许红丽
- 作品数：11 被引量：26H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省重大科技成果转化项目国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水貂阿留申病研究进展
- 本文从病原学、流行病学、致病特点、病毒分子生物学特点、病毒免疫特点方面对水貂阿留申病的研究现状进行概述。
- 杨莘王建科易立许红丽罗彬程世鹏
- 文献传递
- 犬瘟热病毒PS株基因组序列分析及荧光定量RT-PCR法对病毒分布规律的研究
- 犬瘟热（Canine distemper, CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）感染引起的烈性传染病，具有高致病性和高死亡率等特点，对我国的毛皮动物养殖业，野生动物保护业及养犬业...
- 许红丽
- 关键词：犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR病毒分布
- 文献传递
- 水貂阿留申病研究进展
- 杨莘王建科易立许红丽罗彬程世鹏
- 水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2011年
- 以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。
- 王建科程世鹏易立杨莘罗彬许红丽闫喜军武华
- 关键词：水貂肠炎病毒酶联免疫吸附试验单克隆抗体
- 荧光定量RT-PCR法对犬瘟热病毒PS株感染犬血清和粪便中病毒的检测被引量：5
- 2012年
- 为研究犬人工感染犬瘟热病毒(CDV)后病毒在血清和粪便中的含量及变化,本实验根据CDV核衣壳蛋白(NP)基因序列设计一对特异引物,扩增NP基因。并以NP基因重组质粒作为阳性标准品,建立检测CDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法 102拷贝～109拷贝范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.998,扩增效率为E=98.3%,敏感度高,最低检测限为6.1拷贝/μL,重复性检测变异系数低于2.62%。该方法与常规RT-PCR方法比较,其敏感性提高102倍。两只人工感染CDV PS强毒株的犬,分别于接种后17 d、19 d发病死亡,采用荧光定量RT-PCR方法对人工感染犬的血液和拭子液中的病毒核酸载量进行定量检测以及对收集的22份临床样本拭子液进行检测,均检测到CDV。本研究结果表明,该方法可以用于CDV核酸定量检测,为该病毒的致病机理及病毒传播途径的研究提供了一种快速和敏感的检测手段。
- 许红丽易立王建科杨莘程世鹏
- 关键词：荧光定量RT-PCR病毒载量
- 水貂肠炎病毒LN-10分离株的分离鉴定被引量：4
- 2012年
- 为了解我国水貂肠炎病毒(MEV)的流行情况,本研究采用F81细胞从疑似患有肠炎的水貂粪便样品中分离出一株病毒,经形态学、血清学、动物回归试验和分子生物学鉴定,分离的病毒为MEV,命名为LN-10。对该病毒主要结构蛋白VP2基因进行克隆测序和基因进化分析表明,LN-10分离株VP2基因与GenBank中的其他18株MEV株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.3%～100%和99%～100%,其中核苷酸同源性与ZYL-1株为100%,而氨基酸同源性与ZYL-1株和Manzhouli株均为100%。本研究为MEV分子流行病学调查和疫苗的研究奠定了基础。
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- 关键词：水貂肠炎病毒
- 犬瘟热病毒PS株的全基因组序列测定与遗传进化分析被引量：3
- 2012年
- 对犬瘟热病毒(CDV)PS株基因组进行全基因组序列测定与分析,以阐明该毒株的基因特征与遗传进化情况。利用RT-PCR方法分段扩增PS株全基因组序列,分别将产物克隆入pMD18-T载体中并进行测序,将所测序列拼接获得CDV PS株的全基因组cDNA。用DNAStar软件比较PS株全基因组序列与国内外犬瘟热病毒疫苗株和野毒株全基因组序列的同源性,然后用Mega4.0软件进行系统进化分析。测序结果显示,PS株全基因组序列的长度为15 690nt,该基因组推导的某些氨基酸位点发生了突变。与GenBank中登录的国内外参考毒株的同源性比较结果显示,PS株基因组与MKY-KM08分离株的基因序列同源性高达97.9%,与其他毒株的同源性为93.0%～97.0%;与CDV3疫苗株和Onderstepoort疫苗株的同源性最低,分别为93.2%和93.0%。基于全基因组序列绘制的系统进化树表明,所有CDV分离株分为疫苗株和野毒株2支,PS株和MKY-KM08株位于同一支,属于亚洲1型。结果表明PS株为野毒株,其全基因组序列与MKY-KM08株的全基因组序列亲缘关系最近。
- 许红丽易立王建科杨莘程世鹏
- 关键词：全基因组序列进化分析
- 犬瘟热病毒H基因5'端的表达纯化及抗原性分析
- 2011年
- 为了获得高纯度的犬瘟热病毒5'端H蛋白,本研究通过参考GenBank中发表的CDV H蛋白基因序列,用Oligo 6.0软件设计一对特异性引物,从犬瘟热病毒疫苗毒株CDV3和野毒株CDVSD株提取总RNA,经RT-PCR扩增得到388bp的基因片段,将目的基因与原核表达载体pET28a(+)连接构建了pET28a-CDV3-H5和pET28a-CDVSD-H5重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行鉴定、测序I、PTG诱导表达。重组表达载体pET28a-CDVSD-H5在大肠杆菌中成功的表达,目的重组蛋白为22kD,而pET28a-CDV3-H5未能表达。经Ni-NTA洗脱纯化后r,CDVSD-H5蛋白被成功纯化。Western blot分析表明,表达产物能够被犬抗CDV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。为血清学诊断方法的建立和基因工程疫苗的研究奠定基础。
- 易立程世鹏金卉王建科许红丽杨莘
- 关键词：犬瘟热病毒表达纯化抗原性分析
- FPLV、CPV、MEV非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2遗传特征分析被引量：5
- 2011年
- 为了解猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)、犬细小病毒(CPV)、水貂肠炎病毒(MEV)氨基酸遗传演化规律,探索细小病毒在不同种属动物间跨种传播过程中病毒蛋白氨基酸差异特点以及毒株流行病学特征。通过搜集确定为CPV、MEV的粪便病料,PCR扩增克隆非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2基因,并参考GenBank中其他细小病毒毒株,对其推导的氨基酸序列构建遗传发育树,进行病毒的遗传进化分析,同时对细小病毒流行毒株的非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2基因编码的氨基酸差异位点进行了归纳总结。遗传进化分析结果表明,细小病毒不同种属以及同种属各亚型之间NS1蛋白氨基酸同源性高于VP2蛋白,但氨基酸差异较小。FPLV和MEV NS1和VP2蛋白原本保守的氨基酸,在遗传进化的过程中出现与CPV一致的突变(NS1蛋白第247、350、545、595位氨基酸;VP2蛋白第101、232、411位氨基酸)。FPLV、MEVVP2蛋白氨基酸在进化过程中不同于CPV,但是更加稳定。我国CPV分离毒株中,CPV-2a亚型VP2蛋白Ile324位氨基酸独特位点仍然存在。
- 杨莘王建科易立许红丽程世鹏武华
- 关键词：猫泛白细胞减少症病毒水貂肠炎病毒NS1基因VP2基因
- 犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展被引量：2
- 2011年
- 犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守。融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用。因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义。本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述。
- 许红丽易立王建科杨莘程世鹏
- 关键词：犬瘟热病毒融合蛋白分子生物学
