罗庆
- 作品数：93 被引量：247H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 骨形成蛋白家族成员2、7对小鼠胚胎肝干细胞分化的体外研究被引量：6
- 2013年
- 目的探讨骨形成蛋白2、7(BMP2、BMP7)对小鼠胚胎肝干细胞(HP14.5)定向诱导分化为肝细胞样细胞的影响。方法将表达BMP2、BMP7、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒作为4个组分别感染HP14.5,诱导其分化,在病毒感染后的第1、4、7天通过检测荧光素酶报告基因读数,在第7天通过细胞免疫荧光染色,观察肝细胞标志物白蛋白(ALB)的表达情况;并在第4、7、10天通过PAS染色、尿素氮合成功能检测,观察诱导后HP14.5向肝细胞方向的分化成熟度。结果 BMP2组、HGF组荧光素酶读数较GFP对照组明显上升;免疫荧光染色显示,诱导7d后BMP2组、HGF组细胞质内表达肝细胞特有的ALB,而GFP对照组几乎无表达;糖原染色可见BMP2组、HGF组胞质存在紫红色颗粒,呈阳性反应;尿素合成功能检测显示BMP2组、HGF组培养液中尿素氮随时间而升高。BMP7组诱导后,细胞免疫荧光染色、荧光素酶活性、PAS染色和尿素合成检测均呈阴性或弱阳性反应。结论 BMP2具有一定的诱导HP14.5向成熟肝细胞分化的作用,并初步具备肝细胞的合成分泌功能,而BMP7对其无诱导作用。
- 陈聪康权罗庆迭小红田雯
- 关键词：骨形态发生蛋白质类重组腺病毒
- 兔脂肪干细胞体外分离与培养
- 目的建立兔脂肪干细胞(ADSCs)体外分离培养的方法,为骨组织工程提供种子细胞。方法选用兔龄4个月雌性新西兰大白兔,采用无菌手术切取兔颈背部皮下脂肪组织,在无菌操作台内剪碎,用Ⅰ型胶原酶消化,经过洗涤、过滤、离心等步骤获...
- 张强罗庆甘立强傅跃先
- 文献传递
- SK-N-SH神经母细胞系肿瘤干细胞的培养及初步鉴定
- 目的从人神经母细胞系SK-N-SH中分离出肿瘤干细胞进行培养及其初步鉴定。方法用神经干细胞无血清悬浮培养的方法,可得到具有克隆性增生的肿瘤球,经过免疫荧光的初步鉴定克隆性增生细胞球和分化细胞的nestin的表达。结果神经...
- 宿玉玺罗庆赵珍珍郑改焕金先庆
- 文献传递
- siRNA沉默Id1基因对小鼠骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响被引量：5
- 2015年
- 目的 探究沉默分化抑制因子1 （Id1）表达对小鼠骨肉瘤（K7M2-WT）增殖、迁移及凋亡的影响及可能的分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的靶点.方法 实验分3组,空白对照组（Control组）,细胞未做任何处理；siRNA组重组腺病毒组（AdsiRNA组）,用带表达红色荧光蛋白基因的空载体腺病毒感染细胞；simId1重组腺病毒组（AdsimId1组）,特异性针对小鼠Id1基因的小干扰RNA重组腺病毒感染细胞.按分组分别处理K7M2-WT,用RT-PCR、Western bolt检测Id1的mRNA水平及蛋白水平表达,MTT法检测细胞增殖,划痕试验、Transwell检测细胞迁移能力,DAPI染色检测凋亡.结果 AdsimId1感染K7M2-WT 3d能沉默骨肉瘤细胞Id1基因mRNA及蛋白水平的表达.MTT显示Control组、AdsiRNA组和AdsimId1组OD值分别为0.520±0.032、0.490±0.010、0.220±0.006.沉默Id1基因抑制K7M2-WT细胞的增殖,相对Control组及AdsiRNA组抑制率分别为58％和55％（P＜O.05）.细胞划痕实验结果提示AdsimId1组细胞的迁移较Control组、AdsiRNA组减慢.Transwell实验结果：AdsimId1组的穿膜细胞数为（44.7±3.7）个,显著少于Control组（100.3±3.8）个及AdsiRNA组（103.8±4.4）个（P＜0.05）.AdsimId1组细胞凋亡较Control组、AdsiRNA组明显.结论 沉默Id1基因使骨肉瘤细胞增殖和迁移能力减弱,增强骨肉瘤细胞的凋亡,为骨肉瘤治疗提供新的靶点.
- 迭小红罗庆毕杨罗光金仇超刘敏康权
- 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡
- mdr1基因重组腺病毒转染小鼠单个核细胞对其胞内结构的影响
- 2007年
- 目的用表达EGFP和mdr1基因重组腺病毒转染原代培养的小鼠单个核细胞,研究该重组腺病毒在其细胞表达的安全性。方法将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr1转染原代培养的Babl/c小鼠单个核细胞,以EGFP做报告基因用荧光倒置显微镜观察其在细胞内的表达。用透射电镜观察其在胞内分布。结果荧光显微镜下可观察到转染成功的原代培养小鼠单个核细胞发绿色荧光。电镜检查其胞内有大量病毒颗粒存在,细胞超微结构正常。结论用EGFP检测转染重组腺病毒Ad-EGFP-mdr1的单个核细胞方法简单,其线粒体、内质网、细胞核等超微结构无病理性改变。实验证明转染是安全有效的。为进一步研究转染Ad-EGFP-mdr1单个核细胞回输的骨髓保护作用的安全性奠定基础。
- 赵珍珍金先庆罗庆
- 关键词：腺病毒超微结构
- 人多药耐药基因1(mdr1)的克隆及重组腺病毒制备被引量：5
- 2007年
- 目的:构建表达多药耐药基因1(MDR1)的重组腺病毒表达系统。方法:用基因工程技术将多药耐药基因1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,然后在细菌内与pAdEasy同源重组,经脂质体转染293细胞包装、扩增腺病毒颗粒。将重组腺病毒Ad5-mdr1感染小鼠单个核细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪进行检测。结果:酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功,构建的人多药耐药基因1(mdr1)重组腺病毒载体的效价达到8.3×1011pfu/ml。对小鼠单个核细胞的感染效率可达10%～15%,转染小鼠单个核细胞细胞48h后,可检测到mdr1基因的表达。结论:成功构建了表达多药耐药基因1的重组腺病毒载体,为后续对mdr1的相关研究创造了条件。
- 刘伟罗庆金先庆
- 关键词：多药耐药基因1腺病毒转染
- 果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)过表达对骨肉瘤细胞恶性逆转并向成骨分化的影响被引量：2
- 2019年
- 该研究探讨FBP1对人骨肉瘤MG63细胞恶性生物学行为即增殖、凋亡、迁移及成骨分化的调控作用。采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至人骨肉瘤MG63细胞中,并通过qRT-PCR和Western blot法检测FBP1的m RNA和蛋白表达水平,以验证FBP1基因过表达效果。通过CCK-8、结晶紫染色、活细胞计数法检测细胞增殖;AnnexinV-FITC双染法和DAPI染色法检测细胞凋亡,并通过Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达;应用细胞划痕实验、Transwell检测细胞的迁移能力;通过流式细胞术检测细胞周期;ALP染色和茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化作用。结果表明,过表达FBP1后增殖细胞数明显降低(P<0.01)、凋亡率明显增高(P<0.01)、划痕实验愈合率明显降低(P<0.01)、Transwell实验细胞穿膜数也明显减少(P<0.01);成骨诱导MG63细胞后ALP染色、茜素红染色阳性,钙盐结节明显增多;但3个组的细胞周期并无明显差异。综上所述,过表达FBP1可抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖,抑制迁移,促进其凋亡,并同时促进MG63细胞的早期和晚期成骨分化,且其增殖并非通过细胞周期调节。
- 谢圣男康权张遥陈洁罗庆
- 关键词：骨肉瘤增殖凋亡成骨分化
- 高表达CXCR4/CXCR7对小鼠胚胎肝干细胞增殖、迁移和抗氧化应激损伤的影响被引量：2
- 2017年
- 该研究探讨了基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/趋化性细胞因子受体4(chemotaxis cytokine receptor 4,CXCR4)和SDF-1/趋化性细胞因子受体7(CXCR7)对小鼠胚胎肝干细胞14-19(HP14-19)增殖、迁移和抗氧化应激损伤的影响。重组腺病毒Ad-CXCR4和Ad-CXCR7感染HP14-19细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞膜上CXCR4/CXCR7受体的表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移;过氧化氢(H2O2)处理细胞,建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞活力;酶学法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。结果显示,感染腺病毒Ad-CXCR4/CXCR7后,HP14-19细胞膜CXCR4/CXCR7受体水平显著上调;高表达CXCR7可增强细胞增殖活性,而高表达CXCR4对细胞增殖活性无显著效果;高表达CXCR4或CXCR7可显著增强SDF-1诱导的HP14-19细胞的迁移和氧化应激状态下的细胞存活率,其中,CXCR7对迁移效应较强;与对照组比较,高表达CXCR4或CXCR7可降低H2O2造成的细胞LDH活性,增强SOD活性。因此,CXCR4参与了SDF-1诱导的HP14-19细胞增殖作用,且CXCR4/CXCR7介导SDF-1诱导HP14-19细胞的迁移和抗氧化应激损伤作用。
- 肖程罗庆康权杨博王建龚梦嘉毕杨
- 关键词：肝干细胞细胞迁移
- 结缔组织生长因子的克隆及其真核表达载体的构建
- 2005年
- 目的 结缔组织生长因子(CTGF)在肿瘤发生,胚胎发育、骨折愈合、细胞增殖和分化、血管形成等众多领域都有着重要的作用,对结缔组织生长因子进行克隆及构建其真核表达载体,对其在功能上的进一步研究及应用有积极意义。方法 以含有鼠CTGF基因序列的EST克隆为模板,通过PCR的方法克隆出目的基因CTGF,再以分子克隆学的方法将CTGF克隆入真核表达载体 pAdTrack CMV,进一步以PCR、酶切、DNA测序的方法筛选出正确的真核表达质粒。并通过 Western Blotting的方法对质粒的表达功能进行研究。结果 PCR、酶切、DNA测序的方法均证实已经成功克隆获得序列正确的目的基因 CTGF,并将CTGF克隆入真核表达载体 pAdTrack CMV。Western Blotting的结果表明构建的表达 CTGF的真核表达载体高表达 CTGF蛋白质。结论 成功克隆目的基因CTGF并构建其真核表达质粒,证实在蛋白质水平获得了表达。
- 罗庆康权金先庆
- 关键词：CTGF真核表达载体
- 五种耐药基因在15种332例儿童恶性肿瘤组织中表达的特点及临床应用
- 目的意义本研究通过332例儿童肿瘤组织5种耐药基因表达蛋白(P-gp、 MRP、LRP、GST-π、TopoⅡ)的检测,了解各种肿瘤组织耐药基因表达蛋白的一般规律和特点。结合5种耐药基因表达蛋白的作用机制与化疗药物特点为...
- 金先庆李映良向丽李长春罗庆梁绍燕宿玉玺郑改焕
- 文献传递
