王平
- 作品数：11 被引量：30H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备被引量：6
- 2005年
- 目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。
- 王平黄庆生薛小平雷迎峰王海涛任君萍丁天兵徐志凯
- 关键词：SARS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体
- 三级生物安全实验室操作病原微生物的体会被引量：1
- 2011年
- 根据生物安全的的分级,结合我国病原生物学实验室的现状,阐述如何在三级生物安全实验室操作病原微生物,实验室出现问题应如何处理,对今后明确操作各种病原微生物的生物安全等级、掌握实验安全技术提供借鉴作用。
- 康健王平柏银兰王丽梅韩文东孙志平徐志凯
- 关键词：病原微生物
- 结核分枝杆菌持续感染期抗原Rv1733c的表达、纯化和鉴定被引量：6
- 2012年
- 目的:克隆结核分枝杆菌持续感染期抗原Rv1733c基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1733c基因片段,克隆入pMD18-T载体,序列测定正确后将其亚克隆入原核表达载体pPro-EXHTb,并在大肠杆菌DH5α中进行表达,表达蛋白经SDS-PAGE及Western-blot分析后,以Ni-NTA亲和层析纯化蛋白。结果:成功克隆了Rv1733c基因片段并构建了其原核表达载体pPro-EXHTb-1733c,转化E.ColiDH5α后能表达大小约30 KD的蛋白,Western-blot分析表明表达产物正确。通过亲和层析获得纯化蛋白。结论:成功构建结核分枝杆菌持续感染期抗原Rv1733c原核表达载体pPro-EXHTb-1733c,并获得纯化蛋白,为研究新型结核疫苗的靶抗原奠定了基础。
- 张薇柏银兰康健王平徐志凯王丽梅
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达纯化
- 医学院校病原微生物学实验室的科学管理探讨被引量：4
- 2013年
- 病原微生物学作为生物医学领域中一门重要的前沿基础学科,与基础医学、临床医学广泛交叉、相互渗透,在医学院校课程设置中占有重要地位。在教学过程中实验课占有特殊的重要作用,在医学本科生和研究生的培养过程中,都不可避免的要涉及到实验室的使用和管理。因此,病原微生物学实验室的管理显得非常重要。从优化实验室布局、实施标准化管理、规范人员职责、规范人员培训、加强试剂采购和废弃物处理等几个方面,结合实际工作分析了加强病原微生物学实验室管理的几点看法,供同行参考。
- 康健王丽梅王平柏银兰吴兴安姚敏徐志凯
- 关键词：病原微生物学生物安全实验室管理
- SARS冠状病毒囊膜E蛋白的重组表达与单克隆抗体制备被引量：2
- 2005年
- 从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段。测序确认后与人免疫球蛋白(IgG)序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPROEXHta中。从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb)。连接PCR扩增出231bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原核表达载体,在大肠杆菌中获得较好表达。表达产物经SDS-PAGE后,在相对分子质量(Mr)约37000处可见1条明显的诱导表达条带。Western印迹的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异性免疫反应。从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠,制备出2株抗E蛋白的mAb。这些mAb与SDS-PAGE凝胶上Mr约为37000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。所获得的重组表达E蛋白及特异性mAb为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。
- 王平黄庆生丁天兵任君萍宋建华徐志凯
- 关键词：SARS冠状病毒囊膜蛋白原核表达单克隆抗体
- 结核分支杆菌铁调控蛋白FurA的基因表达及单克隆抗体的制备
- 2005年
- 目的表达结核分支杆菌FurA蛋白,并制备针对该蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法将重组质粒转化入E.coliBL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠,并进行细胞融合、克隆化制备抗FurAmAb,用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力。结果获得了高表达的融合蛋白,融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子量Mr为23×103处有特异的蛋白条带,为目的蛋白。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了1株抗FurAmAb。结论所获得的抗FurAmAb特异性强、效价高,对进一步研究FurA在结核分支杆菌铁代谢及致病中的作用提供了有力的工具。
- 高雪薛莹姜泓王平柏银兰张海李元徐志凯
- 关键词：分枝杆菌结核单克隆抗体
- 重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法:将耻垢分枝杆菌(Ms)与重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs分别感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酸染色和细胞内细菌菌落形成单位计数评价Ms和Ag85B-ESAT6-rMs被巨噬细胞吞噬和消化能力;采用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况;分别采用实时定量PCR技术和ELISA检测细胞因子TNF-α的表达和分泌水平。结果:小鼠巨噬细胞实验证实,Ag85B-ESAT6-rMs比Ms具有更强的感染和促进巨噬细胞的吞噬能力,Ag85B-ESAT6-rMs可增加巨噬细胞表达和分泌TNF-α的水平,并促进受感染巨噬细胞的凋亡。结论:Ag85B-ESAT6-rMs可以促进巨噬细胞的吞噬消化功能,将有助于增强巨噬细胞对Ms抗原的递呈和机体抗Ms感染的特异性免疫。
- 郝彦斐罗泰来王平康健柏银兰王丽梅徐志凯
- 关键词：耻垢分枝杆菌巨噬细胞AG85BESAT6
- 小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价被引量：1
- 2011年
- 目的建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型。方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数。结果感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐渐转为慢性炎症反应,抗酸染色均为阳性,脏器荷菌数与感染剂量相对应,并至少可持续14周。结论成功建立了小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染动物模型,为其进一步用于结核病防治研究奠定了一定的基础。
- 康健王丽梅王平赵勇张薇韩文东丁悦娜孙志平柏银兰徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌近交系小鼠
- 医学微生物学实验教学体会被引量：1
- 2011年
- 实验课在医学微生物学整体教学中占有很重要的比重,结合实践教学经验,提出一些教学体会,如充分的课前准备,活跃的课堂气氛,丰富的课后科研等,以期在提高教学效率、改进教学方法上具有借鉴作用。
- 康健王丽梅柏银兰王平张薇郝彦斐罗泰来徐志凯
- 关键词：医学微生物学实验教学教学体会
- 表达结核分枝杆菌休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白重组耻垢分枝杆菌的构建与鉴定被引量：2
- 2012年
- 利用大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,构建能够表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s)。采用聚合酶链反应(PCR)方法,从MTB H37Rv基因组DNA中扩增MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段并克隆入pMD18-T载体。序列测定正确后分别亚克隆入大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22。将重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿孔导入M.s,42℃热诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot分析。利用PCR方法扩增获得MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分别为435 bp和480 bp。基因测序与Genebank公布的基因序列完全一致。SDS-PAGE分析结果表明重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿导入M.s后能够特异性表达目的蛋白,大小约为35 kDa,与理论值相符。Western-blot鉴定结果表明抗Rv2031c和抗Rv2626c的单克隆抗体均能够与目的蛋白发生特异性的反应,大小相一致。成功构建表达MTB休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组M.s,并命名为Rv2031c-Rv2626c-rM.s,为其用于结核新型疫苗的研究奠定了基础。
- 罗泰来张薇郝彦斐康健王平柏银兰王丽梅徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌
