蒋再学
- 作品数：14 被引量：3H指数：1
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- 犬瘟热病毒N、F蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2013年
- 为了制备犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白的多克隆抗体,试验将犬瘟热病毒N基因、F基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌Rostte(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,将表达的蛋白纯化,免疫SPF级KM小鼠制备抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价,Western-blot检测其反应原性。结果表明:犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白在大肠杆菌中高效表达,制备的抗体效价高达1×105,且能特异性识别犬瘟热病毒的N蛋白、F蛋白。
- 蒋再学竺薇唐志玲肖建雄罗满林
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白F蛋白原核表达多克隆抗体
- 一种PCV3的荧光免疫层析检测卡的制备方法
- 本发明公开了一种PCV3的荧光免疫层析检测卡的制备方法，在粘性底板上依次粘贴样品垫、结合垫（固定抗体）、层析膜和吸水纸，还包括PCV3单克隆抗体的配对标记，是取多支PCV3单克隆抗体分别标记荧光微球，采用双抗体夹心原理：...
- 蒋再学罗满林吴佳俊蒋梅卜婉迪肖丽
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型ORF1和ORF3T淋巴细胞抗原表位的克隆与原核表达
- 2013年
- 根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒,命名为pET-TCE.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示合成基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为25 000,Western-blot分析结果表明,获得的融合蛋白可与猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性.
- 高娟王艳玲蒋再学竺薇罗满林
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达
- 广东地区犬瘟热病毒分子流行病学调查被引量：2
- 2013年
- 为了解犬瘟热病毒(CDV)在广东地区的分子流行情况及遗传变异规律,本研究从广东省多地采集疑似感染犬瘟热病毒的患病犬的血液、体内组织样品100份,经RT-PCR法检测,共检出90份阳性病料。随机选取10份阳性病料进行CDV H基因扩增,序列分析表明该地区内H基因的同源性为96.6%～99.8%,与参考毒株的H基因同源性为89.9%～97.9%。遗传进化分析发现所检测样品大部分属于亚洲I型毒株,使用软件预测H蛋白的糖基化位点数,发现所有被检测野毒株的糖基化位点数为9个,而疫苗株的为4个或7个。本研究明确广东地区犬瘟热病毒H蛋白基因的变异趋势,为疫苗的选择或开发奠定了基础,为广东地区犬瘟热的防控提供了参考。
- 竺薇蒋再学张晓明罗满林
- 关键词：犬瘟热病毒H基因逆转录-聚合酶链反应
- 人3型腺病毒纤突的原核表达及其免疫原性分析
- 2016年
- 目的克隆表达人3型腺病毒（HAdV-3）的纤毛蛋白纤突片段（knob）,分析其免疫原性,为腺病毒临床诊断试剂及新型疫苗的研发奠定基础。方法 PCR扩增knob基因片段,克隆到表达载体pGEX-4T-3中进行诱导表达,SDSPAGE电泳分析表达产物,包涵体溶解复性后亲和层析纯化融合蛋白,Western blot鉴定,纯化的蛋白免疫小鼠制备抗血清,间接ELISA法检测小鼠血清的效价,Western blot鉴定抗血清特异性。结果成功构建了重组原核表达质粒pGEX-Ad3 knob,其在大肠杆菌中高效表达并纯化重组knob融合蛋白,融合蛋白免疫小鼠抗血清效价高达10~7,Western Blot证实此抗血清可识别人3型腺病毒纤维蛋白。结论成功获得了重组HAdV-3 knob蛋白,其具有强免疫原性,可以作为研发人3型腺病毒入侵机制研究、诊断试剂及疫苗研发的原料。
- 蒋再学王芳田新贵朱蔚云苏晓波
- 关键词：多克隆抗体
- 广东地区犬瘟热病毒分子流行病学调查与病毒的分离鉴定及H抗原片段的原核表达
- 从广东省多地采集患病犬的血液、体内组织样品，经过RT-PCR，扩增大小为481bp：经比对后鉴定，共检出90份阳性病料。 根据GenBank中已知的基因序列，通过软件比对，设计了一对扩增CDV H基因的全基因引物。提取...
- 蒋再学
- 关键词：犬瘟热病毒H基因RT-PCR技术克隆表达
- 犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究被引量：1
- 2012年
- 本研究根据酵母系统密码子的偏嗜性,对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造,利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价,同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本试验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达,表达量高达58 mg/L,SDS-PAGE检测大小约为24 ku,比预测分子质量大,推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性,在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性,达到了3.6×107U/L,对CDV也有很好的抑制作用。本研究为犬IFN-α以后的临床应用研究奠定基础。
- 张淑琼高娟曾思遥蒋再学陈瑞爱罗满林
- 关键词：酵母表达抗病毒活性
- 一种猪圆环病毒3型感染性克隆的构建及鉴定方法
- 本发明公开了一种猪圆环病毒3型（PCV3）感染性克隆的构建方法及鉴定方法，构建时利用圆环病毒本身的特性，即PCV3的核酸为环状DNA，任何位置都可以看做是起始位点也可以看做是终点的特征，首先对PCV3的DNA序列进行重排...
- 蒋再学罗满林吴佳俊蒋梅卜婉迪
- PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用
- 本发明公开了一种可以鉴别PCV3 Cap单克隆抗体的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用，包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：PCV3 Cap 47‑62:NVISVGTPQNNKPWHA；PCV3 C...
- 罗满林吴佳骏蒋再学霍礼侠蒋梅卜婉迪刘灿彬
- 文献传递
- PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法
- 本发明公开了PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法，包括五条多其氨基酸序列分别为PCV3‑1：GTPQNNKPWH；PCV3‑2：SPAQQTKTMF；PCV3‑3：WLQDDPYAESSTRKV；PCV3‑4：MTSKKK...
- 蒋再学罗满林刘向楠吴梦凡霍礼侠吴佳俊
- 文献传递
