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腺病毒介导TWEAK对大鼠骨髓间充质干细胞影响的实验研究被引量：3: 2009年; 目的:探讨腺病毒介导的TWEAK基因对骨髓间充质干细胞(Bone M esenchym al Stem Cells,BMSCs)细胞的影响。方法:构建含有TWEAK基因的腺病毒载体Ad5CMV-TWEAK和含绿色荧光蛋白的对照腺病毒载体Ad5CMV-EGFP;利用全骨髓贴壁法分离纯BMSCs,通过转染Ad5CMV-EGFP确定病毒对BMSCs的转染效率;以未经转染的BMSCs细胞为空白对照组,以转染Ad5CMV-EGFP为实验对照组,以转染Ad5CMV-TWEAK为实验组,通过计数细胞和测定细胞碱性磷酸酶含量观察转染TWEAK对BMSCs增殖和骨形成能力的影响。结果:Ad5CMT-EGFP对大鼠BMSCs的感染率在300partic les/cell时可达到85%;感染后72小时组实验组与空白对照组差异有统计学分析意义(P<0.05),实验对照组与空白对照组差异无统计学分析意义;感染后15 d内各时间点3组间碱性磷酸酶的分泌量经t检验,差异无统计学意义。结论:腺病毒介导的TWEAK基因对于BMSCs具有增殖作用,但并不通过碱性磷酸酶影响BMSCs成骨能力,其在骨形成中的作用需要进一步探讨。; 于丽刘霞申玉芹柯小亮孙宏晨卢炫谕; 关键词：骨髓基质干细胞 TWEAK 增殖成骨

血管内皮细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞生物学效应的研究被引量：4: 2009年; 目的:体外研究腺病毒AdCMV转染VEGF基因对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及功能分化的影响。方法:体外培养扩增大鼠BMSCs,AdCMV-EGFP转染BMSCs,确定重组腺病毒的最适MO I,应用MTT法检测转染Ad-CMV-VEGF对大鼠BMSCs增殖的影响。采用RT-PCR方法检测转染后细胞VEGF的表达,通过检测成骨条件培养液诱导培养后细胞的碱性磷酸酶活性评价BMSCs向成骨细胞分化的能力。结果:AdCMV-EGFP在400partic le/cell时转染效率最高,且对细胞无毒副作用,未转染细胞、AdCMV-EGFP转染细胞与AdCMV-VEGF转染细胞光吸收(A)值在转染后第3天存在明显差异(P<0.05)。RT-PCR检测AdCMV-VEGF转染细胞有VEGF基因的表达,未转染AdCMV-VEGF细胞组未见VEGF基因mRNA的表达。通过成骨诱导后AdCMV-VEGF转染细胞碱性磷酸酶活性明显高于未转染AdCMV-VEGF细胞(P<0.05)。结论:在体外AdCMV-VEGF能够成功转染大鼠BMSCs,能够促进BMSCs的增殖和向成骨细胞的分化。; 刘霞孙宏晨刘金钟刘超于丽; 关键词：血管内皮细胞生长因子腺病毒骨髓间充质干细胞分化

腺病毒介导肿瘤坏死因子样弱凋亡因子转染对大鼠骨髓基质干细胞内皮分化的影响被引量：2: 2009年; 目的研究转染腺病毒介导的肿瘤坏死因子样弱凋亡因子(tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis,TWEAK)对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,MSCs)内皮分化功能的影响。方法用密度梯度离心法培养纯化扩增大鼠MSCs细胞,将实验细胞分为转染Ad5CMV-TWEAK的实验组和未经转染的对照组,转染后用生长因子诱导其分化,用CD34和Ⅷ因子相关抗原染色鉴定其分化能力;细胞计数法观测转染TWEAK后MSCs内皮分化细胞增殖的影响;胶面生长实验观察转染TWEAK对MSCs微血管形成能力的影响。结果大鼠MSCs转染TWEAK基因经诱导分化后的CD34和Ⅷ因子相关抗原染色阳性细胞数量增多,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。转染组内皮分化细胞数量增长较快,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。胶面生长实验显示转染TWEAK组细胞微血管新生明显。结论TWEAK基因能促进MSCs向内皮分化,并能促进内皮细胞增殖,在一定的条件下,可促进微血管新生,这为进一步研究其作为诱导体外接种细胞血管发生的基因奠定了基础。; 于丽孙宏晨申玉芹柯小亮刘霞苗雷英; 关键词：骨髓基质干细胞转染内皮分化血管新生

TWEAK诱导骨髓间充质干细胞增殖作用的初步实验研究被引量：1: 2009年; 目的探讨肿瘤坏死因子样弱凋亡因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)基因转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)后对其增殖功能的影响。方法全骨髓贴壁法筛选培养幼年大鼠BMSCs,用腺病毒载体Ad5CMV-TWEAK转染TWEAK基因,通过逆转录-聚合酶链式扩增实验(RT-PCR)观察大鼠BMSCs细胞转染后TWEAK蛋白的表达情况。实验分成3组,即转染Ad5CMV-TWEAK的实验组,转染Ad5CMV-EGFP的对照组及未转染任何基因的空白对照组。用MTT法比较各组BMSCs细胞的增殖变化情况。结果全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化大鼠BMSCs,RT-PCR可证明Ad5CMV-TWEAK成功的转染BMSCs细胞,转染后在BMSCs产生较高的表达。MTT值经χ2检验,TWEAK组与无干预组比较差异显著(P<0.05),而EGFP组与无干预组无显著差异(P>0.05)。结论TWEAK转染有刺激BMSCs的增殖作用,如进一步证明其促分化作用,其在骨修复材料的改进以及种植体涂层修饰方面将有广阔的应用前景。; 于丽刘霞柯小亮刘金钟孙宏晨; 关键词：骨髓间充质干细胞增殖细胞周期

腺病毒介导肿瘤坏死因子样弱凋亡因子转染对大鼠骨髓基质干细胞内皮分化的影响: 2009年; 目的研究转染腺病毒介导的肿瘤坏死因子样弱凋亡因子（tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis，TWEAK）对大鼠骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）内皮分化功能的影响。方法用密度梯度离心法培养纯化扩增大鼠MSCs细胞，将实验细胞分为转染Ad5CMV-TWEAK的实验组和未经转染的对照组，转染后用生长因子诱导其分化，用CD34和Ⅷ因子相关抗原染色鉴定其分化能力；细胞计数法观测转染TWEAK后MSCs内皮分化细胞增殖的影响；; 于丽孙宏晨申玉芹柯小亮刘霞苗雷英; 关键词：分化功能凋亡因子转染内皮

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于丽