郭雅君
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省医药卫生科学研究基金温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乳杆菌细胞壁成分激活人阴道上皮细胞β-防御素-2表达机制研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨乳杆菌细胞壁成分（Lactobacillus cell wall extract，LCWE）对人阴道上皮细胞β-防御素之的诱导作用及细胞内信号转导机制。方法采用实时定量PCR和Western blot方法检测LCWE处理对人阴道卜皮细胞（WZV-1）β-防御素-2表达的影响；Western blot方法检测LCWE处理后WZV-1细胞内NF-κB和p38MAPK信号通路活化情况；实时定量PCR和Westernblot方法检测NF-κB抑制剂和p38MAPK抑制剂预处理WZV-1细胞对LCWE诱导β-防御素-2表达的影响。结果LCWE可诱导WZV-1细胞β-防御素-2表达且存在着明显的时间效应和剂量依赖关系，50μg／mlLCWE处理细胞8h对β-防御素-2的i：调幅度最大，刺激0．5h后可引起细胞内p38MAPK蛋白的磷酸化显著增加，1h达到顶峰；刺激0．5h后可引起细胞核内NF-κB含量显著增加（P〈0．05），2h达到顶峰。NF-κB抑制剂PDTC、p38MAPK抑制剂SB20380预处理WZV-1细胞，可明显抑制LCWE诱导WZV-1细胞β-防御素-2的表达。结论LCWE具有激活NF-κB和p38MAPK信号通路诱导阴道上皮细胞β-防御素-2的作用。
- 刘佳明屠燕烨郭雅君丁卉楼永良
- 关键词：人Β-防御素-2P38MAPKNF-ΚB
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Jurkat-T淋巴细胞凋亡的研究被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。方法:利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA;MTT法检测rVvhA对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测rVvhA诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡情况;Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜观察rVvhA诱导Jurkat T细胞核形态的改变;分光光度法检测凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。结果:纯化复性后rVvhA的纯度达到92%以上;MTT结果显示rVvhA活性蛋白能显著抑制Jurkat T淋巴细胞的生长,有效浓度为1.5 HU/mL;流式细胞仪和激光共聚焦检测发现rVvhA作用后Jurkat T淋巴细胞核固缩,产生亮蓝荧光,1.5 HU/mL rVvhA,作用4 h后即可有效诱导其凋亡,凋亡率为(39.13±3.33)%,对照组为(3.43±0.34)%,且能被Caspase全酶抑制剂一定程度抑制。1.5 HU/mL rVvhA作用Jurkat T淋巴细胞3 h,Caspase-3酶活性达到高峰。结论:rVvhA能损伤人Jurkat T淋巴细胞,诱导其发生细胞凋亡,Caspase-3可能在rVvhA诱导的Jurkat T细胞凋亡过程中起重要作用。
- 姚蔚谢旦立郭雅君楼永良
- 关键词：创伤弧菌溶细胞素细胞凋亡
- 重组创伤弧菌溶细胞素缬氨酸V201和V289突变对其活性的影响被引量：2
- 2012年
- 将重组创伤弧菌溶细胞素A(recombinant Vibrio vulnificus hemolysin,rVvhA)第201位和第289位的缬氨酸定点突变为甘氨酸,并表达rVvhAval201gly,val289gly突变蛋白。检测突变蛋白与未突变蛋白的溶血活性、对胞内钙离子浓度、钾离子外流及对细胞损伤的影响。结果显示,与rVvhA相比,rVvhAval201gly,val289gly的溶血活性和细胞毒性均降低,诱导人类脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells,HUVEC)凋亡、胞内钙离子内流和钾离子外流等作用均受到抑制。实验结果表明,在创伤弧菌溶细胞素的活性发挥中,rVvhA中的V201和V289两个氨基酸与该蛋白质损伤靶细胞时引起胞内外离子平衡失调有关,并能影响该蛋白质的溶血活性和细胞毒作用。
- 郭雅君叶美萍王帅楼永良
- 关键词：创伤弧菌缬氨酸突变
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对小鼠单核巨噬细胞产NO及其合酶的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对小鼠单核-巨噬细胞（J774A.1）产生一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响.方法 应用MTT法检测rVvhA对J774A.1增殖的抑制作用;Griess法检测NO含量;RT-PCR和免疫荧光法检测iNOS mRNA和蛋白表达水平.结果 0.8 HU/ml及以上浓度rVvhA可显著抑制J774A.1的增殖;在IFN-γ的辅助作用下,0.4 HU/ml的rVvhA即可诱导J774A.1产生大量NO,显著增加细胞内活性以及iNOS mRNA和蛋白表达水平.结论 rVvhA可诱导巨噬细胞产生NO和iNOS表达,在创伤弧菌的致病机制中具有重要意义.
- 杜李梅郭雅君屠艳烨胡蝶楼永良严杰
- 关键词：创伤弧菌一氧化氮诱导型一氧化氮合酶
