李萌
- 作品数:9 被引量:7H指数:1
- 供职机构:天津农学院更多>>
- 发文基金:天津市自然科学基金国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域:农业科学医药卫生更多>>
- 共表达SAL-2和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种共表达SAL-2基因和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒载体的构建方法及重组腺病毒和应用,采用从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组和人乳体细胞总RNA中分别扩增出的SAL-2基因和hLYZ基因,将获得的目的基因克隆到p...
- 金天明李萌龙雨清张东超弓建芳高珂珂李小慧林静
- 文献传递
- 利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用,采用从C57BL/6小鼠的胸腺DNA、小鼠黑色素瘤B16细胞总RNA和新城疫病毒(NDV)LaSota株中分别扩增出...
- 金天明龙雨清李萌张东超弓建芳李小慧高珂珂
- 肉鸡禽呼肠孤病毒与巴氏杆菌混合感染的鉴别诊断被引量:6
- 2015年
- 2014年11月河北某规模化鸡场一批4周龄左右的肉鸡发病死亡,临床表现为精神沉郁、呼吸困难、关节肿大、跛行等症状,为对此疫病进行确诊,通过病理组织学观察、细菌分离、PCR检测、药敏试验、动物致病性试验等实验室诊断方法进行系统分析。病理组织学观察结果显示肺脏出血,心脏、肝脏水肿,并伴有异嗜性粒细胞浸润;镜检可见两极深染的短杆菌;用多杀性巴氏杆菌KMT-1基因和禽呼肠孤病毒(ARV)σB基因特异性引物的扩增结果均为阳性;该巴氏杆菌分离菌可致死小鼠,且对头孢曲松、头孢哌酮等药物高度敏感。根据上述实验室检测结果并结合临床症状进行综合分析,最终确诊该病为ARV和巴氏杆菌混合感染。
- 张东超杨宁宁龙雨清李萌李小慧弓建芳高珂珂金天明
- 关键词:禽呼肠孤病毒巴氏杆菌
- 共表达内溶素和人溶菌酶基因的重组腺病毒构建
- 2015年
- 为研究内溶素SAL-2和人溶菌酶h LYZ的联合抑菌作用,本研究通过PCR方法分别从携带SAL-2和h LYZ基因的质粒中扩增目的片段,连接至腺病毒穿梭载体的多克隆位点上,构建重组穿梭载体p Shuttle-SAL和p Shuttle-LYZ。成功构建的重组穿梭质粒与Ad-easy骨架质粒在BJ5183中发生同源重组,重组得到的阳性重组腺病毒载体在脂质体介导下转染HEK293细胞,包装产生重组腺病毒Ad-SAL、Ad-LYZ、Ad-SALLYZ和对照重组腺病毒Ad-GFP,通过RT-PCR和Western blot方法检测mR NA和蛋白表达后,将构建的重组腺病毒进行扩增纯化并测定病毒滴度。结果表明,成功构建的重组腺病毒感染细胞后,SAL-2和h LYZ基因的mR NA均有表达,Western blot分别检测到28.6 ku和14.7 ku目的蛋白条带。扩增纯化后经TCID50方法检测病毒滴度分别为108.17TCID50/mL、108.50TCID50/mL、108.63TCID50/mL和107.60TCID50/mL。表明成功构建包装的重组腺病毒对HEK293细胞具有较强的感染能力,可稳定介导SAL-2基因和h LYZ基因在HEK293细胞中的表达。
- 李萌龙雨清张东超弓建芳李小慧高珂珂金天明
- 关键词:人溶菌酶共表达重组腺病毒
- 共表达SAL-2和hLYZ基因重组腺病毒的构建及其抑菌效果评价
- 内溶素(virolysin)是噬菌体感染宿主菌后期产生的一种细胞壁水解酶,通过水解宿主菌细胞壁成分间的连接键实现裂解细菌的目的。SAL-2是短尾病毒科金黄色葡萄球菌噬菌体SAP-2产生的一种内溶素,其可以有效移除金黄色葡...
- 李萌
- 关键词:重组腺病毒
- 新城疫病毒HN蛋白的抑瘤机制及其研究进展
- 2014年
- 新城疫病毒囊膜上较大的纤突样糖蛋白由新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(HN)基因编码。HN蛋白即血凝素-神经氨酸酶蛋白,它不仅介导病毒吸附于肿瘤细胞,而且与融合蛋白一起帮助病毒侵入肿瘤细胞,其神经氨酸酶活性能水解宿主细胞表面的唾液酸,暴露宿主细胞的生物识别位点。它还能够水解病毒粒子表面糖链末端的唾液酸,防止病毒粒子在宿主表面簇集,并且能够引入新的粘附因子和免疫原性分子,诱导机体免疫系统识别。
- 高静董东晓龙雨清李萌李留安金天明
- 关键词:新城疫病毒HN蛋白抑瘤机制
- mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因重组腺病毒的构建被引量:1
- 2016年
- 选择新城疫病毒(NDV)的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因作为黑色素瘤的治疗基因。将小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)启动子、小鼠黑色素瘤酪氨酸酶(Tyr)特异性启动子核心片段以及HN基因分别插入到腺病毒载体穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2的多克隆位点处,将克隆成功的穿梭载体经Pme I线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183感受态细胞中进行同源重组,成功构建了肿瘤特异性和组织特异性双启动子调控的HN基因的重组腺病毒载体pAd-mTERTp-mTyrp-HN。将重组腺病毒通过脂质体法转染HEK 293细胞,经RT-PCR鉴定及Western-blotting对HN蛋白的表达水平分析后,大量扩增病毒,经CSCl密度梯度超速离心法纯化病毒颗粒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒Ad-HN、Ad-mTERTp-HN、Ad-Tyrp-HN、Ad-mTERTp-TyrpHN和Ad-GFP的最终滴度分别为108.7、109.5、109.25、109.625和109.125,将为下一步利用该重组腺病毒在体内外诱导小鼠黑色素瘤细胞系B16的凋亡及研制动物肿瘤性疾病的基因疫苗提供了理论依据。
- 龙雨清李萌张东超弓建芳李小慧高珂珂金天明
- 关键词:重组腺病毒HN基因
- 利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用,采用从C57BL/6小鼠的胸腺DNA、小鼠黑色素瘤B16细胞总RNA和新城疫病毒(NDV)LaSota株中分别扩增出...
- 金天明龙雨清李萌张东超弓建芳李小慧高珂珂
- 文献传递
- 共表达SAL‑2和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用
- 本发明公开了一种共表达SAL‑2基因和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒载体的构建方法及重组腺病毒和应用,采用从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组和人乳体细胞总RNA中分别扩增出的SAL‑2基因和hLYZ基因,将获得的目的基因克隆到p...
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- 文献传递