龙丽坤
- 作品数：54 被引量：114H指数：8
- 供职机构：吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 基于微滴式数字PCR的肉制品掺假快速定量鉴别方法
- 本发明提供了一种基于微滴式数字PCR的肉制品掺假快速定量鉴别方法，所属肉制品掺假检测技术领域，包括：提取待测样品的DNA；将待测样品DNA与ddPCR反应液混合，从而形成ddPCR反应体系，且ddPCR为微滴式数字PCR...
- 何禹璇闫伟李飞武龙丽坤董立明李葱葱夏蔚邢珍娟刘娜谢彦博马月
- 转基因玉米IE034的转化体特异性定量PCR检测引物和探针及方法
- 本发明属于生物技术领域，涉及转基因植物及其产品的检测方法，具体涉及转基因玉米IE034的定量PCR检测引物和探针及方法。本方法首先公开了用于精准检测转基因玉米IE034的特异性引物和探针。在此基础上，本发明建立了一种特异...
- 李飞武闫伟龙丽坤徐俊锋刘允军李葱葱董立明武奉慈
- 文献传递
- 应用简并PCR方法检测转cry1A基因作物被引量：5
- 2018年
- 根据不同转基因作物中cry1A基因的保守区序列,建立简并聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对转cry1A基因作物检测方法。cry1A基因(包括cry1Ab、cry1Ac、cry1Ab/Ac、cry1A.105、mcry1Ac)是抗虫转基因作物中使用频次最高的目的基因,常用作转基因成分筛选检测的靶标。应用Vector NTI Advance 11.5软件将已报道的20余种cry1A基因PCR检测方法中的引物与11个cry1A基因序列进行比对,结果显示,这些方法的引物序列不能同时与所有cry1A基因序列完全配对,每对引物的错配碱基数均大于3个,且许多错配发生在引物的3’端,表明这些cry1A基因检测方法理论上仅适用于部分特定的靶标基因。在对MON810、Bt11、Bt176等11种转基因作物中cry1A基因核苷酸序列进行比对分析基础上,以其5’端的保守核苷酸序列为模板,筛选到1对简并引物,建立了cry1A基因的简并PCR方法。应用该方法能特异性地检测11种转基因作物中的cry1A基因,检测灵敏度可稳定达到0.1%。该方法为转基因作物中cry1A基因的高效筛选检测提供了一种新的技术手段。
- 李葱葱闫伟夏蔚董立明龙丽坤李飞武
- 关键词：抗虫性简并PCR
- 一种5重real-time PCR筛查转基因水稻方法的建立被引量：4
- 2021年
- 以转基因水稻中最常用的CaMV35S启动子、NOS终止子、Cry1Ab/Ac基因、HPT基因及SPS水稻内标基因为研究对象,利用5种不同的荧光信号(FAM、HEX、Taxas Red、Cy5、Cy5.5)进行多重实时聚合酶链式反应(realtime polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法的研究。通过引物组合筛选、反应体系优化、特异性测试、灵敏度测试、适用性测试等一系列实验,建立了5重real-time PCR方法,灵敏度可达0.032%。此方法具有灵敏度高、结果准确、通量大等优点,可实现水稻中转基因成分的快速、高效检测。
- 董立明杨帆邢珍娟李葱葱闫伟龙丽坤李飞武
- 关键词：转基因水稻
- 一种耐盐转基因大豆事件E8A7027外源插入的片段侧翼序列及应用
- 本发明提供了一种本发明涉及植物生物技术领域，尤其是涉及一种耐盐转基因大豆事件E8A7027外源插入的片段侧翼序列及应用。本发明首次公开了耐盐转基因大豆事件E8A7027外源插入的5’端侧翼序列和/或3’端侧翼序列，并根据...
- 李飞武闫伟张玲龙丽坤李葱葱董立明夏蔚邢珍娟刘娜谢彦博何禹璇马月
- 转基因作物中cry2Ab基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种转基因作物中cry2Ab基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。引物组由6条特异性引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1~6所示。检测试剂盒包括引物溶液、具有链置换活性的DNA聚合酶、10×反...
- 李飞武闫伟龙丽坤李葱葱张明邢珍娟董立明
- 文献传递
- 抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C定性PCR检测方法被引量：11
- 2020年
- 转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C是由北京奥瑞金公司研发的转mG2-aroA基因和mcry1Ah基因抗虫耐除草剂玉米新品系,对玉米螟、粘虫等鳞翅目害虫具有抗性、耐草甘膦除草剂的转基因玉米,在我国具有重要产业化应用前景。本文研发了GH5112E-117C转基因玉米的定性PCR检测方法,该方法能特异性地检测转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C,在每个反应引物浓度为0.2 μmol/L、Taq DNA 聚合酶0.625 U、DNA模板50 ng,退火温度为58℃的条件下,检测灵敏度可稳定达到0.1%。该方法为转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C的精准检测提供了一种新的技术手段,为农业转基因监管提供技术支撑。
- 李葱葱谢苹董立明夏蔚兰青阔闫伟龙丽坤李飞武
- 关键词：转基因玉米PCR
- 山樱花组培快繁技术研究被引量：8
- 2014年
- 选取经驯化栽培的山樱花植株茎尖和带腋芽的半木质化茎段为外植体,对其组培快繁体系进行研究的结果表明:山樱花茎段外植体在MS+6-BA 0.6mg/L+NAA 0.02mg/L+Vc 40mg/L+3%Sucrose+0.7%Agar(pH5.8)培养基上,腋芽萌发率为90.0%以上;其组培苗在MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.02mg/L+Vc 40mg/L+3%Sucrose+0.7%Agar(pH 5.8)培养基上继代培养25天左右,继代增殖系数可高达4.0以上;将长势良好的组培苗在1/2MS+NAA 0.8mg/L+Vc 40mg/L+1.5%Sucrose+0.7%Agar(pH 5.8)培养基上生根壮苗培养后,移栽成活率可达73.3%。
- 李晓玲卢绪志边震龙丽坤
- 关键词：快速繁殖
- 我国转基因大豆研究进展被引量：10
- 2021年
- 转基因技术是现代农业技术的典型代表,经过25年的推广,已成为应用速度最快的作物育种技术。转基因大豆是全球种植历史最长、区域最广、面积最大的转基因作物,占比近50%。我国转基因大豆研发起步较晚,产业化滞后,但已储备了一批转基因大豆新品种,发展潜力巨大,前景向好。文章概述了国外和我国转基因大豆研发现状,分析了我国转基因大豆研发面临的诸多问题与挑战,并提出了相应的对策建议,以期为推进我国转基因大豆产业化应用、提升国产大豆自给能力提供参考。
- 闫伟董立明何禹璇夏蔚李葱葱龙丽坤李飞武
- 关键词：农业生物技术转基因大豆
- 应用单管半巢式PCR技术筛查转基因食品被引量：8
- 2015年
- 建立转基因作物中常见的两种外源调控元件的单管半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,为转基因食品的筛选检测提供一种快速、精确的方法。针对6种转基因作物中Ca MV35S启动子和NOS终止子的一致性核苷酸序列,分别设计巢式PCR的内、外引物,在测试不同引物组合的扩增效率基础上,建立Ca MV35S启动子和NOS终止子的单管半巢式PCR方法。结果表明,上述方法对两种转基因成分具有良好的特异性,检测灵敏度分别为0.01%和0.05%,显著优于常规PCR方法。该方法具有便捷、准确、灵敏等特点,适合筛查食品中的转基因成分。
- 闫伟徐桢惠龙丽坤李葱葱李飞武
- 关键词：转基因食品
