谭亚芳
- 作品数：12 被引量：55H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌与巨噬细胞的蛋白相互作用
- 2005年
- 目的:利用蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌的毒力因子,进一步揭示鼠疫菌与宿主之间相互作用的机制。方法:鼠疫菌毒力相关蛋白芯片筛选与小鼠巨噬细胞系774A.1可能有相互作用的蛋白质,免疫荧光试验验证筛选出的蛋白相互作用。结果:共筛选到17个可能与巨噬细胞有相互作用的鼠疫菌蛋白,并通过免疫荧光试验初步验证了其中8个蛋白芯片筛选试验中信号最强的蛋白与巨噬细胞的相互作用。结论:蛋白芯片技术可用于筛选病原菌与宿主之间的相互作用,有助于深入研究病原与宿主之间相互作用的机制。本研究筛选出的鼠疫菌蛋白与巨噬细胞的相互作用尚需深入研究和验证,以便最终确定这些蛋白在鼠疫菌致病机制中所发挥的作用。
- 杜宗敏谭亚芳李蓓童宗中江凌晓王津王红霞宋亚军郭兆彪杨瑞馥
- 关键词：巨噬细胞蛋白质类荧光免疫测定
- 鼠疫耶尔森氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白YopK在致病机制中的作用研究
- 鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)引起的一种自然疫源性烈性传染病,曾经引起数以亿计的人死亡,造成人类历史上巨大的灾难。鼠疫是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病,我国鼠疫自然疫源地分布广泛,占国土面积的1...
- 谭亚芳
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌致病机制
- 文献传递
- 应用肽核酸探针检测鼠疫耶尔森氏菌被引量：8
- 2006年
- 目的:利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒,通过荧光扫描技术,建立一种特异、快速、准确地检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌pMT1质粒上的caf1基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记后,分别与链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒结合;将探针与待测鼠疫耶尔森氏菌的基因组DNA杂交后,利用荧光扫描技术进行检测。探讨了多个实验因素对测定的影响,并进行了特异性和灵敏度检测。结果:建立并优化了利用PNA探针检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,得到较好的线性关系;检测的灵敏度为0.9μg/mL(待测DNA)。结论:PNA探针与靶基因的结合不易受杂交液离子强度的影响,结合后具有较高的稳定性。本研究建立的分析方法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫的监控、诊断提供了有力手段。
- 谭亚芳杜宗敏何晓晓翟俊辉郭兆彪王津杨瑞馥
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌肽核酸磁珠
- 副溶血性弧菌基因敲除方法的建立及应用被引量：16
- 2011年
- 目的摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义。方法通过融合PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合转移到副溶血性弧菌菌株内,经pDS132质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株。结果成功构建了副溶血性弧菌RIMD2210633菌株ΔopaR,ΔtoxR和ΔaphA三个基因突变株。结论通过自杀载体同源重组成功获得精确敲除的无痕突变株更有利于基因功能的研究,使后续副溶血性弧菌突变株与野生株的对比研究成为可能。
- 刘霞高鹤杨琳张义全谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生
- 关键词：同源重组
- 不同生长时期鼠疫耶尔森菌调控子Fis转录谱的比较分析
- 2011年
- 目的:进行不同生长时期鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)野生株和fis突变株转录谱的比较分析。方法:基于Red重组系统缺失替换鼠疫菌的fis基因;用鼠疫菌全基因组DNA芯片转录谱技术,比较不同生长时期鼠疫菌野生株和fis突变株在转录水平上的差异;用实时定量RT-PCR对转录谱结果进行验证。结果:构建了鼠疫菌fis::Km突变株,芯片杂交数据与RT-PCR验证的比较结果表明二者有较高的相关性,相关系数r=0.93。结论:无论生长对数期还是稳定期,Fis都能够激活或抑制鼠疫菌一些重要基因的转录,如Ⅲ型分泌系统效应蛋白编码基因、psaAB、pla、rovA等,表明Fis可能与其他调控子一起,在鼠疫菌的代谢及毒力因子转录的协调控制上起关键作用。
- 马立芝高鹤张义全谭亚芳郭兆彪杨瑞馥周冬生
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立被引量：1
- 2012年
- 目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报告基因载体。把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达。将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2 h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果。结果与结论应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能。本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础。
- 韩伟谭亚芳杨慧盈郭兆彪杨瑞馥伏小平杜宗敏
- 关键词：鼠疫耶尔森菌质粒
- 鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关基因的功能研究
- 2013年
- 目的研究鼠疫耶尔森菌pCD1质粒上编码的假定蛋白YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16与pCD1质粒编码的Ⅲ型分泌系统（T3SS）在功能上的相关性。方法采用λ-Red重组系统构建鼠疫耶尔森菌YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因的突变株，通过测定分别培养于26℃下有钙、37℃下无钙和有钙TMH培养基中的以上3种突变菌株及野生菌株的生长曲线，分析突变菌株的低钙响应情况；在26℃和37℃条件下分别培养鼠疫菌突变菌株，并提取总RNA，采用定量PCR分析3种基因的转录水平及其对温度的依赖性；用β-内酰胺酶报告分子的方法分析3种基因的突变对效应蛋白转运的影响。结果在26℃和37℃低钙培养条件下，突变菌株△YpCD1．08、AYpCD1．09、△YpCD1．16的生长曲线与野生型菌株一致，表明其低钙响应正常。YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因在37℃与26℃转录水平的比值分别为2．3±0．3、2．3±0．5、3．2±0．7，表明这3个基因在鼠疫菌中均有转录，且其转录水平受温度调控，与T3SS基因转录水平的温度依赖性一致。β-内酰胺酶报告分子实验结果表明，突变菌株△YpCD1．08在140min时477与520nm波长的发光强度的比值为2．5，而野生型菌株仅为1．8，表明△YpCD1．08菌株对YopE的转运能力要高于野生株，而其他两个突变株与野生株类似。结论YpCD1．08、YpCD1．09、YpCD1．16基因有可能是T3SS的新成员，假定蛋白YpCDI．08可能参与效应蛋白YopE的转运及其调控。
- 张婷婷彭广能杨慧盈谭亚芳崔明全韦娜韩伟杜宗敏
- 关键词：耶尔森菌鼠疫毒力蛋白相互作用
- 鲍曼不动杆菌多重耐药中国分离株的多位点序列分型及种群结构被引量：5
- 2011年
- 目的了解中国鲍曼不动杆菌多重耐药株的遗传背景，并分析鲍曼不动杆菌的种群结构。方法采用多位点序列分型（MLST）分析了33株来自中国的鲍曼不动杆菌多重耐药株，并汇总MLST数据库中该菌的相关数据，鉴定了序列型与克隆群，分析了各个看家基因是否存在同源重组，计算了总体种群的标准化关联系数（I^sA）、重组与突变比值。针对MLST数据库中所有423株菌的等位基因型图谱，构建了种群系统发育树。结果33株菌中有6个序列型，其中29株属于CC92克隆群。所有7个看家基因中（gltA、gyrB、recA、cpn60、gah8、gpi、,poD），后3个位点发生了统计学意义上的重组。总体种群的重组及突变比值为6．083，I^sA值为0．155。所有纳入分析的423株菌可分为224个序列型，共鉴定出10个克隆群，其中CC92是主导克隆群。423株菌的系统进化树较好地呈现各序列型之间的进化关系，直观地展示了鲍曼不动杆菌的微进化。结论33株鲍曼不动杆菌多重耐药株大多属于CC92克隆群。鲍曼不动杆菌的种群内存在频繁重组，但等位基因型仍保持着连锁不平衡的特征，该菌具有典型的Epidemic种群结构。
- 杨潮颜焱锋王桂琴谭亚芳
- 关键词：不动杆菌感染种群结构
- 鼠疫菌、副溶血性弧菌及肺炎克雷伯菌CRP蛋白的表达及其DNA结合活性分析被引量：3
- 2011年
- 目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白(CRP)并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧菌5421株以及肺炎克雷伯菌tw518株的CRP蛋白;应用生物信息学对3种CRP蛋白进行同源性比较,并对CRP与靶DNA的结合基序(CRP consensus)进行分析预测;通过体外凝胶阻滞实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His?CRP与DNA的结合活性。结果成功表达出3种菌有活性的His?CRP融合蛋白,3种CRP蛋白对鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因均有结合活性。结论 3种CRP蛋白都能直接结合到鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因的启动子区,说明上述3种CRP蛋白对3种病原菌的重要毒力基因的转录可能具有交互调控作用。
- 杨琳高鹤张义全刘霞谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生
- 关键词：鼠疫菌副溶血性弧菌肺炎克雷伯菌
- 肽核酸（PNA）探针检测鼠疫耶尔森氏菌的研究
- 目的：利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁性纳米颗粒(磁珠)和Cy5纳米颗粒，结合荧光扫描技术，建立一种特异、快速、准确的检测鼠疫菌的方法。
方法：针对鼠疫菌pMTl质粒上的cafl基因设计并合成...
- 谭亚芳
- 关键词：鼠疫菌磁珠肽核酸
- 文献传递
