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自身反应性MZ-B细胞功能探究: B细胞免疫耐受失调与自身免疫性疾病的发生、发展和转归密切相关.许多自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮的特征性病变是自身反应性B细胞过度活化产生的大量自身抗体.活化的B细胞不仅分泌抗体发挥调理作用、激活补体、介...; 韩冬王瑞玲耿辉; 关键词：类风湿性关节炎

人源α-烯醇化酶B细胞表位鉴定及其与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应预测被引量：5: 2015年; 目的:预测鉴定人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,探讨人源α-烯醇化酶与牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶之间的交叉反应性。方法:以人源α-烯醇化酶蛋白序列为基础,综合应用多个软件预测B细胞线性表位;再以人源α-烯醇化酶的蛋白晶体结构为基础,采用4个生物信息学软件综合预测B细胞构象表位;利用原核表达系统对人源α-烯醇化酶蛋白进行表达、亲和层析法进行,纯化抗原免疫BALB/c小鼠,化学合成预测的线性表位片段检测抗体反应,确定人源α-烯醇化酶蛋白B细胞表位。利用Clustal X进行蛋白质序列比对和Swiss-Model进行同源模建,研究人源α-烯醇化酶和牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶的交叉反应性。结果:人源α-烯醇化酶线性B细胞表位优势区域为9-25aa,28-43aa,70-85aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;构象性B细胞表位优势区域为:1-4/24-30/77-86/124aa,9-16/51-59aa,250-254/262-268/271-274aa;合成的线性表位片段中9-25aa免疫应答反应最强烈,其次是70-85aa,再次为28-43aa,163-178aa,229-244aa,280-295aa;牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶氨基酸序列同源性高达50.11%,两者在线性B细胞表位优势区域的9-24aa和32-42aa序列高度相似;空间构象比对结果显示牙龈卟啉单胞菌烯醇化酶和人源α-烯醇化酶之间的RMSD值为1.055,且两者在3个构象性B细胞表位优势区域的空间构象高度相似,推测二者可能在上述区域发生交叉反应。结论:预测并鉴定了人源α-烯醇化酶蛋白的B细胞抗原表位,比较其与牙龈卟啉单胞菌的烯醇化酶可能发生交叉反应的位点,为研究人源α-烯醇化酶蛋白的自身抗原性和类风湿性关节炎发病机制提供了理论基础。; 揭瑞董佳慧韩冬王瑞玲韩魏巍杜戎耿辉; 关键词：抗原表位

自身反应性MZ-B细胞功能探究: B细胞免疫耐受失调与自身免疫性疾病的发生、发展和转归密切相关。许多自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮的特征性病变是自身反应性B细胞过度活化产生的大量自身抗体。活化的B细胞不仅分泌抗体发挥调理作用、激活补体、介...; 韩冬王瑞玲耿辉; 关键词：类风湿性关节炎; 文献传递

抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的研制及其抗原识别表位初步鉴定被引量：2: 2015年; 研制抗人α-烯醇化酶的单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步研究。利用原核表达系统对人α-烯醇化酶进行一系列重组表达。表达纯化后的人α-烯醇化酶作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术以及克隆化培养筛选稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用免疫荧光技术、免疫组化技术对此单克隆抗体加以验证,并应用噬菌体随机十二肽库展示技术结合生物信息学方法对抗体识别表位进行初步鉴定。结果显示,克隆表达了人α-烯醇化酶,筛选获得一株稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体细胞株,此单克隆抗体的亚型为IgG1,它可与腹腔巨噬细胞的胞膜及胞浆的烯醇化酶特异性结合。噬菌体随机十二肽库展示技术筛选出的氨基酸序列经生物信息学分析,初步确定此单克隆抗体的抗原表位为第259-262氨基酸与第267-269氨基酸,其恰好位于人α-烯醇化酶三维结构表面的凸环上。成功制备了一株抗人α-烯醇化酶单克隆抗体并对其抗原识别表位进行初步鉴定,为探究人α-烯醇化酶在人体病理生理活性中的作用提供了研究工具。; 韩冬王瑞玲韩魏巍秦婷婷袁永泽熊丽刘德立耿辉; 关键词：烯醇化酶单克隆抗体免疫荧光免疫组化噬菌体展示技术

抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定被引量：3: 2013年; 目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化。纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位。用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性。结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性。结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具。; 董佳慧揭瑞余金辉韩冬王瑞玲邓灵福熊丽刘德立耿辉; 关键词：软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体表位类风湿性关节炎

COMP特异性单抗15A11的表位特征研究: 2015年; 目的:鉴定RA相关自身抗原COMP的一株特异性单克隆抗体15A11的表位特征。方法:选用随机十二肽噬菌体库对m Ab 15A11进行三轮筛选,随机挑取40个单噬菌斑,提取DNA,测序;ELISA检测每个噬菌体克隆与m Ab 15A11结合的特异性;通过Clustal W2对特异性结合的噬菌体展示的十二肽和COMP进行氨基酸序列比对,Py MOL分析一致氨基酸所在肽链的二级结构及表位氨基酸之间的距离,初步确定m Ab 15A11的表位;变性和非变性Western blot、EDTA螯合Ca2+后ELISA分析以及合成多肽的ELISA实验进一步确定表位序列。结果:得到的40个测序噬菌体中,共有5个噬菌体克隆,ELISA确定克隆1和克隆2与m Ab 15A11特异性结合,其他克隆均为非特异性结合的噬菌体;氨基酸序列比对,在COMP上未发现与克隆1和克隆2噬菌体相同的连续氨基酸序列,提示m Ab 15A11的抗原表位可能为非线性表位;Py MOL分析表位氨基酸在COMP上的定位及距离,显示构象表位的合理性;变性Western blot分析为阴性,而非变性Western blot条件下为阳性;EDTA螯合Ca2+破坏COMP的构象后不能与m Ab 15A11结合,而未经处理的与m Ab 15A11结合,均说明m Ab 15A11表位是构象表位;合成多肽与m Ab 15A11的ELISA结果进一步确定了m Ab 15A11的构象表位序列。结论:鉴定了m Ab 15A11的表位是构象表位序列,且确定了该构象表位的氨基酸组成,为研究COMP抗体与抗原反应机制具有重要理论价值,并对类风湿性关节炎的检测有重要应用意义。; 王瑞玲韩冬韩魏巍邓灵福袁永泽熊丽刘德立耿辉; 关键词：COMP 单克隆抗体类风湿性关节炎噬菌体展示技术表位

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