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下调CD59的表达可以抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡被引量：5: 2014年; 目的采用RNA干扰与噬菌体肽库展示技术2种方法干预宫颈癌HeLa细胞CD59的表达,以探讨比较2种CD59低表达方式对HeLa细胞增殖与凋亡的影响。方法将10μg/mL的CD59短肽封条作用于HeLa细胞8 h后,联合CD59干扰质粒pSUPER-siCD59稳定转染HeLa细胞系,采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用TUNEL染色、annexin V-PE/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 CD59短肽封条组与pSUPER-siCD59质粒稳定转染细胞组HeLa细胞增殖明显弱于对照组,TUNEL及流式细胞术检测结果显示2组处理细胞均存在细胞凋亡现象,且短肽封条的效果要好于pSUPER-siCD59质粒。结论下调CD59表达能抑制其细胞增殖并促进其凋亡,且短肽封条效果要优于CD59 RNA干扰质粒。; 高美华李营张蓓王冰梁洁李园园; 关键词：CD59 RNA干扰 HELA细胞增殖凋亡

T细胞活化连接蛋白脂筏定位功能缺失影响T细胞内CD59信号转导的功能被引量：2: 2013年; 目的用前期构建好的T细胞活化连接蛋白(LAT)-EGFP质粒,基因点突变技术使LAT-EGFP的棕榈酰化位点突变,使LAT-EGFP-M(棕榈酰化位点突变的LAT-EGFP)的细胞膜定位功能缺失,抗体交联CD59后观察T细胞信号活化状态的改变。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后,共聚焦荧光显微镜下观察LAT分布情况的变化;用噻唑蓝(MTT)比色法检测抗体交联前后各组Jurkat细胞增殖情况差别;应用ELISA检测各组细胞上清中IL-2的变化水平;用Western blot技术检测抗体交联后LAT-EGFP和LAT-EGFP-M的磷酸化程度。结果抗体交联CD59之后,LAT-EGFP-M较LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏区域,并且转染了突变LAT-EGFP-M质粒的Jurkat细胞增殖速度和IL-2分泌能力低于转染LAT-EGFP质粒、转染空载体EGFP-N3及未转染的细胞。LAT-EGFP-M的磷酸化程度远低于LAT-EGFP。结论棕榈酰化位点缺失的LAT会减弱CD59在T细胞中的信号转导功能。; 秦云高美华王冰张蓓李园园李营梁洁; 关键词：CD59 T淋巴细胞

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究被引量：16: 2014年; 目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P<0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P<0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P<0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P<0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。; 王十锦张蓓王丽梁洁耿霄周文超; 关键词：TH17细胞调节性T细胞刀豆蛋白A 肝损伤

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比值变化的意义被引量：11: 2014年; 目的测定慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)和CD4+IL-17+T细胞(Th17细胞)频率及其相关细胞因子的变化,并探讨Th17/Treg平衡在CHB发病过程中的作用。方法选取CHB住院患者(CHB组)60例,其中35例轻中度CHB患者(CHB-LM),25例慢性重型肝炎患者(CSHB),同时选取21位健康体检者作为正常对照组(HC)。流式细胞术检测外周血中Th17和Treg的细胞频数,双抗体夹心ELISA检测血清中IL-17、IL-23、IL-10及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平。结果与HC组相比,CHB患者外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子IL-17、IL-23浓度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);Treg频率及其相关细胞因子IL-10及TGF-β1浓度明显增高。Th17/Treg比值变化显示,与HC组相比,在CHB组中该比例明显升高,具有显著性差异,且与CHSB组相比,在CHB-LM组中该比值明显降低。结论 Th17细胞/Treg的失衡是造成慢性乙型肝炎病程演变的重要因素,检测Th17细胞/Treg比值变化对疾病发展的早期预测有一定价值。; 耿霄张蓓周文超梁洁王丽王十锦; 关键词：慢性乙型肝炎 TH17细胞调节性T细胞 IL-17 TGF-Β1

刀豆蛋白A诱导Wistar大鼠肝纤维化模型的建立被引量：11: 2013年; 目的:建立Wistar大鼠肝纤维化模型。方法:50只Wistar大鼠随机分成两组。实验组(E组)30只,经尾静脉注射12.5 mg/kg剂量的刀豆蛋白A(ConA),每周1次,10只大鼠在第4次注射1周后处死,其余20只8周后处死。正常对照组(N组)20只,大鼠经尾静脉注射300μl的PBS,第8次注射1周后处死。取大鼠肝脏计算肝脏指数并进行肝纤维化评分,做HE和Masson Trichrome染色,显微镜下观察肝脏的病理变化。取血清测ALT、AST、TP及ALB。结果:与对照组相比,实验组连续注射ConA 8周的大鼠ALT、AST显著升高,TP变化不明显,ALB及白球比显著降低。肝脏体积增大,肝脏指数增高,病理分析示明显纤维化。结论:反复尾静脉注射ConA可成功诱导Wistar大鼠肝脏纤维化模型的建立。; 梁洁张蓓刘佳宝张希东李园园王十锦王丽周文超耿霄; 关键词：肝纤维化动物模型刀豆蛋白A WISTAR大鼠

活化/抑制CD59对T淋巴细胞增殖的影响被引量：4: 2014年; 目的:研究活化/抑制CD59分子对T细胞增殖的影响。方法:Jurkat细胞分别电转入pSUPER-siCD59质粒及用CD59活化抗体刺激。激光共聚焦显微镜下观察细胞的电转情况及CD59分子在细胞膜上的分布及表达;MTT比色法检测细胞的增殖。Western blot检测CD59分子表达及T细胞活化相关蛋白ZAP70磷酸化水平。结果:激光共聚焦显微镜下可见电转染细胞表达绿色荧光,转染效率约为40%。转染pSUPER-siCD59质粒后CD59荧光强度强度降低,CD59分子均匀分布于细胞膜与正常Jurkat细胞分布一致。抗体活化后CD59在细胞膜成簇状分布。抗体活后细胞增殖速率和磷酸化ZAP70的蛋白表达水平均高于正常组(P<0.05),而细胞电转质粒后则恰恰相反。结论:CD59通过与信号转导分子的相互作用促进T细胞活化增殖。; 李园园高美华丛蓓蓓王丽娜王冰张蓓李营梁洁; 关键词：电转染 JURKAT 磷酸化蛋白

常山酮对大鼠肝纤维化的影响及其机制被引量：8: 2013年; 目的探讨常山酮对刀豆蛋白A(Con A)诱导的大鼠肝纤维化的影响及其机制。方法 50只Wistar大鼠随机分成对照组(8只)、模型组(14只)及常山酮低、高剂量(5、10 mg/kg)组(各14只),对照组大鼠每周尾iv磷酸盐缓冲液(PBS)300μL 1次;其余3组大鼠每周尾iv Con A12.5 mg/kg(溶于300μL PBS)1次,连续8周。自造模起在常山酮各组大鼠饲料中添加相应剂量的常山酮,连续给药8周后大鼠称质量,处死。生化分析法检测血清中肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的水平;ELISA法检测血清肝纤维化指标转化生长因子-β1(TGF-β1)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)的水平;肝组织行HE和Masson胶原染色,进行病理分析并按肝纤维化半定量计分系统(SSS)计分系统进行评分;天狼星红和免疫组化染色观察肝组织Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的沉积及蛋白表达的变化。结果与模型组大鼠比较,常山酮组大鼠血清中ALT、AST、TP、TGF-β1、HA和PC-Ⅲ水平显著降低(P<0.05、0.01),肝脏病理损伤明显减轻(P<0.05、0.01),肝纤维化评分明显降低(P<0.05、0.01),肝组织中Col Ⅰ沉积及蛋白的表达显著下调(P<0.05、0.01)。结论常山酮能有效减轻ConA致肝纤维化大鼠的肝脏损伤,降低肝纤维化程度,其机制与抑制肝内Col Ⅰ的沉积和蛋白的表达有关。; 梁洁张蓓刘佳宝沈若武张希东高美华李营耿霄周文超王丽王十锦; 关键词：刀豆蛋白A 肝纤维化 COL TGF-Β1 Α-SMA

CD59促进LAT介导的T细胞活化被引量：3: 2014年; 目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法:构建LAT-GFP融合蛋白,以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞,建立稳定转染细胞株(Jurkat-GFP)。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒(GFP标记)沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位;MTT比色法检测细胞增殖率的变化;Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果:荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜,转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜,且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞,抗体活化后细胞增殖速率明显升高(P>0.05),而电转干扰质粒后细胞生长减慢。Western blot结果表明,CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异(P>0.05),而磷酸化蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜,且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高,进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。; 高美华李园园王丽娜丛蓓蓓王冰张蓓李营梁洁; 关键词：CD59 LAT JURKAT 蛋白磷酸化

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梁洁

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