钮利喜
- 作品数：36 被引量：31H指数：3
- 供职机构：山西大学更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金山西省青年科技研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学化学工程农业科学更多>>
- N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶（D-Carbamoylase）的融合表达,纯化和酶活性
- ＜正＞非天然氨基酸—D型氨基酸及其衍生物是合成抗菌和抗病毒药物、人工甜味剂、激素、杀虫剂等的重要中间物,特别是作为半合成抗生素侧链原料的D-氨基酸,更受到科技界与产业界的关注。D-氨基酸及其衍生物的生物转化一般要经历两个...
- 袁静明钮利喜石亚伟
- 关键词：酰胺水解酶分离纯化酶活性
- 文献传递
- 利用基因工程菌HC01固定化细胞转化生产D-对羟基苯甘氨酸被引量：1
- 2010年
- 对一菌两酶工程菌HC01转化底物DL-对羟基苯海因(DL-HPH)的最适条件及其细胞固定化进行了研究,HC01游离细胞转化DL-HPH的最适条件为40°C、pH7.5。通过对固定化细胞酶活力测定,确定细胞固定化的最优条件为海藻酸钠浓度2.5%、细胞浓度0.029g/mL、钙离子浓度3%。固定化HC01的热稳定性比游离细胞高5°C,二价金属离子Mn2+、Mg2+、Cu2+、Co2+和Ni2+在浓度为0.1mmol/L时对固定化细胞中D-海因酶(HYD)和N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶(CAB)两酶的活力无显著影响,Mn2+和Mg2+可分别使游离细胞中CAB活力提高至原来的2.1和2.7倍。在氮气保护下,当初始pH为9.0、转化温度为40°C、转速为80r/min,利用固定化HC01转化30g/L的DL-HPH时,36h后转化率可达97%左右,产物D-HPG经纯化后光学纯度达到99.7%,得率可达85%。
- 钮利喜南晶石亚伟
- 关键词：D-氨基酸基因工程菌固定化海藻酸钙
- 假单胞菌YZ-26来源环酰亚胺水解酶中半胱氨酸残基的反应性及功能
- 2011年
- 【目的】研究环酰亚胺水解酶(Imidase,CIH)中的两个半胱氨酸残基的反应性及功能。【方法】设计了3个半胱氨酸突变酶:CIH7,108、CIH7、CIH108。将天然酶以及突变酶基因分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行融合表达,融合蛋白经纯化后得到了电泳纯的样品。使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)对天然酶CIH的巯基基团进行修饰,并分析了DTT对分子状态的影响。进一步研究了经H2O2处理后CIH及其突变酶的锌离子结合能力及分子状态。【结果】酶活测定表明CIH7,108和CIH7的活力基本丧失,而CIH108仍保持了72%的酶活性。CIH中的两个半胱氨酸残基以游离形式存在,不形成链内或链间二硫键。CIH与CIH108为四聚体结构且具有一定的锌离子结合能力,CIH7,108为多聚体,CIH7为单体及多体的混合物且都不具备锌离子结合能力,随着H2O2浓度的增加,CIH中的链内二硫键及CIH108中的链间二硫键逐渐增加。【结论】说明Cys7是结合锌离子和稳定CIH分子结构的必要残基。
- 钮利喜刘晓琴石亚伟
- 关键词：半胱氨酸反应性
- 工程菌生物转化D-型氨基酸的研究——N-氨甲酰-D-氨基酰胺水解酶的基因克隆、表达及性能
- 光学活性的D-氨基酸作为一种中间体被广泛应用于半合成抗生素、多肽激素、拟除虫菊脂、杀虫剂等的合成.非天然D-氨基酸常用生物法或生物-化学法生产.底物5'单替代海因首先由D-海因酶转化为中间物N-氨甲酰-D-氨基酸,然后被...
- 钮利喜
- 关键词：D-氨基酸生物转化
- 文献传递
- 一种工程菌及其构建和用其制备D－缬氨酸的方法
- 本发明提供了一种工程菌，该工程菌可以同时表达D－海因酶和N－氨甲酰－D－氨基酸酰胺水解酶。其构建方法是将D－海因酶基因克隆到质粒pET－28a，将N－氨甲酰－D－氨基酸酰氨水解酶基因克隆到质粒pQE－30，然后利用共转化...
- 钮利喜石亚伟袁静明
- 文献传递
- 两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的构建和比较被引量：1
- 2015年
- 目的采用尾静脉接种法建立C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移动物模型,观察小鼠肺部成瘤过程,并对两种模型进行比较。制作肿瘤切片,通过HE染色分析两种肿瘤模型的组织病理学特征。方法培养B16黑色素瘤细胞至对数生长期时收集细胞,用生理盐水调整浓度为5×106/ml备用。将备好的B16细胞通过尾静脉接种小鼠,每只注射0.2 ml。接种后,两种小鼠每隔一定时间随机各取一只小鼠处死,解剖取肺,观察成瘤情况,计数肺表面的瘤结节数,测量瘤结节大小。以出现瘤结节开始计时,记录小鼠荷瘤时间。形成稳定的肿瘤模型后,制作肿瘤组织切片,HE染色进行病理学观察分析。结果 B16细胞尾静脉接种C57BL/6小鼠和KM小鼠,均能形成肺转移模型,但两种小鼠成瘤情况差异较大。KM小鼠的荷瘤时间比C57BL/6小鼠荷瘤时间长。HE染色结果显示黑色素瘤B16细胞在两种小鼠的肺组织中均形成巢团状的转移瘤,且两种模型肺转移瘤均多分布在支气管周围。结论通过对C57BL/6小鼠和KM小鼠两种黑色素瘤B16细胞肺转移小鼠模型的成瘤特点的分析比较,可以看出KM小鼠更适合用于研究新的肺肿瘤治疗药物,为研究黑色素瘤的发生发展提供依据。
- 李佳悦朱欣凯王萍钮利喜
- 关键词：B16细胞尾静脉
- 高效液相色谱法测定琥珀酰亚胺及其酶解产物被引量：2
- 2006年
- 采用HPLC法,以Symmetry(C18柱(4·6mm×150mm,5μm),甲醇∶10mmol/L磷酸缓冲液(pH6·5)=5∶95(V/V)为流动相,在波长210nm检测条件下,使琥珀酰亚胺及其酶解产物琥珀酰胺酸得到了较好的分离。琥珀酰亚胺与琥珀酰胺酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在0·999以上。该方法既可用于定量分析琥珀酰亚胺和琥珀酰胺酸,又能用于测定环二酰胺酶的活性及产物转化率。检测精度可达μg水平;用NMR确认了酶分解物质的分子结构。
- 钮利喜陈云霞钞建宾袁静明
- 关键词：琥珀酰亚胺高效液相色谱核磁共振谱
- 一种具有环酰亚胺水解酶活性D-海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用
- 本发明公开一种具有环酰亚胺水解酶活性D‑海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用。本发明首先提供一种工程菌，该工程菌可以表达一种具有环酰亚胺水解酶活性的D‑海因酶；其构建方法是将该酶基因克隆到质粒pET‑20b，得到重组质...
- 钮利喜王丽俊石亚伟
- 文献传递
- 突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:研究环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法:通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液相色谱法分析了重组野生型酶与突变型酶的底物专一性和动力学参数。结果:突变型酶与重组野生型酶相比,底物专一性未发生显著改变,最适底物仍为琥珀酰亚胺,然突变型酶对最适底物的亲和力略有降低,导致反应速度减小。结论:环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基的改变对其底物专一性的影响不大,但影响了酶对底物的亲和力。
- 陈云霞钮利喜袁静明石亚伟
- 关键词：动力学参数底物专一性
- DL-对羟基苯海因及其工程菌转化产物的高效液相色谱分析被引量：4
- 2005年
- 钮利喜石亚伟纪颖彤袁静明
- 关键词：高效液相色谱法工程菌D-对羟基苯甘氨酸
