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不同倍性鲫鲤鱼Dmc1基因cDNA的克隆及其表达分析被引量：5: 2007年; 酵母菌Dmc1(disrupted meioticc DNA)基因是一个在减数分裂前期Ⅰ表达的特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的.根据酵母菌、小鼠以及人的DMC1中保守氨基酸序列合成简并引物,分别克隆了二倍体红鲫(Carassius auratus red var.)、湘江野鲤(Cyprinus carpioL.)、日本白鲫(Carassius cuvieri)、三倍体湘云鲫和异源四倍体鲫鲤Dmc1基因部分cDNA序列.通过cDNA末端快速分离法(RACE)进一步获得了以上5种鱼Dmc1的cDNA全长,其中红鲫Dmc1、湘江野鲤Dmc1和日本白鲫Dmc1全长均为1375bp,三倍体湘云鲫Dmc1全长1383bp,异源四倍体鲫鲤Dmc1全长1379bp,这5种鱼各自都编码342个氨基酸.结果表明,红鲫、湘江野鲤和日本白鲫的DMC1蛋白的氨基酸同源性高达97.3%,说明DMC1蛋白在这3种鱼里具有高度保守性;而三者与已知序列的人、小鼠和斑马鱼(Danio rerio)DMC1蛋白的氨基酸同源性分别为86%,86%和95%.以分离得到的不同倍性鱼Dmc1基因编码区中完全相同的序列设计特异引物进行表达分析.RT-PCR结果表明,Dmc1只在性腺中表达,在其他组织中不表达;通过实时荧光定量PCR(real-time PCR),对Dmc1基因在繁殖季节的二倍体红鲫,三倍体湘云鲫,四倍体鲫鲤性腺中的表达进行分析,发现Dmc1在不同倍性鱼的性腺表达有差异,在卵巢和精巢均表现为:三倍体表达最高,二倍体次之,四倍体的表达最弱,特别是在三倍体卵巢的表达远高于在二倍体和四倍体的表达.同时,对这3种鱼的性腺进行组织切片分析,发现二倍体和四倍体鱼的性腺发育良好,且四倍体成熟度高于二倍体,而三倍体鱼性腺发育缓慢未达到性成熟,特别是卵巢的发育相当不好.由此可见,在不同倍性鲫鲤鱼中Dmc1基因也是减数分裂特异的基因,其表达与倍性无显著的相关性,而与性成熟相关;并且在三倍体卵巢中的过量表达可能与其减数分裂异常及其不育有关.; 陶敏刘少军龙昱曾琛刘季芳刘良国张纯段巍刘筠; 关键词：二倍体三倍体四倍体性腺发育

新型和改良多倍体鱼研究: 刘少军刘筠周工健罗凯坤姚占州刘锦辉段巍郭新红刘季芳陶敏张纯覃钦博龙昱颜金鹏王静孙远东; 该项目得到国家自然科学基金重点课题、面上课题（2项）、科技部农业科技成果转化基金等课题的资助。鱼类是脊椎动物中种类最多的动物，自然界中许多鱼的染色体数目呈现接近倍性分布。具有不同染色体数目的鱼是怎样形成的？这是值得研究的...; 关键词：; 关键词：遗传育种生物进化

不同倍性鱼垂体细胞和超微结构比较: 本文对繁殖季节和繁殖季节后的二倍体红鲫(2n=100)、三倍体湘云鲫(3n=150)以及四倍体鲫鲤(4n=200)脑垂体细胞的显微和超微结构以及组织化学特性进行了比较研究。结果表明：三种鱼脑垂体中都存在6种不同类型分泌细...; 龙昱刘少军黄卫人张剑孙远东张纯陈松刘锦辉刘筠; 关键词：垂体细胞超微结构; 文献传递

双头鱼的显微结构观察被引量：1: 2007年; 在鲫鲤F2(红鲫(♀)×鲤鱼(♂))中,发现8尾双头畸形鱼.对这8尾双头鱼的胚胎发育、外形特征、存活时间及他们的显微结构进行了观察.结果表明:8尾双头鱼的共同特征是具有明显的两个头,两个心脏.其中7尾双头鱼为两个头部,一个身体;另1尾为两个头部,两个身体.组织学切片观察发现双头鱼头部发育正常,其中两对眼睛中可见正常发育的视杯、晶状体、角膜等结构;脑中可见两个明显分界的大脑;两个心脏具有正常的围心腔;腮裂、鳔和肠管等也发育良好.但所有双头鱼在出膜后10天左右开始相继死亡,死亡的原因与随着生长发育进程的进行,两个头部器官在内部生理和外部水环境中都存在相应的困难有关系.此外,鲫鲤F2中多尾双头鱼的形成与它们是属间的远缘杂交后代有关,亲缘关系较远的染色体之间的互作导致基因表达异常,导致出现较高比例的异常胚胎.; 龙昱刘少军申佳珉陶敏肖俊刘筠; 关键词：显微结构

不同倍性鱼垂体细胞和超微结构比较被引量：8: 2006年; 对繁殖季节和繁殖季节后的二倍体红鲫(Carassius auratus red vat．)、三倍体湘云鲫以及四倍体鲫鲤脑垂体细胞的显微和超微结构以及组织化学特性进行了比较研究．结果表明,3种鱼脑垂体中都存在6种不同类型分泌细胞,但是不同倍性鱼的垂体细胞大小存在明显差异,就同一类细胞体积而言,四倍体鱼垂体细胞大于三倍体垂体细胞,三倍体垂体细胞大于二倍体垂体细胞．在繁殖季节,四倍体鲫鲤中腺垂体的GTH细胞所占比例最大,其次是二倍体红鲫,最少的是三倍体湘云鲫,该现象与四倍体鲫鲤的性腺发育提前、三倍体湘云鲫不育有关联;另一方面,三倍体湘云鲫中腺垂体中STH细胞所占比例最高,其次是二倍体,最少的是四倍体鲫鲤,这与三倍体湘云鲫生长速度最快、四倍体鲫鲤生长速度相对缓慢有关．另外,三倍体湘云鲫中腺垂体GTH细胞中的分泌颗粒和分泌小球在繁殖季节没有大量排出,而四倍体鲫鲤和二倍体红鲫明显有大量排出,说明三倍体湘云鲫的不育性与GTH中的激素不排出有关．以上结果说明,不同倍性鱼类在垂体结构方面表现出的差异与它们的生长速度、性腺发育等方面具有关联性．; 龙昱刘少军黄卫人张剑孙远东张纯陈松刘锦辉刘筠; 关键词：二倍体三倍体四倍体脑垂体

鳙鱼(Hypophthalmichthys nobilis)促性腺激素β亚基的克隆、表达和序列分析被引量：6: 2008年; 促性腺激素(Gonadotropin Hormone,GTH)是垂体合成和分泌的促进性腺发育成熟的一种重要的糖蛋白激素(Glycoprotein Hormones,GPHs).通过RT-PCR方法从鳙鱼(Hypophthalmichthys nobilis)脑垂体中克隆出两种促性腺激素β亚基,分别是促黄体素亚基(Luteinizing Hormone,LH)和促滤泡激素亚基(Follicle-stimulating Hormone,FSH).鳙鱼FSHβ亚基全长645bp,开放阅读框396bp,编码131个氨基酸(GenBank序列登录号:EF552360);LHβ亚基全长559bp,开放阅读框444bp,编码147个氨基酸(GenBank序列登录号:EF565164).根据鳙鱼与草鱼等鱼类及其他脊椎动物FSHβ和LHβ亚基的氨基酸序列分析表明:在鱼类中LHβ亚基具有高度保守性,而FSHβ亚基分化更快.用β-actin内参法从鳙鱼的垂体、下丘脑、心脏、肝脏和性腺等不同的组织,提取总RNA,用RT-PCR技术分析得出鳙鱼FSHβ和LHβ基因仅在垂体中特异性表达.; 牛艳东周毅陶敏龙昱张纯邓学建刘少军刘筠李建中; 关键词：鳙鱼促性腺激素 CDNA克隆

用团头鲂精子诱导金鱼雌核发育研究被引量：11: 2009年; 用紫外灭活的团头鲂(Megalobrama amblycephala)精子激活金鱼(Carassius auratus Goldfish)卵子,用0—4℃冷水冷休克处理卵子使其染色体加倍,得到成活的雌核发育金鱼。使用与金鱼不同亚科的团头鲂精子作为激活源能极大提高雌核发育后代的鉴定效率,只需依据外形特征、染色体数目和性腺发育程度,就能容易地将雌核发育金鱼和与团头鲂杂交后代区分开。雌核发育金鱼有两种体色不同的后代,但都为双尾,体形似金鱼,染色体数目为2n=100,全雌,性腺发育正常;而杂交后代为单尾,体形似鲫鱼,染色体数目为3n=124,性腺发育滞后。本实验为证明金鱼的性别决定方式为XX/XY型提供了细胞遗传学证据。得到两种体色皆不同于母本体色的后代,可能是基因座位纯化导致后代性状分化,也可能是异精效应导致。; 肖俊彭德姣段巍刘少军孙远东龙昱申佳珉张纯陶敏刘筠; 关键词：金鱼团头鲂人工雌核发育性别决定

用团头鲂精子诱导红鲫雌核发育的研究被引量：6: 2006年; 用遗传失活的团头鲂(Megalobrama amblycephala)的精子诱导红鲫(Carassius auratus Red Variety)进行雌核发育的研究,红鲫的卵子经适宜UV剂量灭活处理的团头鲂精子激活后,在0—4℃下冷休克40min抑制第二极体的排出使染色体加倍,获得雌核发育红鲫,它们的受精率、孵化率及成活率分别为(52．6±3．0)%,(23．6±4．1)%和(15．7±3．4)%,其成活率明显高于用鲤鱼精子诱导红鲫雌核发育的成活率(11．3±2．2)%．以外形特征、染色体数目及性腺发育程度为依据对雌核发育红鲫与对照杂交鱼进行了区分和鉴定,结果表明,Ⅰ龄鱼的体色为红色,染色体数目为100,性腺发育正常的个体为成功的雌核发育红鲫；而染色体数目为124或148,性腺发育滞后的个体为杂交鱼,其中三倍体鲫鲂是不育的(2年观察证明),而四倍体鲫鲂2年才能达到性成熟．以鲤鱼的精子作为对照,着重讨论了团头鲂精子作为刺激源的优势,即能提高雌核发育鱼的成活率,并可简化对雌核发育鱼的鉴定,研究证明团头鲂的精子是一种非常有效的诱导鲫鱼进行雌核发育的刺激源。; 孙远东陶敏刘少军张纯段巍申佳珉王静曾琛龙昱刘筠; 关键词：团头鲂红鲫雌核发育四倍体三倍体

不同倍性鲫鲤脑垂体细胞结构和HPG轴相关基因的表达及育性研究: 世界上首次培育成功的两性可育异源四倍体鲫鲤群体在生物进化和鱼类遗传育种方面都有重要意义。用雄性四倍体鲫鲤与雌性二倍体日本白鲫交配产生了不育三倍体湘云鲫。四倍体、三倍体鱼的形成为不同倍性鱼的生物学比较提供了重要的生物学平台...; 龙昱; 关键词：异源四倍体鲫鲤三倍体湘云鲫脑垂体育性; 文献传递

异源四倍体鲫鲤Sox4基因部分序列及其5′端调控区启动子片段的克隆与分析被引量：1: 2007年; 通过PCR技术从异源四倍体鲫鲤基因组DNA中分离到Sox4基因部分基序.序列分析表明,其5′端调控区具有多种启动子所特有的序列元件,如TATA框,CAAT框等,据此推测,它具有启动子活性.采用高保真PCR方法克隆了异源四倍体鱼Sox4基因5′端调控区600bp启动子片段,将其插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建重组载体pAtsox4EGFP-1.通过瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下可检测到绿色荧光.结果表明,克隆的Atsox4基因5′端调控区具有启动子活性,并成功构建了含四倍体鱼Sox4基因启动子片段的报告基因载体,为以后研究Sox4基因表达调控的分子机制奠定了基础.; 刘季芳李伟刘少军陶敏龙昱刘筠; 关键词：启动子

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龙昱

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