余敏君
- 作品数：149 被引量：687H指数：12
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 穿透支原体LAMPs诱导NF-κB激活介导小鼠巨噬细胞凋亡被引量：7
- 2008年
- 研究穿透支原体(Mpe)脂质相关膜蛋白(LAMPs)能否诱导小鼠巨噬细胞凋亡,并阐明其可能的分子机制,以了解Mpe潜在的致病性。用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒和DNA Ladder方法检测Mpe LAMPs诱导体外培养的小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞的凋亡。以间接免疫荧光和Western blotting方法检测经Mpe LAMPs处理的小鼠巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)对细胞凋亡的影响。结果表明:Mpe LAMPs能诱导小鼠巨噬细胞发生早期或晚期凋亡;Mpe LAMPs能诱导激活小鼠巨噬细胞的NF-κB,使其从细胞浆中转位到细胞核内;PDTC能显著地抑制经处理的小鼠巨噬细胞的NF-κB的激活,且能抑制Mpe LAMPs诱导的巨噬细胞发生凋亡。因此,Mpe LAMPs诱导小鼠巨噬细胞凋亡可能与NF-κB的激活有关,因而Mpe可能是一个重要的致病因素。
- 曾焱华吴移谋余敏君刘劼游晓星唐双阳
- 关键词：穿透支原体膜蛋白核因子ΚB
- hDaxx与12型腺病毒E1B 55KD癌蛋白在体内外的结合反应
- 2002年
- 目的 研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。 方法 构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 / h Daxx,并在大肠杆菌 (E.coli) BL2 1中诱导表达 ,用镍—氮基三乙酸 (Ni- NTA)琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应 ,Western blot方法研究 h Daxx与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合反应。 结果 质粒 p QE30 / h Daxx在E.coli BL2 1中成功诱导表达了 h Daxx,其 N端有 6个组氨酸分子附着 (6 His- h Daxx)。Western blot结果显示 h Daxx在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD发生直接结合反应。 结论 表达并获得纯化的 6 His- h Daxx,h Daxx能在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合。
- 万艳平吴移谋粟盛梅余敏君尹卫国杨长顺
- 关键词：HDAXX急性早幼粒细胞性白血病
- 以学科优势促进实验教学示范中心建设被引量：12
- 2009年
- 论述了如何从科研、人才、成果转化及仪器设备条件等方面发掘和利用学科优势,探讨了将学科发展优势与示范实验室建设有机地结合起来,全方位地促进实验教学示范中心建设的可能性。
- 胡四海吴移谋张愉快余敏君蔡恒玲唐双阳
- 关键词：实验教学
- 溶脲脲原体对大环内酯类药物的敏感性分析被引量：35
- 2003年
- 目的:检测溶脲脲原体(Uu)对14环(红霉素和罗红霉素)、15环(阿奇霉素)和16环(交沙霉素和吉他霉素)大环内酯类药物的敏感性,为临床合理用药提供参考依据。方法:采用微量肉汤稀释法检测了5种大环内酯类药物对203株Uu的最低抑菌浓度(MIC)。结果:203株Uu对红霉素、罗红霉素、阿奇霉素、交沙霉素和吉他霉素的耐药率分别为:11.8％、7.4％、6.9％、3.9％和3.5％。在5种药物中,交沙霉素和吉他霉素抗Uu活性最强,MIC_(50)分别为0.125mg/L和0.5 mg/L,MIC_(90)分别为0.5mg/L和1mg/L,其次为阿奇霉素,MIC_(50)和MIC_(90)分别为2mg/L和4mg/L,红霉素和罗红霉素抗Uu活性较弱,MIC_(50)均为4mg/L,MIC_(90)均为8mg/L。结论:对Uu对大环内酯类药物存在不同程度的耐药;16环大环内酯类药物交沙霉素和吉他霉素抗Uu活性强于14环和15环大环内酯类药物。
- 曾焱华吴移谋余敏君姚艳冰尹卫国黄澍杰
- 关键词：溶脲脲原体大环内酯类药物红霉素罗红霉素
- 淋病奈瑟球菌表面蛋白A基因疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答被引量：5
- 2007年
- 目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A(NspA)基因疫苗,并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/NspA,并经PCR、双酶切及测序鉴定。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达。以pcDNA3.1(+)/NspA重组质粒免疫45只雄性BALB/c小鼠,试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度,EIASA检测IFN-γ水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测脾淋巴细胞增殖。提取接种部位股四头肌总DNA,PCR检测BALB/c小鼠肌细胞内NspA基因。结果成功构建pcDNA3.1(+)/NspA基因疫苗,能在真核细胞中转录和表达。pcDNA3.1(+)/NspA免疫组的抗体滴度达1:640,pcDNA3.1(+)和PBS免疫组均无特异性抗体检出。空载体pcDNA3.1(+)组IFN-γ为(23.79±11.85)pg/mL,pcDNA3.1(+)/ NspA免疫组为(169.71±30.52)pg/mL(P<0.01);脾淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)分别为1.05±0.30和1.94±0.74(P<0.01)。并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在。结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗,将其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答,为进一步用于淋病预防奠定了基础。
- 谢良伊胡四海唐湘云杨胜辉余敏君韩福郎
- 关键词：膜蛋白质类抗体生成
- 黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位优化的淋病奈瑟菌孔洞蛋白B核酸疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答被引量：1
- 2011年
- 目的分析黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）辅佐的淋病奈瑟菌孔洞蛋白B（PorB）核酸疫苗诱导小鼠的免疫应答水平。方法PCR法扩增目的基因porB、ltB、ltB-porB，分别构建3种相应的pcDNA3．1（一）真核重组表达载体，经PCR、双酶切及基因测序鉴定后转染Hela细胞，用细胞免疫荧光法鉴定质粒的蛋白表达。将核酸疫苗经鼻饲免疫雌性BALB／c小鼠，检测体液免疫及细胞免疫应答水平，同时用免疫组织化学法检测porB、ltB、ltB-porB基因在小鼠鼻黏膜内的表达。组间均数比较采用方差分析。结果构建的真核重组质粒均能在Hela细胞内及小鼠鼻黏膜组织内表达。核酸疫苗免疫组小鼠的生殖道灌洗液PorB特异性sIgA及血清porB特异性IgG水平明显高于对照组（P〈0.01；P〈0.05），且ltB-porB融合基因组特异性sIgA明显高于porB组（P〈0.05）；pcDNA3.1（一）／porB组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4和脾淋巴细胞刺激指数（SI）分别为（170.04±23.89）pg／mL、（114.68±14.27）pg／mL和1.68士0.19，pcDNA3.1（一）／ltB-porB组分别为（161.42±27.50）pg／mL、（124.16±19.04）pg／mL和1.73±0.28，均高于对照组pcDNA3.1（一）和PBS，差异均有统计学意义（P〈O.01；P〈0.05），高于对照组pcDNA3.1（一）／ttB，差异均有统计学意义（均P〈0.05），但两核酸疫苗免疫组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论所构建的核酸疫苗分别在Hela细胞及小鼠鼻黏膜组织内获得了表达，经黏膜途径免疫能诱导小鼠产生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫应答，尤其是黏膜免疫应答；证实黏膜佐剂LTB可辅佐PorB诱导小鼠产生高水平的生殖道黏膜免疫。
- 陈敏胡四海王玉峰戴志兵张愉快余敏君李忠玉朱翠明陆春雪
- 关键词：奈瑟球菌淋病佐剂大肠埃希菌肠毒素类疫苗
- 解脲脲原体拓扑异构酶基因突变与耐喹诺酮类药物关系的研究被引量：40
- 2001年
- 目的 探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与解脲脲原体 (Uu)耐喹诺酮类药物的关系。方法 通过肉汤稀释法从 184株临床株中筛选出 13株对 6种喹诺酮类药物呈不同程度耐药Uu株 ,应用聚合酶链反应扩增gyrA、gyrB、parC、parE基因 ,产物测序后与标准敏感株核苷酸序列进行比较。结果 Uu耐药株的最低抑菌浓度均高于相应的标准敏感株 4～ 32倍 ;序列比较发现gyrAQRDR第 87位碱基C到A的突变导致第 95位天冬氨酸被谷氨酸替代 ,parCQRDR第 5 0位碱基C到T的突变导致第 80位丝氨酸被亮氨酸替代 ,gyrB和parE编码的氨基酸序列没有改变。结论 gyrAQRDR第 87位碱基C到A的突变和parC第 5
- 张文波吴移谋尹卫国余敏君
- 关键词：解脲脲原体基因突变抗药性喹诺酮类药物
- hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53在体内外的相互作用被引量：9
- 2001年
- 与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleukemiaprotein ,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构域 (PMLoncogenicdomains,PODs)的人Daxx(humanDaxx ,hDaxx) ,能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡。细胞肿瘤抑制子p5 3抑制细胞及病毒转录 ,提高细胞内Fas的表达并调节细胞凋亡。为了探索hDaxx与 p5 3在诱导细胞凋亡中有无相互作用及其作用效果 ,利用酵母双杂交体系测定发现p5 3通过C端与hDaxx结合 ,共免疫沉淀反应及Westernblot结果显示hDaxx与 p5 3能在体内外直接结合。hDaxx与 p5
- 谭立志万艳平吴移谋刘传爱余敏君尹卫国廖端芳
- 关键词：HDAXXP53相互作用
- GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础。方法用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定。结果阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb6、18 bp和243 bp附近的片段。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确。结论成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD。
- 陈春莲彭俊余敏君尹卫国朱翠明万艳平
- 关键词：E2基因绿色荧光蛋白真核表达
- 泌尿生殖道支原体对组织细胞的致病作用研究被引量：2
- 1994年
- 通过对尿素支原体与人型支原体在单层Ｈｅｌａ细胞上生长特性及细胞毒性的研究，以及细胞水平的致病作用的试验，结果表明，二者在Ｈｅｌａ细胞上持续生长；感染后８天，对Ｈｅｌａ细胞有明显的细胞毒作用，１０天后，可呈现细胞病变效应（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉ。ｅｆｆｅｃｔＣＰＥ）。电镜观察，细胞膜与核膜受损，线粒体肿胀，嵴增宽或溶解是空泡状。这些研究结果可为阐明支原体的致病性提供实验依据。
- 吴移谋宋颖余敏君朱淑媛尹卫国欧阳著峰
- 关键词：尿素支原体人型支原体HELA细胞泌尿生殖系统
