黄为 作品数:5 被引量:16 H指数:2 供职机构: 中南大学湘雅三医院 更多>> 发文基金: 湖南省科技计划项目 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
LBH与肝纤维化进展及肝内免疫细胞分布的关联研究 2023年 背景与目的:研究发现,肝内免疫调节与肝纤维化发生发展密切相关。然而,在肝纤维化中与免疫细胞相关联的关键基因目前仍不清楚。因此,本研究探讨肝纤维化中的关键基因与疾病进展以及肝内免疫细胞分布的关联。方法:基于公共数据库中的不同肝纤维化程度的肝组织(GSE162694和GSE49541),对转录组测序RNA-seq测序数据进行差异表达比较,以正常肝样本作为对照;通过相对表达丰度排秩(REO)算法结果获得相关逆转稳定基因对;分析与肝纤维化相关的关键基因。构建CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型,Masson染色鉴定病理组织学改变,qRT-PCR和Western blot方法检测关键基因的mRNA与蛋白表达;xCell工具分析关键基因与免疫细胞、肝纤维化进展的关系。结果:分析测序数据获得两个肝纤维化相关的交叠的逆转基因对(THBS2>RHDE及LBH>LRRC19);其中THBS2、LBH均在肝纤维化组织中差异上调,并且LBH表达与肝纤维化分级、组织学评分和炎症评分明显相关(均P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠肝脏中LBH mRNA及蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。基于LBH表达中位值,将肝纤维化芯片GSE162694、GSE49541中的样本分为LBH高表达组与LBH低表达组,xCell分析显示,CD4^(+)记忆T细胞、中央记忆CD8^(+)T细胞、树突状细胞、aDC、cDC等免疫细胞富集水平及免疫细胞评分在LBH高表达组中均明显上调(均P<0.05)。结论:转录辅助因子LBH可能参与调节肝内免疫细胞分布并促进肝纤维化的进展。 黄为 冯超关键词:肝纤维化 免疫细胞 miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖 被引量:8 2021年 目的研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用qRT-PCR法检测肝癌组织中miR-424-5p,ATG14的表达。培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组(n=3):干扰miR-424-5p表达阴性对照组(in-NC组),干扰miR-424-5p表达组(in-miR-424-5p组);HCCLM3细胞实验分组(n=3):过表达miR-424-5p组(mi-miR-424-5p组),另设过表达miR-424-5p阴性对照组(mi-NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组(mi-NC+NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组(mi-NC+ATG14组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14阴性对照组(mi-miR-424-5p+NC组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14组(mi-miR-424-5p+ATG14组)。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡(P<0.05);干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡(P<0.05);miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),降低自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05);过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),提高自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05)。结论miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。 赵梓丹 黄为 和君建 冯超关键词:肝癌 自噬 细胞增殖 细胞凋亡 FIG-ROS融合基因在肝内胆管细胞癌中表达及其意义 被引量:6 2015年 目的:探讨FIG-ROS融合基因在肝内胆管细胞癌(ICC)细胞中的表达,以及对其干预后ICC细胞的生物学行为的变化。方法:用Western blot法检测4份不同ICC组织样本及3种ICC细胞株(HUCCT1、REB、QBC939)中ROS蛋白的表达;选择ROS阳性ICC细胞,用一系列表达不同序列ROS-sh RNA与FIG-sh RNA的质粒分别转染该细胞后,用Western blot检测ROS和FIG蛋白表达;选择对ROS和FIG表达抑制作用最强的ROS-sh RNA与FIG-sh RNA序列分别或联合转染上述细胞后,观察细胞增殖、细胞周期、凋亡及集落形成情况。结果:2份ICC组织样本与1个细胞株(HUCCT1)呈ROS阳性表达;转染ROS1-6290 sh RNA和FIG-363 sh RNA对HUCCT1细胞ROS与FIG蛋白表达的抑制作用最强。与未转染的HUCCT1细胞比较,单独转染FIG-363 sh RNA对细胞增殖、凋亡及细胞周期无明显影响(均P>0.05),但能明显减少细胞集落形成(P<0.05);ROS1-6290 sh RNA单独或联合FIG-363 sh RNA转染均能明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡与细胞周期阻滞、减少细胞集落形成,且联合转染的效应更为明显(均P<0.05)。结论:部分ICC存在FIG-ROS融合基因表达,对两种基因的联合抑制可能是靶向治疗该类ICC的有效途径。 朱垒 黄飞舟 聂晚频 邓刚 黄为 徐宏博 易中杰 郑少鹏关键词:胆管肿瘤 原癌基因 二甲双胍对人胆管癌RBE细胞的作用及其机制 2014年 目的:探讨二甲双胍对人肝胆管癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响及机制。方法:将人肝胆管癌RBE细胞分别用二甲双胍、Compound C(AMPK抑制剂)、二甲双胍+Compound C处理,以未处理的RBE细胞作为空白对照,分别用MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期、Western blot检测细胞AMPK/mTOR通路蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,二甲双胍作用后的RBE细胞存活率降低;细胞凋亡率升高;G0/G1期比例增加,而S期比例减少;磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白表达上调,而磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。二甲双胍与Compound C联合作用RBE细胞后,二甲双胍的上述作用均被取消,各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P>0.05)。单独的Compound C作用RBE细胞后,各项指标未见明显改变,与空白对照组差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:二甲双胍能抑制人胆管癌RBE细胞的增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞,该作用可能其与激活AMPK从而抑制mTOR下游效应分子有关。 黄为 黄飞舟 邓刚 罗宏武 聂晚频 刘浔阳关键词:胆管肿瘤 二甲双胍 环AMP依赖性蛋白激酶类 细胞增殖 慕课教学在肝胆胰外科学临床教学中的应用讨论 被引量:2 2020年 慕课是目前一种新兴的在线课程开发模式。为探讨慕课教学及传统肝胆胰外科学在教学模式、课程理念、教学应用、学习中交流互动及学习后效果评价等方面存在的差异。文章以肝胆胰外科学的慕课教学模式进行分析,慕课教学在教学理念、教学课程设计和教学考核评价方式等方面进行了改进。旨在通过慕课教学理念,加强肝胆胰外科学教学基础理论和临床能力,培养以学生为主体的自主学习能力,以教师为辅的信息开放式教学理念,以提升肝胆胰外科学的教学质量与水平。 黄为 冯超关键词:肝胆胰外科 教学理念