酒酵母菌Γ-氨基丁酸谷氨酸脱羧酶克隆
- 多形汉逊酵母的诱变及突变株的筛选被引量：1
- 2004年
- 为获得多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)营养缺陷型突变株,以亚硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯(DES)为诱变剂诱变多形汉逊酵母HP 1,使用制霉菌素对诱变后的菌悬液进行富集筛选,并对诱变筛选条件进行了优化,筛选出16株ade、11株ura、8株leu营养缺陷型突变株及1株ura、Mut-(不能利用甲醇)双突变株。
- 李忠海周广麒何秀萍张博润
- 关键词：多形汉逊酵母诱变诱变剂
