田文君
- 作品数：11 被引量：14H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 泛素连接酶β-TrCP降角翠BCR-ABL融合蛋白对白血病K562细胞增殖的抑制被引量：3
- 2010年
- 目的:t(9;22)(q34;q11)突变导致的BCR-ABL融合基因及其编码的融合蛋白在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中发挥重要作用。本研究观察可与BCR-ABL融合蛋白N端寡聚化区域(Oligomerization domain,OD)特异性结合的嵌合泛素连接酶E3 β-TrCP的β-TrCP-OD-HA的重组腺病毒载体,经泛素-蛋白酶体途径降解BCR-ABL融合蛋白对白血病K562细胞增殖的影响。方法:HEK293细胞扩增野生型Ad5β-TrCP-OD-HA、突变型Ad5ΔF-TrCP-OD-HA及空载Ad5GFP重组腺病毒载体,感染K562细胞。以未感染K562细胞作空白对照,流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测外源性重组蛋白和BCR-ABL融合蛋白的表达,通过细胞增殖曲线、甲基纤维素集落形成试验、细胞周期检测β-TrCP-OD-HA对K562细胞增殖的影响。结果:成功建立携β-TrCP-OD-HA重组腺病毒载体的K562细胞株,重组腺病毒载体感染效率达66.4%以上,β-TrCP-OD-HA、ΔF-TrCP-OD-HA可在K562细胞中表达。三组重组腺病毒载体感染K562细胞后,Ad5β-TrCP-OD-HA组Western blot检测BCR-ABL融合蛋白含量下降;K562细胞生长和集落形成能力均受抑制;细胞周期显示S期细胞数下降至10.88%±2.42%、G_0/G_1期升高至85.6%±5.61%,与Ad5β-TrCP-OD-HA组、Ad5GFP组及对照组相比,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的β-TrCP-OD-HA、ΔF-TrCP-OD-HA能够在白血病K562细胞中表达;β-TrCp-OD-HA可以抑制K562细胞的生长增殖,其机制可能与其降解BCR-ABL融合蛋白、阻滞细胞周期而实现。
- 田文君罗红伟袁颖黄世峰刘钉宾陶昆冯文莉
- β-TrCP-OD-HA重组腺病毒对白血病K562细胞凋亡的影响被引量：3
- 2010年
- 目的研究癌蛋白Bcr-Abl被泛素-蛋白酶体系统靶向降解的可能性及诱导白血病K562细胞凋亡的作用。方法含有Bcr-Abl融合蛋白N端寡聚化区(OD)的重组腺病毒Ad5β-TrCP-OD-HA特异性结合Bcr-Abl融合蛋白的N端寡聚化区(OD),通过感染将嵌合泛素连接酶β-TrCP运送到靶细胞K562细胞,同时,β-TrCP基因突变的重组腺病毒Ad5△F-TrCP-OD-HA和仅含绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒Ad5GFP,分别作为对照。感染后,Western blot检测Bcr-Abl融合蛋白的表达;倒置显微镜、光镜和电镜观察细胞形态学变化。结果成功建立携β-TrCP-OD-HA、△F-TrCP-OD-HA的重组腺病毒的K562细胞株,重组腺病毒感染K562细胞后,Ad5β-TrCP-OD-HA组的Bcr-Abl融合蛋白含量下降,与Ad5β-TrCP-OD-HA组、Ad5GFP组及对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);倒置显微镜可见Ad5β-TrCP-OD-HA作用后细胞体积变小、形态不规则;光镜下发现胞体变小,细胞质空泡,细胞核出现碎裂和凋亡小体;电镜观察到出现了典型的细胞凋亡的超微结构。结论重组腺病毒介导的β-TrCP-OD-HA在白血病K562细胞内能够降低Bcr-Abl融合蛋白含量,并且诱导K562细胞发生了凋亡。
- 罗红伟田文君季茂胜刘钉宾王小飞黄宗干冯文莉
- 关键词：泛素连接酶K562细胞细胞凋亡
- 抑癌基因p53对白血病K562细胞中心体异常的抑制作用及其机制
- 慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）是一种获得性造血干细胞克隆增殖性血液系统恶性肿瘤，由于造血干细胞移植术的开展、针对BCR-ABL的酪氨酸激酶抑制剂的临床应用，慢性粒细胞白血病患...
- 田文君
- 关键词：慢性粒细胞白血病P53基因突变中心体异常K562细胞
- 文献传递
- 野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNAdamage)、BubR1(Bub1related)、Aurora A的表达。结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38±0.02)%,与空白对照组(0.71±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%,而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使Aurora A的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。
- 田文君冯文莉王宏斌黄世峰曹唯希黄宗干
- 关键词：P53基因中心体K562细胞AURORA
- 野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制被引量：1
- 2008年
- 目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(Ad5GFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.WesternBlot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而Ad5mtp53感染组和Ad5GFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白可能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖.
- 王宏斌冯文莉黄世峰田文君曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病P53基因中心体
- CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制被引量：2
- 2009年
- 目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株。Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per2、cyclin B1和C-myc的表达。结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562。与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),同时出现细胞凋亡峰。细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达。结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的。
- 孙成铭黄世峰罗红伟刘钉宾田文君朱喜丹冯文莉黄宗干
- 关键词：CCAAT增强子结合蛋白细胞周期
- HnRNP E2 decoy RNA对CML细胞表型的影响
- 目的探讨hnRNP E2 decoy RNA对CML细胞生物学性状的影响及其可能的机制。方法:构建hnRNP E2 decoy RNA表达载体,转染K562细胞并筛选,通过细胞形态学检查,流式细胞术,免疫细胞化学染色,R...
- 陈新敏黄世峰曾建明罗红伟王雅珍田文君冯文莉
- 文献传递
- 人慢性粒细胞白血病模型鼠的建立
- 2009年
- 通过SCID小鼠与NOD／Lt品系（T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞缺陷，循环补体缺乏，抗原呈递细胞分化及功能不良）回交得到的NOD／Ltsz-SCID／SCID小鼠（简称NOD／SCID小鼠）。目前，NOD／SCID小鼠白血病模型的建立多采用经尾静脉接种较大数量的白血病细胞，
- 孙成铭寇新明牟晓东冯文莉黄世峰刘钉宾田文君
- 关键词：慢性粒细胞白血病NOD/SCID小鼠模型鼠自然杀伤细胞B淋巴细胞白血病模型
- bcr-abl反义RNA对慢性粒细胞白血病细胞蛋白激酶PKR的影响
- 目的：bcr/abl 融合基因及其编码的融合蛋白在慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leuke- mia,CML)发生发展中起重要的作用。双链 RNA 依赖性蛋白激酶 PKR 是在哺乳动物中表达、
- 冯文莉曾建明王小中赵世巧白卫君黄世峰田文君
- 关键词：白血病蛋白激酶
- 文献传递
- 野生型p53基因对K562细胞中心体数量和蛋白的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组腺病毒介导的野生型p53基因（Ad5wtp53）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞系中心体数量和中心体蛋白表达的影响。探讨应用重组腺病毒p53基因对CML进行基因治疗的可行性。方法分别将含有野生型p53基因、突变型p53基因和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体（Ad5wtp53、Ad5mtp53和AdSGFP）反复扩增，联合多聚季胺共同感染K562细胞，观察感染效率。MTT法确定最适重组腺病毒感染滴度和感染时间。然后用RT-PCR和Western blot检测p53 mRNA和蛋白的表达。最后应用间接免疫荧光染色法对中心体γ-微管蛋白和纺锤体α-微管蛋白同时进行标记，在激光共聚焦显微镜下观察中心体γ-微管蛋白的表达和有丝分裂，并对中心体进行计数。结果多聚季胺可显著提高腺病毒载体对K562细胞的感染效率。多聚季胺的剂量选择为4μg／ml；感染K562细胞的最适腺病毒滴度为20 000 MOI，感染时间为72h；Ad5wtp53和AdSmtp53转染的K562细胞均可表达p53 mRNA和蛋白。Ad5wtp53感染K562细胞后，中心体数量减少，γ-微管蛋白的表达降低。结论重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达；野生型P53蛋白能够降低K562细胞中心体数量及中心体γ-微管蛋白的表达。
- 王宏斌冯文莉黄世峰田文君曹唯希黄宗干
- 关键词：基因P53中心体K562细胞腺病毒载体
