陈维
- 作品数：9 被引量：41H指数：4
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛支原体免疫相关性蛋白硫锌酰胺脱氢酶的筛选与鉴定被引量：4
- 2012年
- 为鉴定牛支原体(M.bovis)菌体免疫相关蛋白及其免疫原性,本实验以M.bovis湖北株为样品,通过建立M.bovis全菌蛋白的双向电泳体系,获得了分辨率及重复性良好的双向电泳(2-DE)图谱。利用western blot技术进行筛选,鉴定得到多个M.bovis蛋白,其中一个分子量为68 ku,经过质谱分析和氨基酸一级结构比对确定该蛋白为硫锌酰胺脱氢酶(LipDH)。经原核重组表达,LipDH重组蛋白与M.bovis阳性血清的western blot反应为阴性,而Dot blot及以重组表达蛋白作为包被抗原的ELISA鉴定结果均为阳性。本研究为进一步研究LipDH的功能以及采用其重组蛋白用于该蛋白缺失的M.bovis疫苗株的鉴别检测方法的建立奠定了基础。
- 孙文静李媛宋志强邹晓辉刘洋陈维周玉梅张秀英辛九庆
- 关键词：牛支原体双向电泳质谱
- 镉中毒对小鼠肾脏损害的研究被引量：4
- 2007年
- 探讨镉中毒对小鼠肾脏的损害机制。给小鼠喂饮0.01 g·L-1氯化镉水溶液,复制小鼠镉中毒模型,分别于15天,30天和45天采取肾脏和血清,肾脏进行HE染色、PASM染色和Masson染色,并检测血清中IgG, IgM,IgA含量。结果:肾小管坏死,其上皮细胞脱落,肾小球血管球基底膜出现免疫复合物沉淀,血管球系膜增厚;免疫球蛋白含量45天<30天<15天。结果表明,镉中毒小鼠肾组织广泛损伤,免疫损害是其发生机理之一。
- 关宏玉陈维王宝龙李华涛徐世文
- 关键词：镉中毒小鼠免疫功能
- 牛支原体蛋白质组学双向电泳技术的建立及初步分析被引量：5
- 2012年
- 为了建立M.bovis蛋白质组学技术,试验采用M.bovis湖北分离株为实验材料,对样品处理、固相pH梯度胶条、上样量及染色等影响双向电泳图谱质量的关键因素与环节进行一系列的探索,2D Clean-up试剂盒处理的样品400μg在13 cm干胶条（pH 4~7）中进行双向凝胶电泳,考马斯亮蓝R350染色的方法,结果获得了能较好展示大部分蛋白点,分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱,应用Image Master 2D Platinum version 6.0软件对图谱进行初步分析,不同重复图谱之间的平均匹配率达80.95%,随机取重复性好的20个蛋白点进行质谱分析,获得19蛋白质点的肽质量指纹图谱,鉴定成功率为95%。质谱鉴定结果与自建M.bovis蛋白库对比,蛋白点匹配率高于82分值限值（P〈0.05）的不同蛋白有12个,初步分析这些蛋白多为酶类。说明该技术平台能有效用于M.bovis蛋白质组学的后续研究之中。
- 陈维李媛辛九庆刘洋张秀英
- 关键词：蛋白质组学双向电泳
- 牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定被引量：1
- 2011年
- 为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。
- 李媛陈维呼太飞刘洋宋志强孙文静辛九庆
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎二维凝胶电泳质谱
- 牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定被引量：3
- 2012年
- 牛支原体(M.bovis)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前M.bovis粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,M.bovis表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个M.bovis基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被M.bovis抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是M.bovis的一个粘附相关因子。
- 宋志强李媛孙文静刘洋邹晓辉陈维周玉梅辛九庆
- 关键词：牛支原体亚克隆
- 双向电泳与免疫印迹相结合筛选牛支原体免疫相关蛋白
- 牛支原体(M.bovis)是感染牛的一种重要致病性病原体,该病原在1961年从美国牛乳腺炎病例中首次分离,1976年美国首次报道牛支原体引起的肺炎。该病原除引起牛肺炎外,还可引发关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,这些与M...
- 陈维
- 关键词：双向电泳免疫印迹蛋白质组学技术
- 3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较被引量：12
- 2011年
- 为比较3种抗牛支原体(M.bovis)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测M.bovis血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%。一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性。此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查。
- 刘洋陈维宋志强孙文静李媛邹小辉辛九庆
- 关键词：牛支原体ELISA试剂盒
- 8株牛支原体分离株P81表面膜蛋白基因的克隆与序列分析被引量：10
- 2010年
- 本研究对我国采集自8个省份患有牛呼吸道疾病的肺脏组织病料进行了病原分离鉴定,得到8株牛支原体(M.bovis)分离株。参考GenBank中已发表的M.bovisPG45株的P81基因序列,设计引物扩增P81基因,将其克隆到pMD-18T上,筛选重组质粒并对其进行序列测定及分析。结果显示,P81基因全长2097bp,含有1个开放性阅读框,编码699个氨基酸。这8株M.bovis分离株的P81同源性为99.4%～99.9%,与PG45株同源性94.6%～94.9%,与无乳支原体(M.agalacia)PG2株同源性仅为73.8%～74%,结果表明,M.bovisP81基因基因高度保守,种间差异较大,具有研究前景。
- 董慧辛九庆李媛陈维刘洋张美晶姜海芳刘云
- 关键词：牛支原体
- 牛支原体双重PCR检测方法的建立被引量：8
- 2010年
- 为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(M.mycoides subsp.mycoides SC),本实验通过优化M.bovis特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别M.bovis和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由M.bovis和MmmSC扩增得到528bp和270bp片段。敏感性试验结果显示该方法检测M.bovis和MmmSC培养物的最低浓度分别为106cfu/mL和105cfu/mL。特异性试验结果显示,该方法对无乳支原体代表株PG2、丝状支原体丝状亚种LC型代表株Y-goat、山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp、绵羊支原体Y-98、猪鼻支原体BST-7、巴氏杆菌以及结核分枝杆菌扩增结果均为阴性。应用该方法对临床病料的检测结果与培养鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于临床检测。
- 刘洋李媛董惠张美晶姜海芳陈维辛九庆
- 关键词：牛支原体双重PCR
