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siRNA对HepG2细胞mcl-1表达的影响被引量：3: 2007年; 目的:探讨特异性siRNA对肝癌细胞系HepG2中mcl-1表达的影响.方法:将特异性siRNA经脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG2;半定量RT-PCR观察干扰前后mcl-1 mRNA水平变化,比较对应不同位点的两对siRNA片段对mcl-1的干扰效果,分析RNA干扰的特异性、时效性;Western Blot检测转染前后Mcl-1蛋白表达情况.结果:特异性siRNA片段能有效降低mcl-1 mRNA水平,最大干扰效率达67.25%,高于作为对照的非相关片段;对应不同位点的两对siRNA片段对mcl-1均可产生干扰作用,彼此间差别不大;干扰作用于转染后24h即可出现,48h达高峰,72h稍有降低;Western Blot证明转染siRNA-F1后Mcl-1蛋白表达下调.结论:RNA干扰技术可有效下调肝癌细胞系HepG2中mcl-1 mRNA水平,明显下调Mcl-1蛋白表达.; 张巍赵蒲曹大勇陶开山蔡磊张福琴窦科峰; 关键词：肝细胞 RNA干扰

基于MAPPIT系统筛选HAb18G//CD147相互作用分子的研究: 肿瘤是严重威胁人类健康的主要疾病之一。其中原发性肝癌是我国第二位的癌症杀手。我国每年因肝癌而死亡的人数有12万之多,占全球肝癌死亡数的44/%左右。高侵袭和高转移是肝癌致死的主要原因。在肝癌的侵袭和转移过程中,细胞外基质...; 赵蒲; 文献传递

构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达: 2007年; 目的:构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体,并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原HAb18G胞外段基因,SacI/NotI双酶切后插入真核表达载体pCEL2f中,构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体基因的重组表达载体pCEL2f/HAb18GEF,并经酶切和测序验证。将此重组表达载体与POG44载体(按1∶9的比例混合后),在阳离子脂质体介导下共转染HEK293-16工程细胞,用潮霉素B筛选定点整合表达EpoR/LR-F3/HAb18GEFcDNA的细胞克隆。用间接免疫荧光染色法、流式细胞术及Zeocin致死试验,检测并验证稳定表达株中EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的表达。结果:成功地构建pCEL2f/HAb18GEF真核重组表达载体,共转染后EpoR、HAb18GEF均高效表达于转染的HEK293-16细胞的胞膜上。经潮霉素B筛选得到12株可融合高表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF的稳定株,其表达EpoR的阳性率为99.93%,平均荧光强度(MFI)为1036.39,表达HAb18GEF的阳性率为99.51%,MFI为652.72,且可被Zeocin致死。结论:成功地建立了表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的HEK293-16工程细胞株,为进一步利用哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用陷阱(MAPPIT)系统筛选HAb18G的作用受体奠定了基础。; 赵蒲张思河Jan Tavernier李郁陈志南; 关键词：定点整合表达

基于MAPPIT系统筛选HAb18G/CD147相互作用分子: ＜正＞蛋白质相互作用的鉴定工作为蛋白质功能的深入研究提供了条件,并为蛋白质在信号转导等相互作用网络中的定位成为可能。目前,已有许多传统的研究蛋白质相互作用的方法,如酵母双杂交、Ras募集系统、基于泛素的蛋白降解感应器方法...; 赵蒲; 文献传递

HAb18G/CD147与整合素integrinβ1相互作用研究: ＜正＞目的:通过研究RGD短肽是否具有阻碍HAb18G/CD147与整合素integrin β 1亚基结合的作用,推论CD147与integrin的结合区域,为进一步研究二者作用机理提供相关理论支持。; 李勇唐娟赵蒲陈志南蒋建利; 关键词：HAB18G/CD147; 文献传递

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赵蒲