潘泳岐
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黏附调节因子p120ctn 3A细胞核靶向表达质粒的构建及鉴定
- 2012年
- 目的:既往少数研究表明p120ctn存在核浆穿梭现象,为研究细胞核内p120ctn的功能,我们试图构建p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。方法:采用PCR方法扩增人p120ctn 3A活性片段,将其插入细胞核定向表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/p120ctn 3A,经脂质体介导转染肺癌细胞A549,用荧光显微镜观察绿色荧光信号,免疫细胞化学及Western blot鉴定其在肺癌细胞A549中的表达与定位。结果:限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/p120ctn 3A的片段为2496bp左右,与预期p120ctn 3A基因片段大小相同。荧光显微镜观察到绿色荧光信号定位于细胞核内,免疫细胞化学结果显示表达的p120ctn 3A定位于A549细胞核。Western blot结果显示转染pCMV/p120ctn 3A的A549细胞p120ctn 3A蛋白表达量显著上调。结论:成功构建了p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。
- 李庆昌戴顺东王鑫潘泳岐徐洪涛王恩华
- 关键词：P120CTN重组质粒
- Wnt/β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究被引量：9
- 2014年
- 目的:探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法:体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549/DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549/DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinⅤ/PI法和Hoechst 33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,检测A549/DDP细胞的IC50值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果:顺铂对A549/DDP细胞的IC50值为(28.984±1.404)μmol/L高于A549细胞的(5.888±0.338)μmol/L,t=27.696,P<0.001;20μmol/L顺铂诱导A549/DDP细胞凋亡率为(21.75±0.96)%,显著低于A549细胞的(39.38±0.88)%,t=23.474,P<0.001。A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1.890±0.060,显著高于A549细胞的1.063±0.035,t=20.595,P<0.001;在A549/DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1.107±0.061,明显高于A549细胞的0.503±0.025,t=15.814,P<0.001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性(14.615±0.939)μmol/L,显著低于未沉默β-catenin A549/DDP细胞的(28.984±1.404)μmol/L,t=14.732,P<0.001;RNAi技术沉默β-catenin蛋白细胞凋亡率为(37.57±0.64)%,显著高于未沉默β-catenin A549/DDP细胞的(21.75±0.96)%,t=23.699,P<0.001;RNAi技术沉默β-catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0.527±0.065,显著低于A549/DDP组的1.027±0.025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1.033±0.040,F=116.944,P<0.001。结论:抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。
- 高原刘赞张秀伟贺佳妮潘泳岐郝凤霞谢玲玲李庆昌
- 关键词：Β-连环蛋白SURVIVIN顺铂耐药
- 高尔基体内Connexin32蛋白对肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力的影响
- 2012年
- 目的探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7中建立Connexin32蛋白表达可通过doxycyc-line调控的Li-7 Tet-off Connexin32稳定克隆,应用高尔基体染色确定Connexin32蛋白亚细胞定位,应用刮擦负荷-染料转移实验(SL-DT)方法评价间隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)水平,运用体外跨室细胞运动及侵袭方法验证Connexin32表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性。结果利用逆病毒感染方法建立了稳定整合了Connexin32 cDNA和调控序列Tet-off的肝癌细胞Li-7 Tet-off Connexin32亚克隆,Western-blot结果显示外源性Connexin32蛋白表达于细胞质中且受细胞培养液中多西环素(Dox)调控,当从细胞培养液中去除Dox时,Connexin32表达量增加到基础表达量的4倍;高尔基体染色显示Connexin32蛋白定位于高尔基复合体内,SL-DT实验证实外源性高尔基体内表达的Connexin32蛋白使相邻肝癌细胞间不能形成有效的GJIC,跨室细胞运动和侵袭实验表明次高尔基体内异常蓄积的Connexin32蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动和侵袭能力(P均<0.05)。结论高尔基体内异位表达的Connexin32蛋白GJIC非依赖性发挥促进肝癌细胞运动和侵袭能力的作用。
- 李庆昌王鑫潘泳岐刘树立邱雪杉王恩华
- 关键词：连接蛋白类肿瘤侵润
- C-myc参与β-Catenin介导的肺腺癌细胞A549/DDP的化疗耐药
- 前言:
铂类药物是目前最有效的抗癌药物之一，广泛应用于各种实体瘤的治疗。铂类药物的细胞毒作用主要是铂类与核蛋白连接，形成铂类药物与DNA链间或链内交联，以及DNA-protein交联损伤，DNA损伤信号可以通过促分...
- 潘泳岐
- 关键词：肺腺肿瘤C-MYC基因铂类药物
- 文献传递
