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肖迪: 作品数：113 被引量：105H指数：5; 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学哲学宗教更多>>

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空肠弯曲菌CadF蛋白的原核表达与产物分析被引量：1: 2010年; 目的构建空肠弯曲菌cadF基因重组表达质粒pET30a(+)-cadF,分析其在大肠埃希菌中的表达情况及其融合蛋白的抗原性。方法用PCR方法扩增cadF基因,构建重组克隆质粒和表达质粒,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定后在E.coli(DE3)原核表达系统中诱导表达,SDS-PAGE和飞行时间质谱鉴定表达蛋白,Western blot分析其抗原性。结果含重组表达载体pET-30a(+)-cadF中的cadF基因序列经测序证实与出发菌株cadF基因序列100%同源,并成功诱导表达CadF蛋白,Westernblot显示该CadF融合蛋白能被抗空肠弯曲菌多克隆兔血清识别。结论成功构建了空肠弯曲菌cadF基因重组表达载体,表达产物具有抗原性。; 周益装张茂俊肖迪孟凡亮张建中; 关键词：空肠弯曲菌原核表达抗原性

肺炎支原体基因型快速分型试剂盒: 本发明提供一种肺炎支原体基因型快速分型试剂盒，涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域。本发明基于质谱技术，构建了针对肺炎支原体进行快速分型鉴定的特异性多肽质谱模型，以及使用质谱技术进行分型的试剂盒。本发明试剂盒能够通过特异性指纹...; 赵飞张建中肖迪张慧芳张永婵胡源陶晓霞何利华顾一心孟凡亮; 文献传递

空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析: 2013年; 目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。; 刘红莹曹芳芳宫亚楠肖迪张茂俊; 关键词：空肠弯曲菌克隆抗原性

传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性的影响分析被引量：1: 2016年; 目的应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响。方法将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原。每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定。进一步采用Nano LC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定。结果幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性。幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类(29.6%)、核糖体蛋白(15.5%)、外膜蛋白(10.7%)、假想蛋白(19.0%)、转运相关蛋白(2.0%)、其他蛋白(22.0%)。结论细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性。; 张慧芳陶晓霞何利华闫笑梅王忱诚张建中肖迪; 关键词：肽质量指纹谱细菌鉴定传代稳定性

质谱技术在核酸检测分析中的研究进展: 2024年; 质谱技术是一种基于质谱仪设备检测物质分子量的谱学技术方法。质谱类型众多、功能各异,在各个学科领域中广泛用于科学研究与应用技术开发。近年来,质谱技术在核酸检测分析中显现出巨大的潜力,尤其是基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的核酸检测分析技术,因其快速、高通量、准确等特性而成为研究热点。采用质谱技术进行核酸研究,突出表现在对单核苷酸多态性、基因突变、DNA甲基化及DNA拷贝数变异的检测分析。本文对质谱技术在核酸检测中的研究与应用进行阐述,以期为基于质谱的新型核酸检测技术的开发与应用提供参考。; 赵欣肖迪; 关键词：质谱 DNA甲基化单核苷酸多态性

10kDa以上幽门螺杆菌感染相关尿液差异表达蛋白的高效液相色谱-质谱分析被引量：2: 2016年; 背景:除消化性溃疡和胃癌外,幽门螺杆菌(Hp)感染尚与多种胃肠外疾病密切相关。目前临床上尚无Hp感染的体液检测方法。目的:鉴定相对分子质量在10 k Da以上的Hp感染相关尿液差异表达蛋白,为Hp感染的体液诊断提供潜在生物学标记物。方法:志愿者留取晨起中段尿,并行13C-尿素呼气试验以明确Hp感染情况。Hp阴性和阳性尿液样本各取15例,分别混合后提取蛋白,以高效液相色谱-质谱系统分离蛋白、采集数据,行label-free定量分析。另取Hp阴性尿液样本15例和阳性尿液样本11例,对差异表达分析结果进行全扫描验证。应用IPA软件对鉴定出的尿液差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:Label-free定量分析共检测到475个尿液蛋白,并确定其中42个为差异表达蛋白。经外部扫描验证,最终鉴定出11个显著上调的差异表达蛋白。生物信息学分析揭示了这些差异表达蛋白的分子功能、参与的生物学通路、相关疾病等信息。结论:鉴定出的11个10 k Da以上尿液差异表达蛋白有望成为诊断Hp感染的生物学标记物,并可为Hp感染与胃肠外疾病的相关性研究提供分子水平的证据。; 张慧芳孟凡亮何利华何利华肖迪; 关键词：幽门螺杆菌蛋白质组学生物学标记

幽门螺杆菌26695及其不同克拉霉素耐药水平衍生株的比较蛋白质组学分析被引量：1: 2007年; 背景:目前克拉霉素耐药机制的研究主要集中于对幽门螺杆菌(H.pylori)23S rRNA基因的分析,其他基因与克拉霉素耐药的关系在国内外尚未见报道。目的:应用蛋白质组学技术分析不同克拉霉素浓度下耐药H.pylori菌株的发生机制,以期发现新的克拉霉素耐药相关基因。方法:以H.pylori 26695为出发菌株,在含克拉霉素平皿上选择耐药突变体,提取全菌蛋白后通过双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白,银染后应用Image Master 2D Elite软件比较不同浓度克拉霉素耐药株和野生株的蛋白表达差异,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,并在NCBI的H.pylori蛋白数据库中搜索理论上酶解肽段能与之相匹配的蛋白。结果:共10个蛋白点在耐药株与野生株以及不同浓度耐药株间有明显差异,其中3个蛋白点为DNA指导的RNA多聚酶α亚单位,其表达量和等电点在耐药株与野生株间存在明显差异;1个蛋白点为黄素氧化还原蛋白,其在耐药株中的表达量上调;2个蛋白点为30S核糖体蛋白S1,其在耐药株中的表达量下调;3个蛋白点为过氧化氢酶,其在耐药株中的表达量上调;1个蛋白点为细胞分裂抑制剂,其在低浓度克拉霉素耐药株中的表达量较野生株上调,而在高浓度克拉霉素耐药株中的表达量较野生株下调。结论:不同浓度克拉霉素耐药株的耐药机制有不同的相关靶点,为研究H.pylori 23S rRNA以外克拉霉素的耐药机制提供了线索。; 姜葵赵飞王邦茂肖迪胡源闫笑梅顾一心张建中; 关键词：螺杆菌克拉霉素耐药蛋白质组学

钩端螺旋体快速质谱检测试剂盒: 本发明提供一种钩端螺旋体致病性（毒性）快速质谱检测试剂盒，涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域。本发明基于质谱技术，构建了针对钩端螺旋体进行快速致病性鉴定的特异性多肽质谱模型，以及使用质谱技术进行致病性检测的试剂盒。本发明试剂...; 肖迪张翠彩张建中蒋秀高张慧芳李秀文; 文献传递

鉴定幽门螺杆菌抗原肽的方法及应用: 本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种系统鉴定幽门螺杆菌抗原肽的方法及应用。本发明提供的方法包括：制备幽门螺杆菌裂解液；使用树突状细胞摄取所述幽门螺杆菌裂解液中的抗原肽，形成MHC‑II抗原肽复合物；裂解提呈抗原的树突...; 宫雅楠翟康乐张建中孙路何利华肖迪

日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶抗体反应模式及诊断价值的研究被引量：6: 2015年; 目的观察血吸虫感染家兔体内抗日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBA)抗体反应的动态变化,评价检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法采用RT-PCR方法从日本血吸虫中国大陆株cDNA中扩增出编码Sj FBA的开放阅读框基因片段,然后亚克隆到表达质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj FBA-pET28a。将重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经镍螯合胶亲和层析的方法纯化重组Sj FBA蛋白。用日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染日本大白兔,6周后用吡喹酮与青蒿琥酯进行治疗,收集感染前和感染后2、4、6周及治疗后2、4、6、8、10、12、14、16周的血样。以重组Sj FBA为包被抗原,建立检测抗Sj FBA抗体IgG的酶联免疫吸附试验方法(rSj FBA-ELISA),用于检测家兔不同感染阶段血清抗Sj FBA抗体反应模式。分别用5、10、15和20条日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染小鼠,收集感染后35d的小鼠血清,采用rSj FBA-ELISA检测抗Sj FBA抗体IgG并观察抗Sj FBA抗体水平与感染度的关系。用rSj FBA-ELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清、华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清,观察该方法用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;使用该方法检测治疗前及治疗后1年的同一血吸虫现症感染患者的配对血清,观察抗Sj FBA抗体IgG检测用于血吸虫病疗效考核的价值。结果血吸虫感染家兔体内抗Sj FBA抗体IgG水平随感染时间的延长而逐渐增强,感染6周达到高峰(A450值为1.364),但治疗后抗Sj FBA的抗体则迅速下降,治疗6-8周后抗体水平可下降至阴性阈值(A450值为0.4),而未治疗组则抗体水平则始终保持在高水平,表明家兔体内抗Sj FBA抗体反应呈典型的短寿抗体反应模式。不同感染度小鼠血清抗Sj FBA抗体水平随着感染度的升高而逐渐升高,呈剂量依; 王玠余传信肖迪赵飞殷旭仁宋丽君沈双高玒张建中何利华许永良杨静; 关键词：日本血吸虫中国大陆株现症感染免疫诊断疗效考核

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