李玮妮
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测
- 2013年
- 目的:构建组蛋白H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础。方法:扩增H2A、H2B、H3、H4蛋白基因编码区cDNA序列,克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基因有无自激活作用。结果:将H2A、H2B、H3、H4基因的cDNA克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,其中组蛋白H4得到正确表达,且对报告基因LacZ、HIS3、Ade无激活作用。结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与H4相互作用的蛋白质。
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- 关键词：组蛋白酵母双杂交表观遗传
- 慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素(puromycin)筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。
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- 关键词：慢病毒属UBC9ERΒRNA干扰
- 一种快速构建基因多个点突变体方法的建立被引量：1
- 2013年
- 蛋白质内部多个位点的翻译后修饰在基因的功能调节过程中发挥重要作用,基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,因此,高效、快速构建基因的多个点突变体在基因的功能研究中意义重大.本研究在建立了对目的基因进行高效准确的单点突变方法的基础上,以SRrp53点突变体的构建为例,设计了新型的以反向PCR为基础的多个点突变的实验流程,获得的多位点突变体质粒经测序后均与预期相符,将测序正确的多位点突变体质粒转染293T细胞后,均表达了分子质量正确的蛋白质.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因多个点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础.
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- 关键词：反向PCR
- 慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:建立稳定高表达雌激素受体β(ERβ)蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株,检测其对上皮细胞间质转化(EMT)相关基因的影响。方法:将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后收集病毒上清,感染乳腺癌ZR75-1细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达含Myc标签的人ERβ的混合细胞集落,以及作为对照组整合有对照慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro的混合细胞集落,提取细胞蛋白,用Myc抗体检测Myc-ERβ融合蛋白的表达,同时检测EMT相关基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin的表达水平和GSK-3β的磷酸化水平。结果:建立了稳定高表达Myc-ERβ融合蛋白的乳腺癌细胞株,和对照组相比,Myc-ERβ高表达抑制EMT相关蛋白N-cadherin和Snail的表达,增强E-cadherin分子的表达,抑制GSK-3β磷酸化水平。结论:建立了Myc-ERβ高表达的乳腺癌细胞株,发现ERβ高表达抑制EMT相关分子的表达,为深入研究分子在乳腺癌中调控的机制奠定了基础。
- 李玮妮陈立涵程龙付洁林亚红刘婕张浩叶棋浓
- 关键词：上皮细胞间质转化雌激素受体乳腺癌
