蔡晓坤
- 作品数：17 被引量：53H指数：4
- 供职机构：厦门大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIF-1α对人肝癌HepG_2细胞生长的影响被引量：9
- 2005年
- 目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肝癌细胞株HepG2体内生长的影响,并探讨其可能机制。方法将HIF-1α转入人肝癌细胞HepG2中,建立人肝癌裸鼠模型,观察其生长。切除瘤灶、称瘤重。标本用免疫组化和western-blot检测HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果HepG2细胞对HIF-1α敏感,细胞生长速度加快。结论HIF-1α体内可促进肝癌HepG2的生长,其机制可能与其促血管生成有关。
- 刘址忠林菊生蔡晓坤李孝生黄文英
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α血管内皮生长因子肝癌
- PNP—CD融合自杀基因系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究
- 2010年
- 目的分析PNP—CD融合自杀基因系统对肝癌细胞HepG2的杀伤作用并探讨其可能的机制。方法利用重组PCR定点诱变法制备融合基因PNP—CD。将PNP—CD插入真核表达载体pcDNA3．O中，构建融合自杀基因表达载体pcDNA3．0／PNP—CD。经酶切、PCR及测序鉴定重组体，G418筛选获得稳定转染pcDNA3．0／PNP—CD的抗性细胞克隆。用RTPCR和Western Blotting法检测PNPCD基因在HepG2细胞中的表达。用台盼蓝排斥法检测细胞生长曲线，用MTT法检测细胞细胞克隆对相应前药敏感性及所导致的旁观者效应。结果融合基因片段PNP—CD正确插入了pcDNA3．0中，pcDNA3．0／PNPCD在HepG2细胞中实现了表达。细胞抗性克隆对特定的前药高度敏感。在两种前药联合作用下，pcDNA3．0／PNP—CD所致旁观者效应明显强于只给予MeP—dR一种前药所致旁观者效应。结论具有双自杀基因功能的PNPCD融合基因系统是肝癌基因治疗中一种高效治疗载体，对肝癌细胞有着良好的杀伤作用。
- 彭友缘严武蔡晓坤尹震宇
- 关键词：融合自杀基因
- AF0.3启动子调控的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤作用被引量：5
- 2006年
- 背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichiacolipurinenucleosidephosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应。本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞。RT-PCR检测二者在细胞中的表达。台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性。结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感。在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应。HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性。结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用。
- 蔡晓坤周俊立周鹤俊张玲吴健鸿林菊生
- 关键词：AFP阳性肝肿瘤HEPG2细胞基因治疗
- CYP2B1新型自杀基因的真核表达载体的构建和瞬时表达被引量：1
- 2005年
- 目的 构建一种新型的CYP2B1自杀基因表达载体并检测其在肿瘤细胞中的表达。方法 根据genebank中鼠CYP2B1基因的核苷酸序列设计一对引物 ,以pc3 /2B1为模板进行PCR扩增 ,将PCRCYP2B1基因产物定向插入到pcDNA3 0中 ,构建CYP2B1基因表达载体pcDNA3 0 /CYP2B1;通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3 0 /CYP2B1转染三种肿瘤细胞株 ,RT -PCR检测CYP2B1基因在各细胞株中的表达。结果 目的片段均成功插入相应的载体中 ,CMV启动子调控下的CYP2B1基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论 CMV启动子调控的CYP2B1真核基因表达载体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗载体。
- 刘址忠蔡晓坤林菊生任精华梁扩寰黄文英
- 关键词：真核表达载体肿瘤基因治疗
- 静脉麻醉辅助胃镜检查的效果被引量：4
- 2004年
- 目的在胃镜检查中以良好的镇静效果,增加患者接受检查的依从性,提高检查的成功率。方法将350例患者随机分为观察组(180例,给予异丙酚和咪唑安定静脉麻醉)与对照组(170例,常规操作),对2组患者的操作时间、检查成功率、检查反应以及检查前、中、后三个阶段的心率、血压、呼吸和血氧饱和度进行观察。结果观察组操作时间、检查成功率和检查反应等方面明显优于对照组(P<0.05),检查前后心率和血氧饱和度的变化与对照组比较差异无显著意义(P>0.05)。结论辅以异丙酚和咪唑安定静脉麻醉进行胃镜检查是安全有效的,为无痛胃镜检查及治疗开辟了广阔的前景。
- 刘址忠林菊生蔡晓坤田德安黄文英刘功成
- 关键词：胃镜检查静脉麻醉
- 两种甲胎蛋白启动子调控下PNP基因载体的克隆和表达差异性分析
- 2005年
- 目的:分别构建甲胎蛋白(α- fetoprotein,AFP)启动子AF 0 3和AFP杂合启动子[HRE]AF调控的 PNP基因表达载体,检测并分析两者的表达差异性。方法: 将AF 0 3和[HRE]AF启动子插入载体 pcDNA- 3 .0 中,构建肝癌特异表达载体pAF- 0. 3 和 p[HRE]AF;将 PNP基因分别插入 pAF -0 .3 和 p[HRE] AF中,构建两启动子调控的 PNP基因表达载体;通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。用脂质体介导法将两重组体转染不同细胞株,RT PCR检测 PNP基因在各细胞株中表达,分析两者表达的特点。结果: 两目的片段均正确插入相应载体,pAF- 0 3/PNP中的 PNP基因在 AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而p[HRE] AF/PNP 中的 PNP 基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了靶向性表达。结论: 两种 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效、特异性的治疗载体。两者的成功构建为利用PNP/Mep -dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗奠定了坚实的基础。
- 蔡晓坤林菊生刘址忠谢娜梁扩寰
- 关键词：甲胎蛋白类基因疗法
- PNP表达质粒的构建及鉴定
- 2005年
- 目的构建并鉴定一种新型的PNP自杀基因表达载体。方法将PNP基因插入到pcDNA3.0中,构建PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP;通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3.0/PNP转染三种肿瘤细胞株,RTPCR检测PNP基因在各细胞株中的表达。结果目的片段均成功插入相应的载体中,CMV启动子调控下的PNP基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论CMV启动子调控的PNP基因表达载体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗载体。
- 蔡晓坤刘址忠林菊生马昕梁扩寰
- 关键词：肿瘤基因治疗
- PNP—CD融合自杀基因系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究
- 目的采用肝细胞肝癌的细胞株,分析PNP-CD融合自杀基因系统对肝癌细胞HepG2的杀伤作用并探讨其可能的杀伤机制,为临床方面治疗原发性肝癌探索新的治疗途径。方法利用重组PCR定点诱变法制备融合基因PNP-CD,将其插入真...
- 彭友缘尹震宇王效民严武蔡晓坤
- 不同启动子调控的PNP基因载体的构建和表达差异性分析被引量：1
- 2005年
- 目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表达载体 pAF0 .3; 将 PNP基因分别插入到 pcDNA3 .0 和 pAF0. 3 中, 构建不同启动子调控下的PNP基因表达载体 pcDNA3 .0/PNP和 pAF0. 3/PNP; 通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将两种PNP基因表达载体转染不同的细胞株, RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达, 分析二者表达的不同。结果各目的片段均成功插入相应的载体中, CMV启动子调控下的 PNP基因在各株细胞中均实现了表达, 而 AF0 3 启动子调控下的PNP基因则在AFP阳性肝癌细胞中实现了组织特异性表达。结论 两 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体, 且 pAF0. 3/PNP还实现了在AFP阳性肝癌细胞中的靶向性表达。
- 蔡晓坤林菊生刘址忠薛秀兰梁扩寰
- 关键词：PNP启动子基因表达载体基因PCDNA3组织特异性重组体
- 源于新型PNP/Mep-dR系统的融合及单自杀基因载体的构建和表达检测被引量：2
- 2004年
- 目的 构建源于PNP/Mep -dR系统的融合及单自杀基因表达载体并检测二者表达。方法 经DNA重组技术制备融合基因PNP -TK ,将其及PNP基因分别插入真核表达载体pcDNA3 0 ,构建两真核表达载体pcDNA3 0 /PNP -TK和pcDNA3 0 /PNP ;酶切、PCR及测序鉴定两重组体。结果 成功构建了两个新型自杀基因表达载体并在HepG2细胞株中检测到二者表达。结论 两个重组体 ,尤其是pcDNA3 0 /PNP -TK ,是肿瘤基因治疗中高效、广谱的理想载体。
- 蔡晓坤林菊生刘址忠刘雪梅梁扩寰
- 关键词：自杀基因PNPPCDNA3DR系统肿瘤基因治疗重组体
