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辣椒CaWRKY5启动子的分离及其调控元件分析被引量：10: 2013年; 采用Genome walking方法从辣椒基因组DNA中分离获得辣椒CaWRKY5基因上游的启动子序列,命名为CaWRKY5p.为了分析CaWRKY5p对病原菌和机械损伤的应答以及可能的调控区域,将该基因5’端顺序4个不同缺失片段分别与GUS报告基因相融合构成表达载体,在农杆菌介导的烟草叶片瞬间表达系统中表达.结果表明:启动子TATA框为起始密码子ATG上游-140 bp至-136 bp之间的TATATAA,同时含有多种与逆境胁迫相关的顺式作用元件,如W-box、S-box、MeJA应答元件和ABRE类似元件等;CaWRKYK5基因上游-936 bp启动子可以应答青枯病菌、抗病信号分子以及机械损伤;CaWRKY5p应答青枯病菌和茉莉酸甲酯(MeJA)的核心元件可能位于启动子-886 bp至-489 bp之间,应答乙烯(ET)核心调控区域位于-936 bp和-886 bp之间,而应答机械损伤的核心元件位于启动子-336 bp以及ATG之间.; 刘志钦杨晟蔡金森黄雪盈马小玲石兰平王博郭吟枫陈桂信牟少亮官德义何水林; 关键词：辣椒

辣椒CaMAPK7的全长cDNA克隆及其表达分析被引量：1: 2014年; 以辣椒均一化cDNA文库为模板,通过特异性引物的PCR扩增,获得CaMAPK7全长cDNA序列,该序列含有1个370个氨基酸序列的开放阅读框,与拟南芥等其他植物具有84%-97%的氨基酸同源性。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在辣椒的根、茎和叶中均有不同程度的组成型表达,在根部的表达最高,在叶片中该基因的表达受到青枯菌侵染、高温等逆境及水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯等外源激素处理的诱导,但脱落酸处理使其表达下调。这些结果表明CaMAPK7可能在辣椒应答青枯病和高温等逆境胁迫中起着重要的作用。; 石兰平杨晟申磊蔡金森唐倩官德义刘志钦何水林; 关键词：辣椒蛋白激酶组织特异性

辣椒酵母单杂交系统的建立及调控CaWRKY40表达的转录因子分离被引量：1: 2015年; 辣椒CaWRKY40的转录表达受到病原菌和高温的诱导并在辣椒抗青枯病以及耐高温中起着重要的作用,但其应答青枯菌侵染和高温胁迫表达的调节机制还不清楚。为了进一步分离调节CaWRKY40表达的转录因子,建立辣椒酵母单杂交cDNA文库,以CaWRKY40启动子的青枯病原菌及高温应答区域CaWRKY40p(W40p)为诱饵,筛选cDNA文库,共获得56个阳性克隆。序列分析结果表明,有27个克隆为非重复序列,对其推定氨基酸序列进行同源比对和功能结构域分析,发现有1个推定转录因子,即ARF(Auxin response factor),以及其他蛋白如eIF(Eukaryotic initiation factor,真核起始因子),EF(延伸因子,Elongation factor)等。进一步通过染色质免疫共沉淀验证这些转录因子与W40p的结合。剖析CaWRKY40表达的分子机制有利于深入解析CaWRKY40介导的辣椒抗病及耐高温分子机制。; 黄雪盈石兰平杨晟申磊刘艳艳文嘉瑜蔡金森唐倩张杨文刘志钦何水林; 关键词：病原菌启动子酵母单杂交

CaDREB3启动子分离及其缺失体转基因烟草的获得被引量：1: 2014年; CaDREB3是辣椒DREB家族中1个成员,为明确CaDREB3受逆境胁迫诱导表达的分子机制,从辣椒基因组DNA中分离获得了CaDREB3上游的启动子,利用生物信息学软件进行顺式作用元件的分析,结果表明该启动子的TATA框为起始密码子ATG上游-89 bp至-86 bp的TATA,同时含有多种与逆境胁迫相关的顺式作用元件,如ABRE、HSE、MYB和TCA等,并使用Gateway技术构建了启动子6个缺失体的GUS融合载体,获得了6个缺失体的烟草转基因植株,这些结果为将来分析该启动子应答逆境胁迫的调控区域奠定了一定的基础。; 蔡金森王博杨晟石兰平文嘉瑜史玮刘志钦贺俐吴杨何水林; 关键词：DREB转录因子 GENOME WALKING 启动子

一个辣椒14-3-3蛋白家族成员cDNA分离及其应答青枯病侵染表达分析: 2014年; 14-3-3蛋白是一类在真核生物组织中广泛表达并主要通过与不同的靶蛋白互作参与一系列细胞信号传导和代谢过程的酸性类调控蛋白。通过对辣椒(Capsicum annuum L.)均一化cDNA文库的筛选,首次分离获得一个辣椒推定蛋白14-3-3的全长cDNA,长度为1 251 bp,含有一个长度为765 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),其推定的蛋白质含有254个氨基酸残基,理论分子量约为28.7 ku,等电点为4.8,无明显信号肽及跨膜区,定名为Ca14-3-3a。序列分析显示Ca14-3-3a属于非ε样14-3-3蛋白,与番茄TFT10及烟草T14-3g的氨基酸序列一致性分别高达96%和93%,尤其是介导14-3-3蛋白与SPS(Sucrose-6-Phosphate Synthase)互作的C端序列完全一致,暗示其可能参与辣椒蔗糖代谢。实时定量PCR结果显示Ca14-3-3a基因在辣椒青枯菌处理下表达水平持续下调,推测其还可能通过与不同的靶蛋白结合参与植物病原菌防御应答。; 吴吉陈雄邱爱连蔡金森官德义何水林; 关键词：辣椒青枯菌实时定量PCR

拟南芥AtLURP1基因启动子在转基因烟草和水稻中的功能分析被引量：4: 2013年; 克隆拟南芥LURP1基因上游1 515 bp的启动子调控序列并命名为AtLURP1p,将其与GUS报告基因融合,构建成植物表达载体,分别遗传转化烟草和水稻,获得LURP1p::GUS的烟草和水稻转基因植株及其相应的T2代株系,分别研究LURP1p对水稻稻瘟病、辣椒青枯病侵染及SA、MeJA、ABA等几种重要的植物激素信号分子处理的应答。结果表明:(1)转基因烟草和水稻在几种激素,包括SA、MeJA、ABA的诱导处理下,GUS基因均可以被诱导表达;(2)转基因烟草在细菌性病菌青枯病的侵染下,GUS可被诱导表达并表现出持续表达的趋势,转基因水稻在稻瘟病的侵染下,其GUS基因也被诱导表达,并表现出后期持续上调的趋势。这些研究结果表明,拟南芥LURP1的应答逆境信号通路也存在于烟草和水稻等植物,该启动子可用作诱导型启动子广泛地应用于不同植物抗病基因工程。; 刘志钦马小玲严雁黄雪盈蔡金森陈伟石兰平王博牟少亮官德义何水林; 关键词：启动子烟草水稻

水稻Pi-ta启动子的克隆及其功能分析被引量：7: 2013年; 本研究分离了水稻品种日本晴Pi-ta基因的启动子,并构建其GUS融合表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化获得了其转基因植株。以获得的转基因水稻为材料进行GUS组织染色和GUS(β-葡萄糖苷酸酶)酶活性分析,结果表明,GUS基因在根、茎和叶中都有表达,转基因植株在接种稻瘟病菌后GUS活性显著增加。用抗病信号分子水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理后,Pi-ta启动子驱动的GUS活性也显著增加。以上结果表明,Pi-ta启动子是一个对稻瘟病菌应答的诱导型启动子,同时Pi-ta启动子还受到SA和MeJA的诱导表达。; 牟少亮蔡金森严雁邱爱连官德义何水林; 关键词：启动子 GUS 转基因水稻

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蔡金森