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烟草表达粉尘螨Ⅰ类变应原及其免疫治疗研究: 目的：　　构建粉尘螨I类变应原（Derf1）瞬时表达载体TRBO-Derf1，观察其在烟草中的表达并探讨烟草表达的Derf1疫苗免疫治疗过敏性哮喘的疗效。　　方法：　　 1.重组质粒TRBO-Derf1的构建及...; 石连; 关键词：重组蛋白过敏性哮喘烟草免疫治疗

一种结核分枝杆菌耐药性检测方法: 本发明属于生物技术技术领域，具体的说是一种结核分枝杆菌耐药性检测方法，该方法包括如下步骤：裂解结核分枝杆菌用于PCR反应的模板；设计PCR引物，扩增全长的吡嗪酰胺酶(pncA)基因；浓缩扩增的pncA基因片段并定量；采用...; 王晓春邢应如石连; 文献传递

烟草表达的粉尘螨Ⅰ类变应原重组蛋白的致敏效果研究: 2012年; 目的探讨烟草表达的粉尘螨Ⅰ类变应原重组蛋白对小鼠的致敏性。方法 40只BALB/c小鼠随机分为4组,分别为PBS阴性对照组、卵白蛋白阳性对照组、原核表达Der f1(pDer f1)组、烟草表达Der f1(tDerf1)组,各组小鼠分别于第0、7、14天腹腔注射,PBS组给予PBS,其余3组分别用卵白蛋白、pDer f1、tDerf1致敏,第21天起连续7 d雾化吸入激发,24 h后处死。通过肺组织病理切片观察小鼠肺部炎症,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行总细胞及分类计数,以ELISA法检测BALF、脾细胞培养上清(SCCS)的特异性细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ和血清中变应原特异性IgE、IgG1及IgG2a抗体浓度。结果 PBS组小鼠肺部未见明显病理改变,卵白蛋白、pDer f1、tDer f1组小鼠肺部出现明显的炎症。tDer f1组小鼠BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、抗原特异性细胞因子IL-4、IL-5、IL-17和SCCS中IL-4、IL-5、IL-17均明显高于阴性对照组(P<0.01),而与阳性对照组相比无统计学意义;tDer f1组小鼠BALF和SCCS中IL-2、IFN-γ均低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);卵白蛋白、pDer f1、tDerf1组特异性IgE和IgG1抗体水平均高于PBS组(P<0.01)。结论从烟草中表达的重组Derf1蛋白对小鼠具有致敏作用,其可作为变应原进一步研究。; 石连李朝品; 关键词：粉尘螨哮喘烟草重组蛋白小鼠

淮南市不同生境中主要尘螨变应原的基因检测: 2010年; 目的检测3种不同生境中尘螨4种变应原。方法于2009年6—8月在淮南地区仓储、居室及公共环境采集样本各40份,提取样本总RNA,RT-PCR合成cDNA,应用PCR特异性扩增Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2,并对不同生境中变应原检测结果进行统计学分析。结果从尘螨基因组中特异扩增出大小约646、4559、23、408 bp的基因片段。仓储环境和居室环境中尘螨变应原的检测阳性率均高于公共环境(P<0.05),仓储环境中粉尘螨变应原阳性率较高(Der f 1为65.0%,Der f 2为62.5%),居室环境中屋尘螨变应原阳性率较高(Der p 1为80.0%,Der p 2为62.5%)。结论不同生境中不同尘螨变应原具有较大差异,可能与温湿度差异及尘螨的食性、习性有关。对尘螨基因组进行RT-PCR及PCR检测是简便有效的尘螨变应原检测方法。; 王晓春石连沈静李朝品; 关键词：尘螨变应原生境基因检测

粉尘螨变应原Derf1基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：11: 2012年; 目的:原核表达、纯化粉尘螨主要变应原Der f1重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:大量诱导表达含pET-28a(+)-Der f1质粒的BL21菌株,SDS-PAGE电泳并割胶纯化目的蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔,收集血清进行效价检测并用Western blot检测其特异性。结果:割胶回收可有效纯化Der f1重组蛋白,抗Der f1抗体效价为1∶32 000。结论:成功制备Der f1多克隆抗体,以期为尘螨过敏性疾病的诊断和免疫治疗提供参考。; 石连姜玉新王海宁李朝品; 关键词：粉尘螨变应原多克隆抗体

烟草表达粉尘螨1类变应原及其免疫治疗研究: 目的构建粉尘螨Ⅰ类变应原(Der f1)瞬时表达载体TRBO-Der f1,观察其在烟草中的表达并探讨烟草表达的Der f1疫苗免疫治疗过敏性哮喘的疗效。方法1.重组质粒TRBO-Der f1的构建及在烟草叶片中的表达以...; 石连; 关键词：粉尘螨重组蛋白哮喘烟草免疫治疗; 文献传递

粉尘螨Ⅰ类变应原瞬时表达载体的构建及其在烟草中的表达: 2012年; 目的构建粉尘螨I类变应原瞬时表达载体TRBO-Der f1并观察其在烟草中的表达。方法以粉尘螨总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Der f1基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO中,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefa-ciens)GV1301株后,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。将含TRBO-Der f1重组质粒的GV1301注射本氏烟叶片,SDS-PAGE电泳检测注射3、4、5、6d后Der f 1的表达,并进行Western blot鉴定。结果电泳及测序表明Der f1基因克隆成功,大小为627bp。经PCR及酶切结果证实重组质粒TRBO-Der f1成功转入根癌农杆菌。SDS-PAGE电泳检测表明,该蛋白于第5和6d在烟草叶片中高表达,并通过Western blot得到验证。结论粉尘螨I类变应原Der f 1成功表达于烟草叶片,为进一步研究源于植物的粉尘螨疫苗奠定了基础。; 李朝品石连李秋雨姜玉新; 关键词：粉尘螨重组质粒

植物生物反应器在疫苗生产中的研究进展: 2011年; 在世界范围内每年5700万的死亡人数中约有1500万人（〉25％）与感染性疾病直接相关．接种疫苗是预防传染性疾病最为有效且最具成本效益的方法．但是其高昂的价格使得发展中国家的大多数人无力承担．因为接近十亿人口的日均收入不足一美元。当前疫苗的高昂价格和其生物药剂学大部分是由于复杂的生产和输送工序造成的。; 石连李朝品; 关键词：疫苗生产植物生物反应器传染性疾病感染性疾病生物药剂学

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石连

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