汪亮
- 作品数：129 被引量：152H指数：6
- 供职机构：黑龙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析被引量：1
- 2019年
- ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2053^-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808^-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。
- 张冬杰刘洋刘洋汪亮刘娣
- 关键词：启动子重叠PCR民猪
- MC4R与Leptin、MC3R和CCKAR基因的互作研究
- 2012年
- 为了研究4个与采食量相关功能基因可能存在的互作关系,采用基因重组的方法构建了黑素皮质激素受体-4(MC4R)基因的真核表达载体,采用脂质体法将该表达载体转染入成纤维细胞,瞬时转染24 h后,采用Real-timePCR的方法检测和分析了Leptin、黑素皮质激素受体-3(MC3R)和猪缩胆囊素受体(CCKAR)基因mRNA的表达变化情况。结果表明,在成纤维细胞中,过表达MC4R基因后,Leptin、MC3R和CCKAR基因的mRNA水平均无显著变化。据此推测,MC4R基因与其他3个基因虽都参与调节动物的采食量,但很可能是通过不同的调控路径来发挥功能的。
- 张冬杰汪亮刘娣
- 关键词：MC4RREAL-TIMEPCR过表达
- 民猪细胞色素C氧化酶Ⅰ基因的克隆、多态性检测及冷诱导研究被引量：4
- 2012年
- 采用克隆测序和PCR-SSCP方法对民猪COXⅠ基因序列及多态性进行了检测与分析,采用实时荧光定量PCR法对同一饲养水平下经冷诱导处理的民猪和长白猪肌肉、肝脏组织中COXⅠ基因的表达变化进行分析。结果表明:民猪的COXⅠ基因序列与其他猪种相比,存在18个核苷酸突变,导致5个氨基酸发生变化;C260T、G275A和C1253T位点民猪以B等位基因占优势,大白猪、长白猪、北京黑猪、野猪则是A等位基因占优势;冷诱导后低温组民猪COXⅠ基因的表达量与常温组民猪和低温组长白猪相比,均显著下降(P<0.05)。据此推测冷诱导可导致COXⅠ基因表达量降低从而产生更多的ATP为机体提供能量抵御寒冷,COXⅠ基因可能是一个与猪的抗寒性显著相关的候选基因。
- 杨俊静别墅张冬杰汪亮刘娣
- 关键词：民猪细胞色素C氧化酶多态性分析
- 猪Toll样受体4基因SNPs功能分析被引量：5
- 2012年
- Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在机体的免疫反应中发挥重要作用,该基因突变会影响受体的信号转导能力和机体的疾病抗性/易感性。文章在前期工作的基础上,进一步分析c.611 T>A(p.Leu204His)、c.1027C>A(p.Gln343Lys)和c.1605 G>T(p.Leu535Phe)3个错义突变对猪TLR4功能的影响。利用RT-PCR方法克隆猪TLR4基因全长编码区并引入定点突变;利用真核表达、双荧光素酶报告系统和Western blotting方法在瞬时转染的PK-15细胞内研究3个单核苷酸多态(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)对猪TLR4配体识别和信号转导能力的影响;同时,利用创造酶切位点PCR-RFLP方法分析对TLR4活性有显著影响的点突变在民猪、大白、长白和中国东北野猪4个群体中的分布。结果,成功获得了民猪TLR4基因的全长编码区和3个单碱基变异体,构建了不同等位基因的真核表达载体,在PK-15细胞内确定了c.1605 G>T变异导致TLR4向下游传递信号的能力显著降低(P<0.01),该SNP只存在于民猪和野猪中且频率较高。猪TLR4基因c.1605 G>T变异影响Toll样受体的信号传递,可能和机体的疾病抗性/易感性有关。
- 杨秀芹陈月婵汪亮李海涛刘娣关庆芝付博
- 关键词：SNP功能分析
- 卵泡抑素基因过表达对其通路上相关基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 为了探讨过表达卵泡抑素(follistatin,FST)基因对其通路上相关基因表达量的影响,本研究采用PCR方法扩增了民猪的FST基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Dsig-FST,对转染了重组质粒的成纤维细胞进行了鉴定,并采用实时荧光定量PCR检测通路上相关基因表达量的变化。结果表明,本研究成功克隆了民猪的FST基因,并在猪胎儿成纤维细胞中显著过表达,结果导致了ActRⅡB和BMP4基因显著下调(P<0.05),Smad4和Myostatin基因有下调趋势,ActRⅡA基因有上调趋势。由此可见,FST基因的表达变化对其通路上部分相关基因的表达有不同程度的抑制或促进作用。
- 孙亚蒙张冬杰张旭汪亮解宇刘娣
- 关键词：通路基因
- 冷处理对民猪皮下脂肪组织基因表达模式的影响
- 2023年
- 民猪具有不同于我国其他地方猪种的耐寒特性,但其具体耐寒机制未知。本研究构建了民猪15 d冷处理模型,检测了冷处理后的血液生化指标;RNA-seq技术测定了背部皮下脂肪的基因表达变化模式,qRT-PCR技术检测了与脂肪代谢、细胞分化、应激、炎症和信号传递等相关基因的表达水平。结果发现,冷处理后民猪血液中的谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、血皮质醇、白细胞总数和血小板总数显著升高,而超氧化物歧化酶和肌酸激酶显著下降。背脂的2141个基因表达水平发生了1倍以上的变化,其中1435个为上调表达,706个为下调表达,差异倍数多集中在1~3倍。差异基因显著富集于其他次生代谢产物的生物合成通路和折叠、分类和降解通路。差异最显著的ATP6V0A4、TAP2基因和NOX1基因在背脂、颈脂、腹股沟脂以及腹脂等部位高表达。背脂内C/EBPβ和TNF-α发生了极显著上调,CD137、Tbx1、HSPA6和CIRBP发生了显著上调;PPARα发生了极显著下调。
- 张冬杰汪亮王文涛李忠秋刘娣
- 关键词：民猪冷处理皮下脂肪QRT-PCR
- 民猪脂蛋白脂酶基因在冷诱导后表达变化的研究被引量：3
- 2011年
- 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是动物分解代谢的限速酶,是影响脂肪代谢通路中的一个重要基因。本研究将LPL基因作为影响民猪抗寒特性的候选基因,对其在心脏、肝脏、胃、脾脏、肾脏、肺脏、大肠、小肠、子宫、卵巢、背肌、腿肌、脂肪共计13个组织内的表达情况和低温冷诱导后在民猪肌肉组织内的表达变化情况进行了分析。结果表明,LPL基因在所检测的13个组织中均有表达,但表达量存在差异,心脏、背肌、腿肌、脂肪组织中的表达量较高,子宫和卵巢组织的表达量较低;LPL基因在民猪被冷诱导后表达水平无显著变化。
- 张冬杰刘娣汪亮别墅孙洪涛杨国伟张海波
- 关键词：民猪LPL基因
- 民猪不同世代群体中HAL基因多态性检测及肉质关联分析
- 2022年
- 1前言猪肉是世界上消费量最多的肉类,而中国是主要消费大国。据美国农业部对外农业服务部门在2021年10月12日发出的简讯通报预计2022年全球猪肉产量达到1.042亿吨,中国猪肉产量接近4380万吨,占总量的42.03%.猪肉是蛋白质、能量、维生素B族以及必需矿物质的极好来源。不断增长的人口和发展中国家不断增长的经济将继续增加对肉类生产的需求,因此,商业养猪者应努力提高效率并生产质量标准的猪肉,以提高全球市场上的竞争力。
- 夏继桥汪亮何鑫淼王文涛吴赛辉丑有才马守正刘娣张冬杰
- 关键词：猪肉产量肉类生产维生素B族
- 民猪CIRP基因的克隆与冷诱导研究被引量：3
- 2012年
- 采用生物信息学结合RT-PCR的方法,克隆民猪的冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRP)基因,获得3个变异体序列。猪CIRP变异体1基因cDNA长1 278 bp(GenBank登录号:HQ908794),编码172个氨基酸;变异体2基因cDNA长1 653 bp(GenBank登录号:HQ908795),编码182个氨基酸;变异体3基因cDNA长1 765 bp(Genbank登录号:HQ908796),编码144个氨基酸。CIRP变异体2与变异体1相比,在其编码区的第501碱基处,出现了一段375 bp的插入片段,该插入片段的第46～48个碱基为TAG,使翻译提前终止;变异体3与变异体2相比,在其编码区的第428碱基处,出现一段115 bp插入片段,该插入片段的第5～7个碱基为TGA,使翻译提前终止。3种转录变异体的核苷酸序列同源性为86.45%,氨基酸序列同源性为87%。冷诱导后,CIRP基因在肌肉中的表达水平出现显著升高(P<0.05)。
- 张冬杰刘娣汪亮别墅杨国伟
- 关键词：民猪变异体
- FST基因的过表达对猪成纤维细胞内基因及生物学通路的影响被引量：1
- 2022年
- 应用Illumina HiSeq测序平台,对过表达FST基因的细胞和正常细胞进行转录组测序,并对筛选的差异表达基因进行基因功能注释及信号通路分析。结果表明:过表达FST后共有286个基因的转录发生了变化,其中176个上调,110个下调。这些差异基因共得到44个GO功能注释,其中单一生物过程、代谢过程、细胞过程;细胞器、细胞区域、细胞和黏合terms下聚集的差异基因数量最多,均>100个。共发现9条显著富集的Pathway,包括与细胞增殖相关的细胞周期、DNA复制、碱基切除修复、p53信号通路等,与卵母细胞发育相关的卵母细胞减数分裂和孕激素介导的卵母细胞成熟通路。说明在成纤维细胞中过表达FST后,最显著的特征是与细胞增殖分化相关的基因和生物学通路被富集。
- 张冬杰孙亚蒙汪亮汪亮孙雷唐晓东孙雷
- 关键词：过表达成纤维细胞高通量测序
