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小鼠Myf5真核表达载体的构建及其在细胞中的定位: 2010年; 目的:获得小鼠生肌调节因子Myf5基因并构建pEYFP-C1真核表达载体,观察Myf5在小鼠C3H10T1/2细胞中的定位。方法:利用PCR获得Myf5基因克隆到pEYFP-C1载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染C3H10T1/2细胞,荧光观察融合蛋白的表达。结果:从小鼠cDNA文库中得到760bp的myf5的CDS序列后,重组到pEYFP-C1载体中并转染C3H10T1/2细胞,荧光显示Myf5蛋白定位在细胞核中。结论:Myf5载体成功构建并在小鼠C3H10T1/2细胞表达,证明了Myf5蛋白定位于细胞核,为进一步研究Myf5与其他蛋白的相互作用奠定了基础。; 刘向东郭芬黄晓峰刘兆宇张欣李月琴周天鸿; 关键词：MYF5 细胞定位

带c-Myc标签的Mdfic基因真核表达载体构建及其在成肌细胞中的表达被引量：1: 2010年; 目的构建新型转录因子Mdfic和c-Myc标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1-Mdfic-Myc,实现其在成肌细胞C2C12中的表达。方法 PCR方法扩增Mdfic的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc标签共同克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒。重组质粒经过PCR、双酶切和测序鉴定后,脂质体法转染C2C12细胞。RT-PCR和Western blotting方法检测转染后细胞中Mdfic-Myc的表达。结果成功构建了pcDNA-Mdfic-Myc真核表达质粒;RT-PCR和Western blotting结果表明,Mdfic-Myc融合蛋白在成肌细胞C2C12中获得高效表达。结论 pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒的成功构建及其在成肌细胞中的表达为进一步体外研究Mdfic蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了基础。; 郭芬李月琴黄晓峰欧淑芳初彦辉周天鸿; 关键词：真核表达载体基因表达

农业机械化发展对农业劳动力转移的影响——以山东省为例: 推动农业劳动力向非农产业转移对于促进我国城市化的进程和农业现代化的发展以及农民收入的增长有非常重要的作用。其中，农业机械化是农业劳动力转移的重要推力因素。本文以山东省的数据为研究对象，估计山东省农业机械化对农业劳动力转移...; 黄晓峰; 关键词：农业经济劳动力转移机械化水平

澳门开埠史研究: 澳门开埠后,它很快就扮演了中外关系史上的首席角色.澳门在16-18世纪末两个多世纪中一直是东西方世界的国际商贸大港;它作为葡人管辖的自治区,全面地移植了西欧的社会政治制度、宗教信仰、社会风俗、科学技术和教育体系,舆中国固...; 黄晓峰; 关键词：开埠中葡关系澳门文化

新型转录因子Mdfic的原核表达、抗体制备以及组织分布研究: Mdfic(MyoD family inhibitor domain containing)基因，是一个近年新发现的基因，其编码I-mfa结构域，但其功能研究尚属空白。本实验室的前期研究初步证实Mdfic蛋白与Rhox5...; 黄晓峰; 关键词：多克隆抗体免疫荧光荧光定量PCR; 文献传递

BMPR-Ⅱ基因mRNA荧光定量PCR检测标准品的构建: 2006年; 目的构建检测BMPR-Ⅱ基因mRNA表达水平差异的标准品。方法以人胚肺成纤维细胞的总RNA为模板、O ligo(dT)18为引物逆转录产生cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人BMPR-Ⅱ基因相应的cDNA片断,构建pMD-18-BMPR-Ⅱ重组质粒,经鉴定测序,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果成功克隆了人BMPR-ⅡcDNA,并以其为标准制作出荧光定量PCR标准曲线。结论成功构建了BMPR-Ⅱ基因荧光定量PCR标准质粒,为今后BMPR-ⅡmRNA的荧光定量PCR检测打下了基础。; 叶飞舟何震宇李月琴李弘剑张欣黄晓峰周天鸿; 关键词：荧光定量PCR

新型转录因子MDFIC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2010年; 小鼠MDFIC(MyoD family inhibitor domain containing)蛋白是一个新近发现的与HIC(Human I-mfa domain containing protein)高度同源的转录调控因子,可能在肌细胞的分化过程中起着重要的作用。为了深入研究MDFIC的功能,首先要制备抗MDFIC的多克隆抗体。首先采用PCR方法扩增出编码MDFIC的cDNA片段,然后将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-3,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价达1∶640 000以上,检测证明抗体效价较高。此外,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别真核细胞外源性及内源性的MDFIC蛋白。MDFIC多克隆抗体的成功制备为进一步研究MDFIC的功能以及进一步探索肌细胞的发生分化机制提供了重要工具。; 刘兆宇郭芬黄晓峰孙丽敏李月琴周天鸿; 关键词：转录因子多克隆抗体肌细胞分化

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黄晓峰