张思河
- 作品数：41 被引量：95H指数：6
- 供职机构：南开大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划总后勤部科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 鼠源性Fab抗体库引物的优化与鉴定
- 目的:为改善抗体基因的扩增效率及多样性,优化设计一套针对BALB／c小鼠的Ig重链Fd片段和轻链基因的新简并引物,并对pComb3噬粒载体进行相应改造。方法:基于最新版Kabat数据库巾的小鼠已知Ig抗体功能可变区基因,...
- 张思河邢金良包国强张青陈志南
- 文献传递
- 抗SARS-CoV人源Fab抗体的表达及鉴定
- 2006年
- 为进一步研究抗SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)的中和抗体2g7,对其进行了原核表达,将2g7转入琥珀突变的非抑制性菌株(SupE-)的大肠杆菌Top10F'中进行可溶性表达。用HPLC纯化后,SDA-PAGE显示2g7的轻重链均存在,ELISA,Westernblot检测显示2g7能与SARS-CoV的S1蛋白结合。BIAcore测定其与抗原的亲和力为2.67×10-8mol。竞争ELISA显示该抗体能与SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)结合并阻断该蛋白与其受体ACE2的结合。实验结果表明:利用免疫噬菌体抗体库能在小库容的情况下筛选获得高亲和性的人源抗体,并可以在大肠杆菌中获得高效表达,这一实验结果为有效性地防治病毒性疾病提供了思路。
- 李郁陈江浩包国强张思河宋斐谢丽杨红
- 关键词：刺突蛋白噬菌体抗体FAB
- 3个熟期类型大豆品种发育籽粒脂肪酸组分变化被引量：6
- 2000年
- 超早、极早和中晚 3个熟期类型大豆品种籽粒发育进程中 ,亚油酸含量持续上升 ,棕榈酸和硬脂酸含量缓慢下降 ,油酸含量先增后降 ;3个早熟品种的亚麻酸含量缓慢降低而中熟品种则几乎没有变化。亚油酸与籽粒发育天数呈显著正相关 ,棕榈酸和油酸呈显著负相关 ,其它脂肪酸之间及其与籽粒发育天数之间的相关关系因品种熟期类型而异。
- 张思河尹田夫王萍马淑英陶丹
- 关键词：大豆脂肪酸熟期
- 线粒体信号肽引导葡萄糖调节蛋白75-增强型绿色荧光蛋白(GRP75-EGFP)融合蛋白定位于线粒体被引量：2
- 2016年
- 目的构建葡萄糖调节蛋白75(GRP75)不同结构域、不同形式突变体与线粒体信号肽重组蛋白并鉴定其亚细胞定位。方法通过重叠延伸PCR,将线粒体靶向信号肽序列分别与GRP75不同结构域基因拼接。利用定点突变PCR分别扩增实现62和65位氨基酸突变的磷酸化失活型、磷酸化激活型突变体、482位氨基酸突变的底物结合缺陷型突变体及三位点同时突变重组体。将上述重组基因克隆入p EGFPC1真核表达质粒,酶切和测序验证后分别用脂质体转染He La细胞,Western blot法检测重组蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜观察比较重组蛋白亚细胞定位情况。结果成功构建了线粒体信号肽融合或缺失的GRP75结构域、磷酸化失活和激活突变体、底物结合缺陷突变体真核表达质粒。各重组质粒的片段插入、位点突变、信号肽融合情况均符合设计目的,在He La细胞表达后产物的相对分子质量大小均符合预期。EGFP蛋白C端插入信号肽能引导下游融合的GRP75全长蛋白、结构域片段、突变体蛋白表达定位于He La细胞线粒体中,而缺失信号肽的对应重组蛋白则主要分布于胞质和局部核周。结论构建了一系列GRP75重组真核表达质粒,EGFP融合信号肽能引导重组蛋白在线粒体中表达定位。
- 陈航牛秀然高嫒嫒张思河
- 关键词：重叠延伸PCR
- 食管癌相关基因微卫星不稳定性的研究
- ＜正＞ 食管癌是我国常见的恶性肿瘤,具高发区和家族聚集现象,陕西也为高发区之一,但其发生发展的分子机理至今不清楚,在发病率中可见男性占有绝对优势（2.5:1）,提示雄性激素或X连锁基因在其发生发展中起到重要作用。微卫星不...
- 舒青张思河秦鸿雁张素珍
- 文献传递
- 次声作用对小鼠骨髓多染性红细胞微核的影响
- 目的研究次声对小鼠骨髓细胞染色体的损伤效应。方法BALB/C小鼠经16 Hz、120 dB、2h·d的次声分别作用1、3、7、10 d后取股骨。通过PCE-MNT法和骨髓细胞染色体制备,检测并观察多染性红细胞微核率和分裂...
- 张思河贾克勇舒青张青刘素英陈景藻
- 关键词：次声微核
- 文献传递
- 医学本科生细胞生物学双语教学调查评价被引量：3
- 2005年
- 目的总结对医学本科生开展细胞生物学双语教学的经验和方法.方法问卷调查及分类分析.结果①本科生公共英语水平均达到了接受双语教学的基本条件,专业英语水平表现出不均衡性,英语听力薄弱是多数学员存在的共同问题.②学员对教员的素质要求很高,期望教员具有丰富的专业知识和流利的口语.对课时比例、教材等具体教学手段,不同学员要求不同.③双语教学的教学效果基本上是理想的,但仍有许多地方需改进;双语教学成功与否关键在于教师备课及学员预习.结论必须大力提高教员素质与教学经验,因地制宜确定教学内容,强化学员对专业词汇和背景知识的学习.
- 张思河陈志南邢金良蒋建利
- 关键词：双语教学细胞生物学医学本科生
- 不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较被引量：5
- 2005年
- 目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及pcDNA3 /HAb18G -HCCbooster(DNA -cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠。采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类。用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性。用免疫荧光法验证DNA- cellbooster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性。结果:以GST- HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcD -NA3 /HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA -cellbooster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生。结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础。
- 张思河杨向民邢金良陈志南
- 关键词：HAB18G/CD147免疫方案BOOSTER抗体滴度
- 以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链被引量：1
- 2006年
- 目的:以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板,筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。方法:利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因,克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中,电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序,对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定,以M13K07辅助噬菌体超感染,利用亲和纯化的γ-sm为抗原,对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定。最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库。利用纯化的γ-sm3轮亲和淘筛后,5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体。ELISA进一步检测表明,5个克隆均呈特异性阳性反应,其中2个克隆亲和力较高,测序显示其所含轻链基因序列完全相同,可变区来源于IGKV4-101胚系基因家族。结论:利用鼠源Fd片段为模板,导向筛选杂合噬菌体库,成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。
- 张青张思河易静苏明权包国强郝晓柯
- 关键词：噬菌体抗体库
- PKM2作为肝癌乏氧特异标志物及其在诊断试剂盒中的应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肝癌乏氧的特异分子标志物PKM2及其在精准诊断试剂盒中的应用。PKM2为丙酮酸激酶转录变异体2，是新发现的肝癌乏氧代谢标志分子，其核苷酸序列如序列表中<400>1所示。本发...
- 张思河张青
- 文献传递
