张志宏
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目四川省教育厅自然科学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Dicer蛋白的晶体结构及其功能
- 2007年
- 张志宏税青林
- 关键词：RNA干扰核糖核酸酶类
- 反义c-myc对MCF-7细胞端粒酶活性的影响
- 2007年
- 目的研究脂质体LipfectAMINE^TM（LR）介导的c-myc反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞端粒酶活性的影响及其机制。方法端粒重复序列扩增聚丙烯酰胺凝胶电泳（TRAP-PAGE）及端粒重复序列扩增酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）定量检测不同时间段MCF-7细胞的端粒酶活性，流式细胞仪检测c-myc蛋白表达。结果TRAP-PAGE结果显示，c-myc ASODN对MCF-7细胞的作用，随时间的递增（24h、48h、72h），端粒酶梯度条带明显地减少，端粒酶活性明显降低。TRAP-ELISA显示，2．5μmol／L的c-myc ASODN作用MCF-7细胞48h吸光度A值降为0．486±0．041，作用72hA值降为0．263±0．034，与未经任何处理的MCF-7细胞A值0．684±0．031相比，端粒酶活性明显受到抑制，分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。未经任何处理的MCF-7细胞c-myc蛋白阳性率为（99．684±2．937）％，经c-myc ASODN作用48h c-myc蛋白阳性率低至（61．295±2．825）％，c-myc ASODN作用72h c-myc蛋白阳性率低至（29．482±2．726）％。而c-mye正义寡核苷酸（SODN）无上述作用。结论c-myc ASODN能有效降低MCF-7细胞端粒酶活性和c-myc蛋白表达。
- 周进税青林庞振英张志宏
- 关键词：端粒末端转移酶寡核苷酸类反义
- 特异性siRNA抑制hTERT基因表达的位置及时间效应被引量：4
- 2008年
- 为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中hTERT mRNA的表达。与对照组相比,4段siRNA中有3段在转染后12h即对hTERT mRNA的表达产生抑制,48h抑制率最高,72h后下降,其中位于hTERT mRNA二级结构中的结构相对简单区域的siRNA抑制率最高,达到75%,说明特异性siRNA对hTERT基因有明显的抑制效果,且该抑制效应具有位置及时间依赖性。
- 曾永秋税青林赵矫张志宏余红赵小平
- 关键词：SIRNAHTERT基因
- hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。方法设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesil-HK。两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功。转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制;pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P<0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%。结论hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗。
- 张志宏曾永秋税青林田强黄燕赵小平
- 关键词：SIRNA表达载体
- 特异性siRNA抑制hTERT基因表达的位置及时间效应研究
- 为探讨不同位点 siRNA 在不同时间点对人乳腺癌细胞系 MCF-7细胞中 hTERT mRNA 表达的抑制作用．设计并化学合成四对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性 siRNA,以脂质体法转染入 MCF-7...
- 曾永秋赵矫张志宏黄燕税青林
- 文献传递
