张晓舟
- 作品数：15 被引量：212H指数：8
- 供职机构：南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划农业科技跨越计划项目更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学农业科学更多>>
- 植病生防芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定被引量：51
- 2005年
- 从山东和江苏采集的菜园土样中分离筛选得到4株芽孢杆菌B15、B110、B113和B122,它们均对植物病原真菌具有较强的拮抗能力且具有广谱性。4株芽孢杆菌可以致使黄瓜枯萎病原菌菌丝生长形态异常,出现菌丝前端膨大或变细、菌丝扭曲、分支加剧、生成大量圆珠形囊状体和原生质凝聚等异常现象。通过对4个菌株培养物形态特征的观察和一系列的生理生化实验得到其初步鉴定结果,其中B15和B113为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),B110为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),B122为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
- 张晓舟徐剑宏李顺鹏
- 关键词：拮抗作用芽孢杆菌生物防治
- 甲基对硫磷水解酶酶促反应体系建立及特性研究被引量：6
- 2003年
- 从甲基对硫磷降解菌DLL E4 (Pseudomonasputida)中提取水解酶 ,对其酶促反应进行研究 ,建立了反应体系 :4 74 μLNa2 HPO4 柠檬酸缓冲液 ,12 5 μL甲基对硫磷 ,1 5 μg粗蛋白 ,35℃水浴 5min。水解酶保持稳定的 pH值范围为 5 0～ 10 0 ,最适 pH为 7 0。该酶热不稳定 ,4 5℃ 30min处理 ,酶活下降 5 0 % ;10 0℃ 10min处理可完全灭活。测定了 11种金属离子、TWEEN 80、TritonX 10 0及EDTA对水解酶的作用 ,发现 2 0mmol·L-1CoCl2 对酶活有明显的抑制作用 ,而 2 0～ 0 0 2mmol·L-1的LiCl对酶活有促进作用 ,2mmol·L-1的TWEEN 80和TritonX 10 0可降低 80 %的酶活。
- 刘智马爱芝张晓舟张小华李顺鹏
- 关键词：甲基对硫磷水解酶酶促反应农药污染降解机理
- 甲基对硫磷降解菌DLL-E4降解对-硝基苯酚特性被引量：27
- 2003年
- 甲基对硫磷降解菌DLL-E4(Pseudomonas putida)能以对-硝基苯酚(PNP)为唯一碳源和氮源生长,还可以利用对-硝基苯酚代谢产生的亚硝酸根为唯一氮源.DLL-E4降解对-硝基苯酚的酶系是诱导产生的,甲基对硫磷(MP)和PNP驯化菌株,能有效诱导DLL-E4对PNP的降解,生长延滞期由原来的6h减少到3h,降解完全的时间由9h缩短为7h和6h.对苯二酚(HQ)诱导,降解完全的时间延长为15h.该诱导酶同时能够降解2-硝基酚.DLL-E4菌株中含有大质粒,在丢失对-硝基苯酚降解性状的突变株M+P-中依然存在.
- 刘智洪青张晓舟徐剑宏李顺鹏
- 关键词：对-硝基苯酚亚硝酸根质粒
- 枯草杆菌新型表达系统和遗传操作体系的建立及应用
- 枯草杆菌由于具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础，是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白较理想的宿主。但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的重组表达质粒不太稳定等因素影响，其应用受到一定的限制。近年来，随着分子生...
- 张晓舟
- 关键词：枯草杆菌启动子同源重组基因工程
- 一株特耐酸酵母R1的分离及其耐酸机理研究被引量：7
- 2004年
- 从江西某铜矿的污泥中分离到一株特耐酸酵母菌R1(Rhodotorulasp .) ,能在pH值 1 5～ 6 0的范围内生长 ,最适生长pH为 3 0 ,属于嗜酸菌 ,初步鉴定为红酵母属 (Rhodotorulasp .)。R1在不同培养基中的耐酸能力基本相同。pH冲击实验显示 ,R1通过泵出H+ 吸收K+ 来维持胞内pH的稳定 ,表明膜H+ _ATPase和K+ 在R1耐酸中发挥作用。R1细胞膜的H+ _ATPase活性与R1生长的pH呈负相关。通过PCR克隆了R1的H+ _ATPase基因 (pma) ,并进行了测序 ,序列比较显示该基因的保守性很高。
- 张国顺洪青刘智张晓舟李顺鹏
- 关键词：K^+H^+-ATPASE
- 利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体被引量：2
- 2006年
- 以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。
- 张晓舟闫新崔中利李顺鹏
- 关键词：启动子信号肽分泌表达枯草芽孢杆菌
- 中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1耐盐相关DNA片段的克隆被引量：6
- 2006年
- 通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom onassp.BYS-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.
- 洪青徐剑宏王云端武俊张晓舟李顺鹏
- 关键词：中度嗜盐菌克隆
- 植病生防芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定
- 从山东和江苏采集的菜园土样中分离筛选得到四株芽孢杆菌B15、B110、B113和B122,它们均对植物病原真菌具有较强的拮抗能力且具有广谱性,四株芽孢杆菌可以致使黄瓜枯萎病原菌丝生长形态异常,出现菌丝前端膨大或变细、菌丝...
- 张晓舟徐剑宏李顺鹏
- 关键词：拮抗作用芽孢杆菌生物防治
- 文献传递
- 利用甲基对硫磷降解菌DLL-E4消除农产品表面农药污染的研究被引量：30
- 2003年
- 利用甲基对硫磷降解菌DLL-E4(Pseudomonas sp.)能高效分解甲基对硫磷的特性,研究了消除农产品表面农药残留污染的途径.采用菌体发酵液、发酵液上清液、菌体蛋白、粗酶液、添加菌体蛋白的洗涤剂以及洗涤剂,处理了小青菜、茶叶、黄瓜表面的农药残留污染.结果表明,使用发酵液和不同的酶制剂可以有效去除这些产品表面的农药残留污染,最高去除率可达100％;DLL-E4上清液中有一些酶促反应促进因子,有助于酶更好地发挥作用.洗涤剂和酶直接混合作用,有助于消除茶叶表面的农药残留,但对于黄瓜和小青菜则相反.在所有选用的模式中,使用粗酶液和菌体蛋白效果最好,对黄瓜、小青菜和茶叶合适的酶制剂浓度分别为2％、5％和10％.粗酶液同时还能降解甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱等农药.
- 刘智张晓舟李顺鹏
- 关键词：甲基对硫磷上清菌体蛋白粗酶液
- 甲基对硫磷水解酶基因的克隆与融合表达被引量：24
- 2003年
- 利用鸟枪法从甲基对硫磷降解菌DLL 1Peudomonasputida)中克隆了甲基对硫磷水解酶基因 (mpd)片段2 5kb ,并进行了测序。通过软件分析开放阅读框和启动子序列 ,表明该序列中最可能为甲基对硫磷水解酶结构基因的阅读框为 76 9～ 1 794区域。软件分析还表明该水解酶前端 4 5个氨基酸为典型的信号肽结构。通过PCR扩增了mpd结构基因 ,亚克隆到表达载体pET 32a中 ,构建了完整的融合表达载体pET MP。转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 2～ 4h甲基对硫磷水解酶表达可以达到最高水平 ;同时还研究了乳糖的诱导效果 ,2 %乳糖诱导 2h就可以起到很好的效果。通过PCR反应验证了mpd基因定位于DLL
- 刘智洪青徐剑宏武俊张晓舟张小华马爱芝朱军李顺鹏
- 关键词：鸟枪法基因分析基因定位
