罗婵
- 作品数：51 被引量：63H指数：3
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- 一种受精卵胞质内注射DNA生产转基因水牛的方法
- 一种受精卵胞质内注射DNA生产转基因水牛的方法。体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精IVF后，将携带有增强绿色荧光蛋白EGFP基因的转基因载体pEGFP-N1质粒DNA直接显微注射到水牛受精卵胞质中，制作水牛转基因胚胎，然后...
- 陆凤花石德顺孟凡丽刘庆友韦英明李湘萍罗婵蒋建荣
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- 一种利用显微授精技术生产转基因兔的方法
- 一种利用显微授精技术生产转基因兔的方法，通过假阴道法采集精液或从附睾收集的精液用PBS上游，经离心洗涤后，分装到冷冻管中，投入液氮中保存；进行显微操作之前，从液氮中取出装有精子的冷冻管，室温下解冻，加入外源DNA质粒与冻...
- 陆凤花石德顺张顺刘庆友罗婵李湘萍
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- 细胞松弛素B对水牛体细胞核移植效果的影响
- 2009年
- 以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞，采用电融合方法，探讨细胞松弛素B（CB）对水牛体细胞核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞去核后，将经0．1mg／L Aphidicolin（APD）＋0．5％FBS培养2～9d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合（100V／mm，15μs，电脉冲3次）构建核移植重构胚。重构胚经化学激活后（5μmol／L）离子霉素5min，2mmol／L 6-DMAP3h）培养，7～9d评定其胚胎发育能力。结果显示，在含CB（3mg／L）的融合液中进行电融合后，核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组（不合CB）相比均无显著差异（P〉0．05）；核移植重组胚激活前用含CB（6mg／L）的培养液培养1h，其激活后的存活率（97．52％）和体外囊胚发育率（22．09％）均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率（93．87％）和囊胚率（13．25％，P〈0．05）；重组胚经离子霉素激活5min后，在6-DMAP＋CB中培养3h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3h的分裂率（65．37％vs78．92％，P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（11．19％vs10．96％，P〉0．05）。这表明水牛体细胞核移植电融合时，融合液中不添加CB，而核移植重组胚激活前经CB培养处理后，有利于胚胎的进一步发育，但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率。
- 陆凤花覃琦丽黄华罗婵成俊萍石德顺韦英明
- 关键词：水牛体细胞核移植电融合细胞松弛素B
- 碱性成纤维细胞生长因子促进水牛类胚胎生殖干细胞形成的初步研究
- 本研究主要通过碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)特异信号阻断剂阻断下游相关的信号通路,对bFGF在水牛类胚胎生殖干细胞(EG-like)形成过程中的作用和机理进行了初步研究。首先,对bFGF在水牛PGCs重编程形成EG-...
- 汪彩珠杨素芳陈思蓓邓彦飞刘庆友罗婵石德顺
- 关键词：原始生殖细胞碱性成纤维细胞生长因子重编程
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- 一种利用慢病毒载体生产转基因水牛的方法
- 一种利用慢病毒载体生产转基因水牛的方法，其步骤为：首先进行高滴度慢病毒的包装及浓缩，对水牛胎儿成纤维细胞进行感染与筛选，采用显微注射法制作水牛转基因嵌合胚胎，将阳性胚胎移植到受体水牛。采用本发明的方法，成功获得了转外源基...
- 李湘萍石德顺孟凡丽刘庆友陆凤花罗婵蒋建荣
- 文献传递
- 电转染水牛胎儿成纤维细胞方法的建立
- 电转染法获得转基因动物绌胞是转基因克隆动物研究的重要技术环节。本研究探讨了利用电转染法制备水牛转基因体细胞作为供体,生产转基因克隆胚胎的可行性。采用组织块贴壁法分离培养得到水牛胎儿成纤维细胞,经核型分析表明得到的细胞具有...
- 罗婵陆凤花陈施蓓李楠任艳萍李辉刘庆友石德顺
- 关键词：转基因细胞克隆
- 文献传递
- 利用锌指核酸酶对水牛SSC细胞进行BMP15打靶的初步研究
- 精原干细胞(Spermatogonial stemcell,SSC)具有传递遗传信息和干细胞自我更新、分化的特性,最新报道显示以其作为靶细胞进行定向遗传修饰效率较高。目前将富集的SSC注入不育受体的睾丸,通过自然交配或I...
- 冯万有刘庆友陈施蓓罗婵石德顺
- 关键词：水牛BMP15精原干细胞锌指核酸酶
- 文献传递
- 一种肉牛育肥料预混装置
- 本实用新型公开了一种肉牛育肥料预混装置，包括混合桶、出料口、挡板、连接转轴、进料口、密封板、固定板、转轴、转动电机、穿线管、紧固螺丝和混合环。本实用新型的有益效果是：出料口贯穿混合桶的侧壁，并通过高温熔融的方式进行连接紧...
- 罗婵刘庆友崔奎青石德顺冯彤王鹏程
- 猪DUXA基因克隆及过表达载体的构建
- 2024年
- 收集猪体外受精(IVF)和体细胞核移植(SCNT)的2-细胞、4-细胞、8-细胞和16-细胞时期的胚胎,对各细胞阶段DUXA基因的表达进行比较分析;提取猪卵巢的RNA后通过RT-PCR克隆得到DUXA目的基因,对DUXA基因进行生物信息学分析;将目的基因片段连接至pCDNA3.1-EGFP载体中,再将载体转染至293T细胞中。结果显示,与IVF胚胎相比,DUXA基因在SCNT胚胎中的表达滞后;克隆的DUXA基因编码区全长678bp,与预期相符;核苷酸序列比对分析显示,猪DUXA和马DUXA基因同源性最高;各物种间DUXA蛋白氨基酸保守性较高;进化树结果显示,猪DUXA基因与骆驼相应序列聚为一支,与山羊、水牛、长江江豚等哺乳动物的遗传距离相对较近;利用在线分析工具对猪DUXA编码蛋白的理化性质进行预测,结果显示猪DUXA的化学分子式C1082H1732N344O354S7,相对分子质量为25448.17,理论等电点为9.4;猪DUXA二级结构预测包含11个α-螺旋、3个β-折叠、19个T-转角和20个无规则卷曲,具有2个HOX结构域,预测其为细胞膜外蛋白,其三级结构和黄牛、山羊、人相似。构建的pCDNA3.1-EGF-DUXA质粒载体长度为6797bp,转染结果显示构建的过表达载体可以在293T细胞中表达。结果表明,本试验成功克隆了猪DUXA基因,并成功构建了过表达载体pCDNA3.1-EGFP-DUXA。
- 吕美云张云川齐赟佳佘柳石德顺罗婵
- 关键词：基因克隆
- ICSI介导生产转基因牛胚胎影响因素的研究被引量：1
- 2014年
- 采用牛体外成熟卵母细胞和冷冻解冻的精子为材料,以pEGFP-N1为模式基因,探讨DNA浓度、精子质膜破损方法、注射台温度对牛精子胞质内注射(ICSI)介导转基因效果的影响。结果表明:线性pEGFPN1质粒DNA浓度为5μg/mL、10μg/mL两组的早期胚胎发育率显著高于50μg/mL组(19.8%,16.7%VS 7.9%,p<0.05)。以冻融、TritonX100、超声波断尾三种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(24.7%)最高,且冻融组的早期胚胎基因表达率极显著高于超声断尾组(41%VS 20.5%,p<0.01);当分别在25℃、38℃的注射台进行显微注射时,两组之间胚胎的囊胚率无显著差异(p>0.05),但二者之间胚胎的基因表达率差异显著(46.83%VS 28.57%,p<0.05)。以上结果表明:(1)牛精子转染外源GFP基因的浓度不宜过高,转染高浓度的DNA会影响胚胎发育;(2)精子质膜是阻碍外源DNA与牛精子相结合的主要因素,将精子冻融处理可有效破损其质膜,利于精子与外源DNA的结合,从而提高ICSI介导转基因效率;(3)25℃和38℃热台温度对牛ICSI胚胎的早期发育无影响,但25℃热台温度可提高牛ICSI介导转基因的效果。
- 孟凡丽陈自洪陆凤花刘庆友罗婵张顺王丹石德顺
