薛宇鸣
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家攀登计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程理学更多>>
- 两种尿激酶原变体(Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His,Lys^(300)→His和Ala^(175)→Ser,Tyr^(187)→His)的构建及性质研究被引量：1
- 2000年
- 利用定点突变方法 ,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Ser,Tyr187→His ,Lys30 0→His)及muk2 (Ala175→Ser ,Tyr187→His) .两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL2 1中表达得到包涵体 ,经体外变复性 ,SP Sepharose离子交换柱层析 ,Benzamidine Sepharose吸附除去双链尿激酶 ,得到的蛋白均为银染一条带 .用人工合成的发色底物S2 4 4 4测量muk1、muk2的动力学性质 ,muk1的内在酶活性比野生型 pro UK降低 8倍 ,muk2的内在酶活性比野生型 pro UK降低 2 .5倍 ;它们经纤溶酶 (plasmin)激活后的双链活性与 pro UK相比分别为muk1提高 50 % ,muk2和pro UK相当 .在实验基础上讨论了 pro UK高内源性催化活性的机制及其结构基础 .
- 史蔚朱慧薛宇鸣唐堂马忠
- 关键词：尿激酶原定点突变血栓
- 五种尿激酶变体基因及在大肠杆菌中的表达
- 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽药物的技术领域，其目的是利用寡核苷酸介导的定点突变，改造人尿激酶基因，获得五种尿激酶变体基因，即：(Lys<Sup>151</Sup>→Glu)UK，(Lys<Sup>151...
- 马忠朱德煦彭贵洪余瑞荣薛宇鸣
- 文献传递
- T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化被引量：6
- 1997年
- 化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。
- 彭贵洪马忠薛宇鸣陈于红朱德煦
- 关键词：人尿激酶原T7启动子
- 重组人尿激酶原的体外变复性研究(英文)被引量：5
- 2001年
- 目的 重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体 ,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率。方法 通过对pH、温度、变性剂种类及浓度、蛋白浓度、以及巯基氧化还原对比率等的定性定量分析 ,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件 ,并比较了添加一些非特异有效成分、脉冲稀释、梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。结果 确定了重组人尿激酶原体外变复性的基本方法 ,其复性效率可达 30 %左右。结论 不同的包涵体蛋白的体外变复性效率因蛋白的分子大小、二巯键数目、疏水程度等而异 。
- 朱慧刘伟史蔚薛宇鸣蒯乐天马忠
- 关键词：重组人尿激酶原复性
- 重组人尿激酶原的体外变复性研究被引量：14
- 2000年
- 重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率,通过对pH,温度,变性剂种类及浓度,蛋白浓度,以及巯基氧化还原对的比率等的定性定量分析,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件,并比较了添加某些非特异有效成分,脉冲稀释,梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。确定了重组人尿激酶原体外变复性的适宜方法,复性效率可达20%～30%。
- 朱慧刘伟史蔚薛宇鸣马忠
- 关键词：重组人尿激酶原复性
- 五种尿激酶变体基因及在大肠杆菌中的表达
- 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽药物的技术领域，其目的是利用寡核苷酸介导的定点突变，改造人尿激酶基因，获得五种尿激酶变体基因，即：(Lys<Sup>151</Sup>→Glu)UK，(Lys<Sup>151...
- 马忠朱德煦彭贵洪余瑞荣薛宇鸣
- 文献传递
- 环境条件对极大螺旋藻金属元素吸收的影响被引量：4
- 1996年
- 研究了不同微量元素浓度和不同EDTA加入量对极大螺旋藻金属元素吸收的影响。结果显示,增加培养基中的微量元素含量有利于藻细胞对金属元素的吸收。少量EDTA的加入,有助于部分金属元素的吸收,较大量的EDTA可阻碍金属元素的吸收。藻细胞的吸附实验表明,极大螺旋藻对Co、Ni、Cu、Zn、Pb有很强的吸附能力,死细胞与活细胞的吸附能力相近,表明这一吸附过程不依赖于生理活动。
- 李建宏曾昭琪薛宇鸣邰子厚
- 关键词：螺旋藻金属元素
- 将α乳清蛋白改造成具有生物活性的溶菌酶的蛋白质工程
- 以α乳清蛋白和溶菌酶的三维空间结构和溶菌酶的催化机制为基础,通过分子设计,将牛α乳清蛋白的基因进行六点突变,突变体α6t在大肠杆菌BL21(DE3)/pLys中进行高效表达.通过包涵体的变复性、蛋白质纯化,得到了具有溶菌...
- 薛宇鸣
- 关键词：生物活性溶菌酶蛋白质工程
- 具有溶菌酶的部分生物活性的α-乳清蛋白(^(32)His→Leu,^(33)Thr→Glu,^(103)Tyr→Ala)突变体
- 2001年
- 在溶菌酶催化机理以及α 乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上 ,构建了含 3个突变点的α 乳清蛋白突变体 (H32L ,T33E ,Y10 3A) ,并将其克隆到具有T7启动子的表达质粒pET2 8a(+ )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3) /pLys中获得高效表达 .存在于包涵体中的目标蛋白经变复性并通过DEAESepharoseStreamline和SephacrylS2 0 0层析柱获得纯化蛋白 .合成底物 p Nitrophenyl β D N’ ,N’’ ,N’’’ Triacetyl chitotriose [pNP (NAcGlc) 3]与突变体蛋白的反应时间曲线证明突变体蛋白获得了部分溶菌酶生物活性 ,为重组鸡蛋清溶菌酶 (HEWL)的 5 .2 6 % .利用等温滴定量热法测定突变体蛋白与五糖底物chitopentaose的平均热结合能为 71.34kJ/mol,重组HEWL为 10 5 .4 7kJ/mol.实验表明 ,通过有限的几个突变就可以使α 乳清蛋白获得溶菌酶的活性 。
- 薛宇鸣程霓吴春雷李烨张敏跃
- 关键词：溶菌酶生物活性突变体
- 纤维蛋白高选择性尿激酶变体的研究被引量：2
- 1997年
- 双链尿激酶(tcu-PA)作为最早进入临床使用的溶栓药物,由于它对纤维蛋白(fibrin)没有选择性,大剂量静脉注射时会使血液中纤维蛋白原(Fibrinogen)降解,从而引发出血,因此在临床应用上受到限制.单链尿激酶(scu-PA,又称尿激酶原)是tuc-PA的前体,但它不同于一般的酶原,具有一定的内在纤溶酶原激活剂(PA)活性,而且能选择性地在Fibrin表面活化纤溶酶原,从而选择性地溶解血栓凝块.scu-PA经纤溶酶(Plasmin)的作用在Lys158-Ile159肽键断裂,转变成tcu-PA,由Cys148和Cys279间形成的一对二硫键将两条钛链连接、我们以前的工作证明尿激酶A链的Lys151和Arg154氨基酸残基是导致双链尿激酶对纤维蛋白低选择性的结构基础.本文通过定点突变手段构建了变体尿激酶原(Glu151-Gly154-rscu-PA)基因(以下简称mscu-PA),并在E.coli中获得表达、测定了表达产物的双链形式mtcu-PA及未突变的重组尿激酶原(rscu-PA)及其双链形式(rtcu-PA)对Fibrin的亲和性以及对血浆中纤维蛋白的选择性,结果证明所得变体双链尿激酶对Fibrin具有较高的选择性.
- 彭贵洪马忠余瑞荣薛宇鸣朱德煦
- 关键词：定点突变纤维蛋白选择性尿激酶
