王穗海
- 作品数：44 被引量：68H指数：5
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗凋亡蛋白Fortilin基因的克隆、表达与鉴定
- 2006年
- 目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin。方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coliBL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45000,与预期理论值相符。结论Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础。
- 吴芬芳宁云山吴英松王穗海董文其李明
- 关键词：克隆
- pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株。方法采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平。结果pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建。Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础。
- 黄湘谭家余乔亚峰王穗海邱玉林李明
- 关键词：真核表达质粒CHANGLIVER
- 一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体及杂交瘤细胞株3953与试剂盒
- 本发明公开了一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体及杂交瘤细胞株3953与试剂盒。一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC3953。一种抗人蛋白RN181的单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株...
- 李明王穗海黄湘李月董慧敏
- 文献传递
- VCC－1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:构建pcDNA3.1(-)/VCC-1真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC-7721中。方法:以SMMC-7721细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增VCC-1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RT-PCR及Western blot检测转染前后该细胞株VCC-1基因的表达。结果:pcDNA3.1(-)/VCC-1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR及West-ern blot检测,重组质粒转染株的VCC-1基因的表达水平高于对照组,证实VCC-1基因稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达。结论:成功地建立了人基因VCC-1的肝癌细胞SMMC-7721稳定转染株,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础。
- 牟霞陈瑶王穗海黄湘李明
- 关键词：转染
- 新趋化因子DMC对顺铂致HT-29细胞凋亡的影响
- 2010年
- 目的:研究新DMC基因高表达对人结肠癌HT-29细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:将DMC蛋白融合表达载体pcDNA3.1(-)/DMC和对照质粒分别转染细胞,顺铂诱导细胞凋亡,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,以流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果:pcDNA3.1(-)/DMC转染细胞株凋亡率均明显低于空白细胞株(P<0.05);电子显微镜结果与流式细胞术检测结果一致。结论:pcDNA3.1(-)/DMC转染HT-29细胞后,能够使肿瘤细胞对化疗药物的敏感性降低。
- 周志涛朱伟王穗海李明
- 关键词：凋亡HT-29细胞顺铂
- 构建稳定干扰RN181的RKO细胞系并研究其生长现象被引量：8
- 2014年
- 目的构建稳定干扰RN181的重组RKO细胞系,并研究下调RN181水平后,重组细胞系在体内外生长的规律。方法 RN181干扰慢病毒感染RKO细胞系,荧光与Western blotting鉴定该重组细胞系,CCK-8法、平板克隆实验研究该重组细胞系在体外增殖规律,裸鼠成瘤实验研究其在体内增殖情况。结果重组细胞系荧光良好,Western blotting证实重组细胞干扰组与对照组的RN181表达量差异有统计学意义(P<0.05)。体外细胞生长曲线实验与平板克隆结果显示,干扰组与对照组之间增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组的瘤体生长速度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定干扰RN181的肠癌细胞系,并证实了下调RN181对RKO细胞在体外生长无影响但在体内能显著抑制细胞生长。
- 张贤王穗海彭迎霞高彦君张雪峰孙政李纪良
- 关键词：结直肠癌
- 抗人hnRNP A1单克隆抗体的制备及在颅咽管瘤组织中的应用被引量：1
- 2008年
- 目的制备核不均一核糖核蛋白A1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1)的单克隆抗体,探讨hnRNP A1蛋白的生物学功能。方法利用重组hnRNP A1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗hnRNPA1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western Blot和免疫组织化学实验等方法分别对其效价和特异性进行鉴定。结果成功地建立了3株稳定分泌抗hnRNPA1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为E006、E009和E012。3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。3株单克隆抗体通过组织化学实验和Western Blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的hnRNPA1蛋白。结论获得了效价高、特异性好的抗hnRNP A1蛋白的单克隆抗体,这为进一步研究hnRNP A1的生物学功能及它在癌发生事件中的作用奠定了基础。
- 王穗海赵玉梅黄湘潘华政李明姚小艳
- 关键词：HNRNPAL抗体单克隆组织化学
- 蛋白酶体调节蛋白PA28γ的不同亚细胞定位对肝细胞增殖的影响
- PA28是一种蛋白酶体调节蛋白,它能结合到20S蛋白酶体的外环并促进小肽的降解,这个过程并不需要蛋白的泛素化也不需要消耗ATP,这与PA700不同,后者是一种能识别并降解泛素化蛋白的大分子复合物。目前已经有证据证明,PA...
- 王穗海
- 关键词：真核表达细胞周期增殖
- 文献传递
- GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用
- 本发明公开了GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11及其制备方法和应用，属于细胞工程技术领域。本发明的GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株7D11，保藏编号为CGMCCNo.5426。该杂交瘤细胞株7D11的制备方法为：以GPC...
- 徐伟文马瑞娟王穗海李明
- 文献传递
- siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响
- 2012年
- 目的探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果Western blot结果显示RNA干扰组(shVCC1-1组)细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01),MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组(P<0.05)。结论 siRNA靶向抑制VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。
- 牟霞陈瑶王穗海李明
- 关键词：肝癌SMMC7721细胞SIRNA
