傅一工
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院分子医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家教育部博士点基金教育部科学技术研究重大项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体基因的克隆及工程菌的构建与鉴定被引量：3
- 2004年
- 利用RT PCR技术,从人脐带静脉上皮细胞中克隆人组织型纤溶酶原激活剂基因,将其接入TA克隆载体PCR2.1中,经DNA序列测定后,以该重组质粒DNA为模板,用PCR方法获得了人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)基因,将其转入pET29a,构建了重组表达质粒pET29a/K2tPA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,构成工程菌.经IPTG诱导表达,在40kDa处有一明显表达条带,表达量为约占菌体总蛋白的20%.该菌种在贮存与复苏及传代过程中具有良好的质粒稳定性和表达稳定性.
- 陈于红朱镇华刘蓓钫张菁傅一工王石泉张巍杨庆刘建宁
- 关键词：工程菌质粒稳定性克隆
- rhBACE的克隆、表达纯化与活性测定
- 2004年
- 将重组人酸性蛋白水解酶原 (rh_proBACE)基因克隆到原核表达载体 pET2 8a质粒中 ,构建了pET2 8a_rh_proBACE重组表达载体 ,并在大肠杆菌菌株Rosetta中进行表达 .包涵体中的表达产物溶于 6mol/L盐酸胍 ,经Ni_Sepharose亲和层析纯化后 ,得到高纯度的rh_proBACE蛋白 .将此蛋白在复性液中重新折叠后 ,于酸性条件 (pH 4.5)下激活 ,切去酶原序列 ,产生有活性的rhBACE蛋白 ,并利用人工合成多肽底物 (BAS_1 31 )
- 郭志刚张巍陈新园傅一工孙自勇刘建宁
- 关键词：克隆活性测定Β分泌酶阿尔茨海默病BACE
