方成
- 作品数：48 被引量：167H指数：7
- 供职机构：武汉轻工大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金湖北省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 草鱼鱼皮胶原蛋白与NIH3T3成纤维细胞的相容性
- 2017年
- 体外检测草鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白(FASC)的细胞相容性。采用MTT实验,检测不同浓度的FASC溶液或FASC涂层胶对NIH3T3成纤维细胞增殖能力的影响(n=6);利用transwell趋化实验,检测不同浓度的FASC溶液对成纤维细胞的趋化作用(n=3);利用transwell侵袭实验,检测不同浓度FASC涂层胶的细胞通透性(n=3)。结果表明,FASC溶液浓度依赖性地促进NIH3T3成纤维细胞增殖,16μg/mL的FASC溶液在48和96 h的增殖率分别为63.7%±7.9%和87.3%±8.7%,较对照组有显著性差异(P<0.001)。NIH3T3细胞能够在FASC涂层胶上生长,各实验组与对照组相比,增殖率均无显著性差异(P>0.05)。趋化实验显示,FASC溶液各浓度梯度组与阴性对照组的趋化指数均有显著性差异(P<0.05),提示FASC对成纤维细胞具有趋化作用。侵袭实验结果显示,成纤维细胞可以通过FASC涂层胶。实验证实,FASC与NIH3T3细胞具有良好的相容性。
- 余兰汪海波陈卓方成
- 关键词：胶原蛋白鱼皮草鱼成纤维细胞细胞相容性
- 一种波形蛋白的提纯方法
- 本发明提供了一种波形蛋白的提纯方法，属于蛋白提纯技术领域。本发明以猪脑为原材料，通过两次盐溶液洗涤去除猪脑中盐溶性蛋白和肌球蛋白(杂蛋白，等电点接近5，通过盐溶液萃取去除)，然后利用pH值小于蛋白质等电点时，阴离子表面活...
- 叶蜜高翔方成
- 一种含波形蛋白的佐剂及应用
- 本发明属于免疫学技术领域，公开了一种波形蛋白佐剂，将波形蛋白佐剂与抗原成分一起制备疫苗剂，能提高抗原特异性抗体水平，增加外周血淋巴细胞数量，其增强机体免疫应答的效果优于铝佐剂。经过重复毒性试验，波形蛋白注射无毒副反应、安...
- 方成樊凡
- 文献传递
- 吻合血管同种异体骨移植进展
- 2002年
- 方成陈振光喻爱喜
- 关键词：吻合血管同种异体骨移植免疫抑制剂免疫调控
- 慢性排斥肾移植大鼠继发对自身组织蛋白vimentin的细胞和体液免疫反应被引量：4
- 2012年
- 目的:研究慢性排斥肾移植受体对自身组织抗原——波形蛋白(vimentin)的细胞和体液免疫反应。方法:近交系Lewis大鼠接受F344大鼠供肾行左侧原位肾移植,7天后对侧肾切除,建立肾移植慢性排斥反应模型。术后每2周检测受体蛋白尿水平,术后第49天与98天取供肾作病理检查,观察慢性移植肾肾病(CAN)进程。术后第14、49、98天收获受体脾细胞,以酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测vimentin特异性IFN-γ分泌T细胞的数量;收获受体血清以酶联免疫吸附法(ELISA)检测vimentin特异性抗体水平。自体肾移植Lewis大鼠持续行肾功能检测,第98天收获肾脏、脾脏、血清作病理及免疫检测。结果:同种肾移植受体蛋白尿水平在6周后逐渐升高,49天时病理检查发现肾间质纤维化、肾小管萎缩等典型CAN病变,CAN病情逐渐加重。而自体肾移植大鼠术后98天蛋白尿水平无改变,无CAN病变。经体外vimentin特异性刺激,同种肾移植大鼠IFN-γ分泌T细胞的数量在肾移植后49天明显增多(28.3±2.0 vs.10.1±2.1),98天时其数量显著上升(126.0±10.4vs.26.3±4.1,P<0.01)。而自体肾移植大鼠vimentin特异性IFN-γ分泌T细胞数量无明显变化。同种肾移植大鼠vimentin特异性抗体水平术后14天即显著升高(0.230±0.018 vs.0.063±0.008,P<0.05),并维持在较高水平。而自体肾移植大鼠vimentin特异性抗体水平无明显改变。结论:慢性排斥肾移植受体继发针对自身抗原vimentin的细胞与体液免疫反应,继发自身免疫可能参与CAN的发展。
- 方成李琦刘立陈薇胡汉宁梁慧芳王加谋瞿永华谢德芳
- 关键词：波形蛋白肾移植慢性排斥
- 一种提取纯化波形蛋白的方法
- 本发明首次公开一种提取纯化波形蛋白的方法，解决了既有文献报道的波形蛋白提取工艺复杂、成本高、周期长的问题。本发明以猪眼晶状体为原料，经粗提、精提、分离、纯化和透析后制成冻干粉。在分离步骤中使用DEAE Sepharose...
- 方成陈卓
- 文献传递
- 一种斑马鱼肠道粘膜上皮细胞分离和原代培养方法
- 本发明公开一种斑马鱼肠道粘膜上皮细胞分离和原代培养方法。本发明的技术方案中，首先，将斑马鱼置于含抗生素的水体中禁食培养来解决斑马鱼肠道微生物自身污染的问题；然后通过斑马鱼肠道部位的选取，选取最能反应斑马鱼肠道功能的肠道样...
- 刘亚军刘文斌王旋方成
- 文献传递
- 以SRY为靶基因建立免疫耐受嵌合的定量检测方法
- 2012年
- 建立免疫耐受嵌合的定量检测方法。以性别决定因子(SRY)作为检测靶基因,利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,建立大鼠的同种异体移植血细胞嵌合率的检测方法。获得严格的直线型标准曲线,线性相关系数r>0.99,准确反映了血细胞嵌合率的数量关系,敏感度可达4μg/L(0.1%)。
- 瞿永华方成
- 关键词：免疫耐受嵌合聚合酶链反应
- 三氧化二砷抑制骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的研究被引量：9
- 2003年
- 目的 研究三氧化二砷 (As2 O3 )对骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的影响。方法 应用噻唑蓝 (MTT)法和集落形成能力测定、形态学观察、流式细胞术和电镜观察等方法检测和观察As2 O3 对骨肉瘤细胞株MG 63及二倍体细胞株MRC 5增殖的影响。结果 As2 O3 对骨肉瘤细胞及二倍体细胞株的增殖有抑制作用 ,并具有时间依赖性和一定范围内的剂量依赖性。≥ 1μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63骨肉瘤细胞的抑制率达 70 % ,而≥ 8μmol/L浓度的As2 O3 对MRC 5细胞的增殖才达到相近的抑制率 ;0 .5～ 2 .0 μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63细胞的生长抑制率高 ,而对MRC 5细胞的生长抑制率低 ,表现为明显的选择性抑制 ( P <0 .0 1)。 1μmol/LAs2 O3 处理的MG 63细胞第 3天呈典型的凋亡形态学改变 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期细胞前出现明显亚二倍体峰 ,凋亡率与As2 O3 处理时间呈正相关 ;MRC 5细胞则未见明显凋亡峰。结论 As2 O3 通过诱导细胞凋亡抑制骨肉瘤细胞和二倍体细胞增殖 ,在一定浓度内As2 O3 可选择性抑制骨肉瘤细胞的生长增殖。
- 方成陈振光喻爱喜祝少博
- 关键词：三氧化二砷骨肉瘤二倍体细胞流式细胞术
- 交联方法对草鱼皮胶原蛋白海绵性能的影响被引量：8
- 2013年
- 为探讨不同交联方法对草鱼皮胶原蛋白海绵材料性能的影响,实验以草鱼鱼皮为原料,提取、纯化胶原蛋白并制备胶原海绵材料。在此基础上,分别用紫外交联、热交联、戊二醛交联以及EDC/NHS交联方法处理胶原海绵,通过测定材料的交联度、热变性温度、拉伸强度和体外抗酶降解性能,比较了不同方法的交联效果。结果发现,提取所得的草鱼皮胶原蛋白为典型的Ⅰ型胶原;经不同方法交联处理后,海绵材料交联度依次为戊二醛(72.0%)>EDC/NHS(32.5%)>热交联(29.9%)>紫外交联(15.6%);与对照胶原材料相比,戊二醛处理后,胶原材料的热变性峰值温度(67.4℃)、最大拉伸强度(125.6 kPa)和体外抗酶降解性能均有显著提升(P<0.05);EDC/NHS处理后,胶原材料的热变性焓显著提升(6.86 J/g),同时材料的拉伸强度(98.6 kPa)和体外抗酶降解性能也得到适度增加(P<0.05)。紫外交联和热交联对草鱼皮胶原材料性能的改善作用比较有限,并可能导致胶原分子的部分变性。红外光谱的分析结果表明,戊二醛处理可导致草鱼皮胶原三螺旋分子内产生新的共价键交联从而使材料性能改善,而EDC/NHS处理主要导致胶原分子间产生新的氢键交联并可提高胶原材料的稳定性。研究表明,戊二醛和EDC/NHS交联能有效提高胶原海绵材料的性能,而热交联和紫外交联对材料性能的改善作用非常有限。
- 汪海波梁艳萍李云雁王敏方成汪海婴
- 关键词：草鱼鱼皮胶原蛋白交联
