王亚萍
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 大鼠骨髓间充质干细胞的纯化、冻存及成瘤性分析被引量：3
- 2012年
- 背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的:探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察以此方法培养的骨髓间充质干细胞移植体内后是否具有成瘤性。方法:分别采用差速贴壁结合24h首次换液、24h首次换液、48h首次换液的方法纯化培养骨髓间充质干细胞,筛选最适纯化方法进行后续实验。配制含体积分数为10%,20%,30%,40%,50%胎牛血清的细胞冻存液冻存细胞,复苏后计算细胞存活率,测定复苏后细胞的生长曲线及成脂诱导能力。将第3,15代骨髓间充质干细胞进行裸鼠肌肉、肝脏局部注射体内移植,45d后取注射部位行病理组织标本检查。结果与结论:差速贴壁结合24h首次换液法所获得骨髓间充质干细胞纯度最高,而细胞增殖能力与其他两组无明显差别,因此选用该方法纯化骨髓间充质干细胞,然后进行传代培养;含体积分数为30%血清冻存液既可保证细胞活性与增殖能力,又可保证干细胞特性及多向分化潜能。骨髓间充质干细胞传至15代仍保持间充质干细胞特性,骨髓间充质干细胞移植入裸鼠肝脏45d后仍可在肝脏局部存活,生长状态与体外培养相似,无异型性及向周围浸润生长,提示体外长时间培养15代以内的骨髓间充质干细胞可在裸鼠体内存活且无成瘤性。
- 佟明华雷香丽王亚萍孔祥平罗显荣
- 关键词：骨髓间充质干细胞冻存细胞移植成瘤性干细胞
- 不同途径移植大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠肝硬化的作用研究被引量：8
- 2012年
- 目的探索不同途径移植绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)在慢性肝纤维化中的作用,以及移植后细胞在肝脏组织内的存活、分布情况。方法全骨髓差速贴壁法分离、培养BMSCs,利用携带GFP基因的慢病毒载体感染P3代BMSCs,建立四氯化碳慢性肝纤维化大鼠模型,通过不同途径移植GFP标记的BMSCs,移植后维持四氯化碳肝损伤,1月后处死大鼠,行肝脏功能相关指标白蛋白(albumin,ALB)、谷丙转氨酶(alaninotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotrans-ferase,AST)检测,观察肝脏局部组织标本苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)、胶原纤维染色和荧光分布情况。结果不同途径BMSCs移植对大鼠四氯化碳所致慢性肝纤维化肝脏功能无明显改善,移植后GFP标记的BM-SCs均可向损伤肝脏迁移或停留,不同途径移植的BMSCs在肝脏内分布不同。结论大鼠骨髓间充质干细胞移植对大鼠慢性肝纤维化无明显治疗作用,可能参与了肝纤维化的形成。
- 雷香丽佟明华张建王亚萍孔祥平
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞移植四氯化碳肝硬化
- 一种改进的大鼠胎肝干细胞分离纯化方法
- 2013年
- 目的改进大鼠胎肝干细胞的分离纯化方法,提高肝脏干细胞分离的纯度和活力。方法采用剪碎酶消化法分离大鼠胎肝干细胞,差速离心结合选择性消化法进行进一步纯化,含10%优等胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。利用免疫细胞化学方法分别检测P1和P10代肝干细胞表面标志物。结果分离的大鼠胎肝干细胞接种培养瓶24 h后开始贴壁,5 d后细胞体积增大,呈梭形或多边形。经1～2次差异性消化传代后,细胞呈集落样生长,边缘清晰且折光率强。免疫细胞化学检测示:P1代大鼠胎肝干细胞C-Kit、甲胎蛋白(AFP)抗原、OV6、细胞角蛋白(CK)19呈阳性表达,不表达Alb。P10代肝干细胞C-Kit、CK19、OV-6及CD34呈阳性表达。结论大鼠胎肝干细胞分离纯化、培养扩增及鉴定方法简单易行。
- 王亚萍佟明华雷香丽孔祥平罗显荣
- 关键词：肝干细胞细胞分离纯化免疫细胞化学
- 鼠胎肝干细胞的体外分离培养及体内移植的实验性研究
- 第一章、一种改进的大鼠胎肝干细胞分离纯化方法
背景：干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，存在于许多组织中;根据其发育阶段不同分为胚胎干细胞和成体干细胞。肝干细胞(hepatic stemcell，HS...
- 王亚萍
- 关键词：肝脏切除术胎肝干细胞细胞移植肝脏再生
