晏芳
- 作品数：16 被引量：65H指数：4
- 供职机构：南方医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 钙介导As_2O_3诱导的线粒体通透性转变孔道开放
- 2006年
- 目的研究Ca2+在As2O3介导的PTP开放中的作用,探讨As2O3诱导粒体通透性转变孔道(PTP)开放的机制。方法提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;借助荧光探针Rh123检测线粒体膜电位的变化。结果用10μmol/LAs2O3加10μmol/LCa2+处理线粒体,PTP开放。单独使用10μmol/LAs2O3处理,或先用0.5mmol/LEGTA螯合Ca2+,然后用10μmol/LAs2O3加10μmol/LCa2+处理,线粒体D540不下降。分别用0、5、10和20μmol/LAs2O3处理线粒体,D540变化可分别被50、20、10和5μmol/LCa2+介导。结论Ca2+能介导As2O3诱导的PTP开放;As2O3诱导细胞凋亡通过降低诱发PTP开放所需的Ca2+阈值促使PTP开放,有可能通过调节细胞内的Ca2+来调控线粒体PTP开放进而调控细胞凋亡。
- 乔东访马安德晏芳王慧君
- 关键词：AS2O3线粒体细胞凋亡
- 组织学与胚胎学实验教学的体会与探讨被引量：3
- 2012年
- 在组织学与胚胎学实验课的教学过程中,从各章节授课顺序、显微镜使用所占的课堂比例、授课方式方法的改变以及对各专业学生教学侧重点的不同等方面,就如何进一步提高教学质量,激发学生学习兴趣进行探讨。
- 晏芳
- 关键词：组织学与胚胎学实验教学教学方法
- 白藜芦醇对D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠海马神经元的保护作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨白藜芦醇对亚急性衰老小鼠海马神经细胞的保护作用。方法 D-半乳糖颈背部皮下注射制备亚急性衰老小鼠模型,设正常对照组、对照组、高低剂量处理组和阳性对照组。第3周始,处理组分别给予白藜芦醇15、45mg/kg(低、高剂量)灌胃,对照组给予生理盐水或DMSO溶液灌胃。8周后,检测小鼠血清、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。制作石蜡切片,尼氏染色观察小鼠海马CA1区形态结构,免疫组化检测P53蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果各组小鼠海马组织形态结构无明显变化;与对照组相比,白藜芦醇45 mg/kg体重组小鼠血清和脑组织中SOD活性明显升高,MDA含量明显下降;白藜芦醇45 mg/kg体重组小鼠海马CA1区P53蛋白表达阳性细胞较对照组小鼠减少,但各组均无明显的凋亡细胞。结论白藜芦醇能增强亚急性衰老小鼠的抗氧化功能,降低亚急性衰老小鼠海马CA1区神经元P53蛋白的表达。
- 姚新梅晏芳田雪梅
- 关键词：白藜芦醇D-半乳糖衰老海马神经细胞
- 白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡被引量：13
- 2006年
- 目的研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodamine123和TMRE标记细胞线粒体膜电位(ΔΨ),并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇(≤25 μmol/L)对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇(>25μmol/L)显著地抑制HepGZ细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性(F=18．532,P<0．05);流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0．05);白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。
- 马晓冬晏芳马安德王慧君
- 关键词：白藜芦醇细胞凋亡HEPG2细胞线粒体膜电位
- 探讨阿糖胞苷在原代大鼠海马神经元培养中的纯化方法被引量：6
- 2015年
- 目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)在原代大鼠海马神经元早期纯化培养中的优化方法。方法新生1d SD大鼠海马神经元原代培养48 h后,不同浓度(0、2.5、5.0、7.5、10 mmol/L)Ara-C处理0、6、12、24 h,光镜下观察细胞形态,采用MTT检测细胞活性,并通过细胞形态学分析神经元纯度,筛选出最优纯化浓度与时间;采用免疫荧光及Western blot技术检测微管相关蛋白2(MAP2)进一步检测神经元纯度,台盼蓝染色分析神经元存活率。结果大鼠原代海马神经元培养48 h,5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的神经元纯度及活性最佳;MAP2免疫荧光染色结果显示,Ara-C处理组神经元纯度为(74.28±10.13)%,显著高于对照组(34.82±8.15)%(P=0.000);Western Blot结果显示Ara-C处理组MAP2蛋白水平显著高于对照组(P=0.008);台盼蓝染色显示Ara-C处理组与对照组间海马神经元存活率无差异,分别为(93.2±3.82)%和(95.6±2.37)%(P=0.109)。结论在大鼠原代海马神经元的早期培养过程中,5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的海马神经元的纯度与活性最佳。
- 李昂晏芳李振林刘忠英张琳董为人牛红心王海红
- 关键词：阿糖胞苷海马神经元纯化培养存活率
- 真核表达质粒pcDNA3.1-tau的构建及在HEK293细胞中的稳定表达
- 2011年
- 背景:阿尔茨海默病患者的痴呆症状严重程度与脑组织中的神经原纤维缠结数量呈正相关,神经原纤维缠结的主要蛋白成分为过度磷酸化的蛋白tau,tau蛋白的病理改变出现在痴呆症状之前并独立于β-淀粉样多肽的异常。目的:构建tau基因的真核表达质粒,建立稳定表达tau的稳转细胞株。方法:采用反转录-聚合酶链反应方法,从反转录反应合成的人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)的总cDNA中,扩增出约1.0kb的tau cDNA片段,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;用脂质体介导法将质粒转染入培养的人胚肾细胞,并利用G418进行稳定表达tau的稳转细胞株的筛选,免疫印迹和免疫荧光细胞化学方法检测tau基因的表达。结果与结论:人tau cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中;免疫印迹和免疫荧光细胞化学结果显示人tau基因在人胚肾细胞中获得表达,tau蛋白表达的阳性信号主要位于细胞胞质,说明成功构建了pcDNA3.1-tau的真核表达质粒,建立了稳定表达tau的稳转细胞株。
- 王海红董为人张琳晏芳刘忠英李妍
- 关键词：基因克隆TAU转染真核表达质粒
- Zn^(2+)对PTP开放和细胞色素c释放的浓度依赖性双向调节
- 2005年
- 研究Zn2+对Ca2+介导线粒体通透过渡孔道(PTP)开放和线粒体细胞色素c释放的影响,及其与线粒体膜电位(ΔΨm)和Ca2+介导的线粒体Ca2+释放(mCICR)之间的关系.提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测不同浓度Zn2+作用下Ca2+介导的PTP开放状态;采用荧光分光光度仪测定不同浓度Zn2+作用下线粒体膜电位的变化;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测不同浓度Zn2+作用下测试体系内Ca2+浓度的变化,以反映线粒体Ca2+的转运情况(即mCICR);通过免疫印迹法检测不同浓度Zn2+作用下Ca2+介导的线粒体细胞色素c的释放.高浓度Zn2+完全抑制Ca2+介导的PTP开放和细胞色素c释放.一定浓度的Zn2+部分抑制Ca2+介导的PTP开放和细胞色素c释放.适当浓度Zn2+自身介导PTP开放和细胞色素c释放.低浓度Zn2+加速Ca2+介导PTP开放和Ca2+释放;高浓度和一定浓度Zn2+分别完全或部分破坏ΔΨm;高浓度Zn2+完全抑制mCICR.当抑制mCICR时,Ca2+和Zn2+对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制.结果表明,Zn2+以浓度依赖方式双向调节PTP开放和细胞色素c释放.Zn2+的作用可能与Zn2+破坏ΔΨm和影响mCICR相关.
- 马晓冬乔东访晏芳马安德田雪梅
- 关键词：ZN^2+细胞色素C膜电位线粒体
- 流式细胞技术检测线粒体通透转变孔道开放被引量：1
- 2010年
- 目的通过白藜芦醇诱导线粒体通透过渡孔道(PTP)开放模型,介绍一种使用流式细胞技术检测线粒体PTP的新方法。方法提取大鼠肝脏线粒体,使用荧光探针NAO(nonylacridine orange)选择性的标记单个线粒体;TMRE标记检测线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测线粒体的侧向散射角(SSC)改变来反映白藜芦醇诱导的线粒体肿胀,即PTP的开放。结果 NAO标记线粒体结合流式细胞技术可以确定从细胞中分离线粒体的纯度;白藜芦醇处理线粒体后引起了TMRE荧光强度的降低以及SSC的减少,说明白藜芦醇可以诱导PTP开放,环孢霉素A(CsA)可以抑制白藜芦醇诱导的PTP开放。结论流式细胞技术可以准确的检测线粒体膜电位、线粒体的肿胀程度和PTP的开放。
- 晏芳马晓冬田雪梅
- 关键词：流式细胞技术线粒体
- 乳腺持续表达外源基因的机理研究
- 乳腺生物反应器是生产生物制药和天然珍贵保健品的非常有前景的生物制药技术,具有天然、价廉和开发周期短的优越性,受到广泛关注.当前的主要问题是,如何进一步揭示乳蛋白表达的调控机制,使目的基因通过大动物的乳腺得到较高水平的表达...
- 安靓李进田雪梅于晓明晏芳陈远泉
- 关键词：乳腺转基因
- 文献传递
- 三氧化二砷诱导线粒体通透性转变孔道开放的机制研究被引量：21
- 2006年
- 背景与目的:线粒体通透性转变孔道(permeabilitytransitionpore,PTP)是线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的主要途径,亚砷酸盐可能通过PTP影响细胞凋亡,为了揭示其诱导PTP开放的机制,本实验研究了Ca2+介导的线粒体Ca2+释放(Ca2+-inducedCa2+releasefrommitochondria,mCICR)在As2O3介导的PTP开放及细胞色素C释放中的作用。方法:提取大鼠肝线粒体。通过紫外分光光度仪检测As2O3作用下线粒体的膨胀,测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测As2O3作用下测试体系内Ca2+浓度的变化引起的吸光度值的变化,以反映线粒体Ca2+的转运(即mCICR)情况;Westernblot检测线粒体上清液中细胞色素c的含量,反映线粒体释放细胞色素c的情况。结果:10μmol/LAs2O3和低浓度Ca2+不能引起PTP开放和细胞色素c释放,10μmol/LAs2O3和高浓度Ca2+诱导PTP开放和细胞色素c释放;当抑制mCICR时,As2O3和Ca2+对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制。结论:As2O3介导的PTP开放和细胞色素c释放依赖于mCICR。
- 马晓冬乔东访田雪梅晏芳马安德
- 关键词：白血病AS2O3钙转运线粒体细胞凋亡
