王丹琼
- 作品数：15 被引量：10H指数：2
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒F蛋白反式激活基因2的表达纯化及多克隆抗体制备被引量：3
- 2008年
- 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活基因2(FTP2)的原核表达载体并诱导其表达,制备多克隆抗体并探讨其在临床病理组织中表达的意义。方法通过PCR获得HCVFTP2基因,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)上,构建重组表达载体,在大肠埃希菌BL21中诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blotting验证后进行大量表达并纯化。将纯化的重组蛋白免疫家兔获得多克隆抗体,并将此抗体作为诊断试剂观察其在正常肝组织和临床病理组织中的表达情况。结果以pET32a(+)-FTP2表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得大量重组蛋白,分子量约为25kD。将此重组蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,经抗体间接ELISA检测证明,多克隆抗体效价>1:128000,免疫组化显示多克隆抗体能够与丙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌等临床病理组织产生FTP2抗原反应。结论成功表达了HCV的FTP2蛋白并制备了其多克隆抗体,证实FTP2与丙型肝炎、肝硬化的发病机制密切相关。
- 王丹琼郭江成军张健康赵龙凤洪源张黎颖
- 关键词：肝炎病毒原核表达
- 乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A的克隆与原核表达
- 2007年
- 目的:克隆乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白未知功能新基因HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A,构建其原核表达载体,诱导在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及生物信息学(bioinformat-ics)技术从HepG2细胞提取的cDNA模板中扩增获得HBeBP4基因的剪切体基因HBeBP4A,选用pGEM-T-easy载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化进BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导HBeBP4A融合蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析鉴定证实表达蛋白的特异性。结果:成功扩增出HBeBP4剪切体基因HBeBP4A,并将其插入pET-32a(+)原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了HBeBP4A重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性。结论:发现了乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4(HBeBP4)基因的剪切体HBeBP4A,构建了pET-32a(+)-HBeBP4A原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a(+)-HBeBP4A重组蛋白的表达。
- 张健康郭江成军伦永志王丹琼赵龙凤蓝贤勇洪源毛羽
- 关键词：E抗原结合蛋白剪切体生物信息学原核表达
- 乙型肝炎病毒前S1蛋白反式调节基因2的功能研究
- 乙型肝炎病毒/(HBV/)属嗜肝DNA病毒,它是导致肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要原因。HBV感染致肝细胞损伤机制,很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此,研究HBV的抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机...
- 王丹琼
- 关键词：乙型肝炎病毒生物信息学酵母双杂交抑制性消减杂交
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5在酵母细胞中的表达
- 2007年
- 目的在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)。方法以HepG2细胞来源的mRNA为模板,经RT-PCR法扩增PS1TP5基因,克隆到pGEM-T载体中,并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中,并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落,提取酵母蛋白质,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确PS1TP5是否可在其中表达。结果成功扩增出PS1TP5,测序鉴定符合基因库报告序列,酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆入酵母表达载体pGBKT7,并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示该基因在酵母细胞中成功表达,表达产物相对分子质量为36950。结论成功构建了PS1TP5酵母表达载体,并在酵母细胞中表达。
- 张健康成军郭江伦永志王丹琼赵龙凤洪源毛羽
- 关键词：前S1蛋白酵母菌基因表达
- PS1TP2基因酵母双杂交“饵”载体构建及表达
- 目的:为探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活基因2(PS1TP2)的功能,构建该基因的酵母表达载体并进行表达。方法:用PCR扩增PSlTP2基因,并克隆至pGEM-T载体,再亚克隆入pG- BKT7质粒,构建pG...
- 王丹琼郭江成军张健康张黎颖伦永志洪源赵龙凤
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5在酵母细胞中的表达研究
- 目的:为探讨乙型肝炎病毒(HBV)前-S1(pre-S1)蛋白反式激活基因5(PS1TP5)的功能,在真核生物酵母细胞中表达PS1TP5基因。方法:以HepG2细胞来源的mRNA作为模板,经过逆转录聚合酶链反应(RT-P...
- 张健康成军郭江伦永志王丹琼赵龙凤洪源毛羽
- 文献传递
- 血浆置换联合持续性血液滤过透析对慢性重型肝炎临床症状及生化指标的影响
- 2009年
- 目的:探讨血浆置换联合持续性血液滤过透析治疗对慢性重型肝炎(慢重肝)的临床症状及生化指标的影响。方法:记录41例慢重肝患者(A组)在应用血浆置换及持续性血液滤过透析联合内科综合治疗前后临床症状和生化指标的改善情况,并与40例行血浆置换联合内科综合治疗的慢重肝患者(B组)进行对比。结果:治疗后,A组临床症状改善100%,肝性脑病清醒率55%;B组则相应为55%和20%。两组上述各项指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。血清总胆红素(TB IL)及谷丙转氨酶(ALT)下降,凝血酶原活动度(PTA)上升(P<0.05),A组近期有效率、近期生存率分别为58.5%及46.3%,B组为50%及32.5%,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆置换及持续性血液滤过透析联合内科综合治疗可有效改善慢重肝患者的肝功能,从而提高其近期生存率和肝性脑病清醒率。
- 张桓虎赵心恺高虹邓志华肖晋美赵婕石晓蕾王丹琼
- 关键词：血浆置换慢性重型肝炎预后
- 乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5的筛选克隆与重组蛋白诱导表达
- 2008年
- 目的克隆人类乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(pre-S1)反式激活新型靶基因PS1TP5。构建其原核表达载体,并诱导其在大肠埃希菌中表达。方法以HBV前-S1表达质粒pcDNA3.1(-)-preS1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)作为平行对照,提取mRNA进行抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术分析,结合生物信息学(bioinformatics)技术筛选得到人类新基因PS1TP5。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得PS1TP5基因片段,选用pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化进BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导获得了PS1TP5重组蛋白的表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,考马斯亮蓝染色,以抗-His的单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹分析证实表达蛋白的特异性。结果成功扩增出PS1TP5基因。并将其插入pET-32a(+)原核表达载体,经BL21(DE3)受体菌转化、IPTG诱导、SDS-PAGE分析获得了PS1TP5重组蛋白的表达,Western blotting证实了重组蛋白表达的特异性。结论应用SSH、RT-PCR与生物信息学技术筛选克隆出PS1TP5基因,构建了pET-32a(+)-PS1TP5原核表达载体,并利用大肠埃希菌原核表达系统成功获得了pET-32a(+)-PS1TP5重组蛋白的表达。为进一步研究PS1TP5免疫原性及慢性乙型肝炎发病机制创造了条件。
- 张健康郭江成军王丹琼赵龙凤李康洪源毛羽
- 关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白基因克隆大肠埃希菌
- 中药联合人工肝治疗重型肝炎疗效观察被引量：2
- 2009年
- 目的:观察中药配合人工肝血浆置换支持系统对重型肝炎的治疗疗效。方法:将60例重型肝炎患者随机分为治疗组与对照组,两组均采用相似的内科支持对症及人工肝治疗,在此基础上,治疗组30例加用中药治疗,比较两组患者临床症状改善效果,2周后的各项生化指标,2个月内并发症发生率,1个月内生存率。结果:治疗组大部分患者临床症状改善,肝功指标好转,预防感染、出血、肝性脑病及肝肾综合征等方面均明显优于对照组(P<0.05),近期生存率明显高于对照组(P<0.05)。结论:中西医结合配合人工肝治疗重型肝炎,可提高重型肝炎的抢救成功率,是值得探索研究的重要问题。
- 张桓虎樊改英贾妮娜高红王丹琼
- 关键词：重型肝炎人工肝血浆置换中医药疗法中西医结合疗法
- 乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活蛋白2结合蛋白1基因的克隆及其反式调节基因的筛选
- 2010年
- 目的克隆HBV前S1蛋白反式激活蛋白2结合蛋白I（PS1TP2BP1）基因，并筛选与其相互作用的反式激活基因。方法应用聚合酶链反应（PCR）扩增PS1TP2BP1基因，鉴定正确后再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA^TM 3．1／myc-His A上；以真核表达质粒pcDNA^TM 3．1／myc HisA—PS1TP2BP1转染HepG2细胞，构建cDNA消减文库；进行测序及同源性分析。结果从HepG2细胞来源的cDNA中扩增出PS1TP2BP1基因，并成功进行TA克隆，酶切、测序均正确后，成功构建真核表达重组体。消减文库扩增后得到35个阳性克隆，经菌落PCR分析，得到15个含200～1000bp插入片段的菌落。对所得片段测序，并进行同源性分析，显示15种已知基因编码蛋白可能是PS1TP2BP1反式激活靶基因。结论成功克隆PS1TP2BP1，并构建了PS1TP2BP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础。
- 张桓虎王丹琼成军赵婕赵心恺高虹
- 关键词：肝炎病毒乙型抑制性消减杂交
