霍慧
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学理学生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。
- 李岩聂明非魏伟温凯贾莹霍慧王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白进化树抗原性
- A型禽流感病毒NS1蛋白的表达及其诱导细胞凋亡功能的研究被引量：6
- 2009年
- 利用瞬时表达方法表达禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,并初步研究了体外表达的NS1蛋白对宿主细胞凋亡的影响。应用脂质体介导法,将含有不同亚型AIV NS1基因的阳性质粒pcDNA3.1(+)-qNS1(H5N1)、pcDNA3.1(+)-rNS1(H9N2)转染Vero细胞系及MDCK细胞系。经SDS-PAGE及Western-blotting检测,qNS1和rNS1基因在Vero细胞及MDCK细胞中均获得了表达。应用AO/EB荧光染色法、Annexin V-PI法分别对转染后的Vero细胞及MDCK细胞进行细胞凋亡检测,结果显示,转染阳性质粒的MDCK细胞凋亡率增高,而转染空载体pcDNA3.1(+)的MDCK细胞及转染的Vero细胞均无明显变化。表明,qNS1、rNS1蛋白在体外培养的MDCK细胞中表达并能够诱导其发生凋亡,而在Vero细胞中却不能发挥此功能。
- 孙进华马波于志丹霍慧王君伟
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白MDCK细胞VERO细胞真核表达
- 抗鹅细小病毒NS1蛋白单链抗体的构建、表达及活性初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 王锐鞠环宇王兆鹏卫娜霍慧仇铮马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒单链抗体活性核苷酸组成病毒分类
