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鉴定猪流行性腹泻病毒变异弱毒株YN144的酶切位点及其方法: 本发明公开了一种鉴定猪流行性腹泻病毒变异弱毒株YN144的酶切位点及其方法。所述酶切位点为ACACGT。该方法首先获取待测目标样品并反转录成cDNA，以所获得的cDNA为模板加入引物对进行RT‑PCR扩增，扩增得到PCR...; 何启盖何东贤陈芳洲吴美洲范盛先张程光李中华孟宪荣; 文献传递

猪流行性腹泻病毒的感染和分子特征及下一代测序技术在挖掘新病原的应用研究: 猪肠道冠状病毒病主要病原是猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪重组肠道冠状病毒(SeCoV)以及新近报道的猪肠道阿尔法冠状病毒(PEACoV)。这些病原感染导致...; 陈芳洲; 关键词：流行性腹泻病毒感染分子特征测序技术

猪圆环病毒3型概述: 圆环病毒病(PCVD)是目前国际公认的危害养猪业的三大疾病(猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病)之一,也是影响巨大的经济性疾病.圆环病毒病是由猪圆环病毒(Porcine circoviruses,PCV)引起的一系列疾病的总称...; 库旭钢于学祥何东贤孙琪吴昊陈芳洲何启盖; 关键词：流行病学病原学

明尼苏达大学兽医诊断实验室工作一年的感悟-致远去的莫教授: 陈芳洲刘爱民Douglas Marthaler何启盖

变异猪流行性腹泻病毒弱毒YN150株及其应用: 本发明公开了一株变异猪流行性腹泻病毒弱毒株YN150株及其应用。本发明弱毒株是由毒株YN144(微生物保藏号是：CCTCC V201547)在10μg/mL胰酶的条件下在Vero细胞上连续传6代得到的。本发明PEDV弱毒...; 何启盖吴美洲陈芳洲李中华朱银杏刘洋徐凤琴库旭钢叶十一郭效珍; 文献传递

下一代测序(NGS)的发展及其在兽医领域的应用: 下一代测序(Next-generation sequencing,NGS)是一种新兴的能在非培养条件、低样本浓度条件下对未知病原和整个生物群落的生物信息进行高通量、高精准度分析的技术,如今NGS被广泛用于研究动物病原的病...; 陈芳洲罗文涛李静何启盖; 关键词：兽医

基于NGS技术的仔猪腹泻病毒检测: 2018年; 为探究四川某猪场反复暴发仔猪腹泻的原因,利用下一代测序技术(NGS)对该猪场的仔猪肠道样品进行检测,结合常规PCR、测序方法进行验证分析。结果表明:该猪场存在猪流行性腹泻病毒PEDV,通过对该场PEDV S1基因的进化树分析,发现该PEDV毒株属于独立的一个分支;同时还在该场病料中检测到猪圆环病毒3型(PCV3),该猪场腹泻问题可能是由于新型PEDV毒株和PCV3毒株混合感染导致。; 罗文涛何启盖陈芳洲李静李静; 关键词：NGS 腹泻病毒 PEDV

猪传染性胸膜肺炎的诊断与防控被引量：10: 2015年; 广西和深圳2个规模化猪场发生育肥猪急性死亡,确诊该病,开展血清学检测,对病料进行细菌分离,结合生化试验、PCR检测,分离鉴定出2株胸膜肺炎放线杆菌,分别命名为GX-1株和SZ-1株。GX-1株为强毒力的血清5型,SZ-1株为中等毒力的血清3型。药敏试验结果显示GX-1株和SZ-1株对大多数猪场常用抗生素均较敏感,但对氨基糖苷类、大环内酯类以及多肽类的部分抗生素表现了耐药性。结合临床症状、病理剖检和实验室诊断,确诊为猪传染性胸膜肺炎。利用敏感药物和免疫预防手段,控制了该病。; 张丙周库旭钢胡翰陈芳洲许拓何启盖; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌药敏试验

浙江金华地区PCV2分子流行病学调查及遗传变异分析被引量：8: 2019年; 猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV2变异规律,对从浙江省金华猪场收集的3 433份血清进行PCR检测,结果显示,2012-2018年PCV2阳性率分别为10.16%,11.95%,8.50%,9.94%,6.19%,5.94%,8.28%,母猪阳性率最高为13.49%。本研究发现在2012年浙江金华地区PCV2优势毒株已经由PCV2b变为PCV2d,且全部为PCV2d-2。将得到的ORF2序列同已知的疫苗序列对比后,发现SH株与浙江金华目前PCV2主流毒株序列一致性最高,但抗原位点比较仍有5处差异,这可能会对疫苗效果产生影响,需要进一步验证。另外只有PCV2d在免疫显性诱饵表位上发生了突变,这可能是PCV2d成为主流的原因。; 吴明臻江云波敖超杰于学祥库旭钢陈芳洲孙琪吴昊何启盖赵青; 关键词：猪圆环病毒2型流行病学调查遗传变异分析

基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用被引量：9: 2019年; 为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。; 王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖; 关键词：ORF2基因 CAP蛋白原核表达 ELISA检测

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陈芳洲

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