冯正
- 作品数：78 被引量：292H指数：10
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项美国国立卫生研究院基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学社会学更多>>
- 日本血吸虫金属蛋白酶基因的克隆和表达及其对小鼠的免疫保护性研究被引量：2
- 2011年
- 目的克隆和表达日本血吸虫金属蛋白酶(metalloprotease)编码基因并纯化表达产物,观察其在成虫体内定位及在小鼠的免疫试验。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,从含有金属蛋白酶基因的日本血吸虫cDNA克隆(SJM2CFB04,简称SjB04)中扩增得到该编码基因片段,亚克隆至原核表达载体pET28a中表达,应用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。应用间接免疫荧光法,观察金属蛋白酶在血吸虫成虫体内的分布。将18只C57BC/6小鼠随机分成两组,实验组用SjB04重组蛋白(25μg/只)免疫小鼠,共3次,每次间隔2周;对照组用佐剂免疫(50μl/只)。末次免疫后2周,每鼠腹部感染40±2条日本血吸虫尾蚴,攻击后第37天起连续收集6 d小鼠粪便,计算每克粪虫卵数和减卵率;第42天剖杀小鼠,门静脉灌注收集成虫并计算减虫率。结果获得了SjB04基因(ORF 528 bp)的编码序列,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjB04。免疫荧光法检测结果显示,SjB04主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮。Western blotting分析结果显示,该纯化重组蛋白SjB04能被感染兔血清和免疫兔血清识别,在相对分子质量(Mr)29 800处出现一清晰条带。用该纯化蛋白免疫C57BC/6小鼠后,减虫率为27.1%,粪减卵率为57.8%。结论克隆获得的日本血吸虫SjB04重组蛋白主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮,该蛋白可明显减少感染日本血吸虫的C57BC/6小鼠的粪卵排出量。
- 徐斌鞠川卢艳莫筱谨冯正许学年胡薇
- 关键词：日本血吸虫金属蛋白酶免疫保护力
- 用合成多肽分析细粒棘球蚴AgB抗原亚单位的反应性表位被引量：3
- 2011年
- 目的通过合成多肽分析细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原的主要反应性表位区域。方法用ELISA法分析来源于细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4亚单位基因序列的5个人工合成多肽KK36、RK30、B4-1、B4-2和B4-3,及上述3个亚单位重组抗原在血清抗体检测中的反应性,共检测细粒棘球蚴病(115例)、多房棘球蚴病(54例)、囊尾蚴病(22例)患者和健康人(18例)血清209份。用受试者工作特征(ROC)曲线分析合成多肽和重组抗原在血清检测中的诊断效率。结果多肽KK36和RK30诊断细粒棘球蚴病的敏感性分别为89.2%和85.0%,特异性为62.5%和59.4%,诊断效率分别为84.8%和80.4%,与AgB1(84.5%)和AgB2(81.2%)抗原诊断效率相近,拟合AgB1和AgB2重组抗原的ROC曲线。来源于AgB4抗原的3个多肽B4-1、B4-2和B4-3检测细粒棘球蚴病患者血清的诊断效率分别为49.4%、57.9%和77.4%。其中,B4-3的反应性最佳,B4-2也有一定的反应性。结论 KK36和RK30完整地包含了AgB1和AgB2抗原的反应性表位区域。B4-2和B4-3多肽均含有AgB4抗原的部分表位区域,推测AgB4抗原的表位区域位于序列的中后段。
- 江莉李雄张耀光马晓疆牛新玲何艳燕冯正
- 关键词：细粒棘球蚴合成多肽表位分析
- 日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究
- 2020年
- 目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5’-RACE和3’-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。
- 相慢玉李健罗芳孙成松朱炳宽王吉鹏莫筱瑾张颋徐斌冯正胡薇
- 关键词：日本血吸虫表皮生长因子受体生殖
- 细粒棘球蚴AgB亚单位抗原的基因克隆和表达系统的优化
- 目的抗原B(AgB)被认为是目前用于细粒棘球蚴病免疫诊断试验中具有较高敏感性和特异性的抗原之一。AgB为热稳定的脂蛋白,至少有两个以上的不同8 kDa亚单位组成了AgB。研究显示,AgB是由不同基因组成的一个基因家族所编...
- 江莉冯正许学年薛海筹冯宇
- 关键词：细粒棘球蚴抗原B基因克隆
- 文献传递
- 子一代实验室钉螺细胞色素c氧化酶I、细胞色素b基因序列分析被引量：4
- 2004年
- 目的 了解钉螺子一代 (F1)实验室钉螺群 (湖北钉螺湖北亚种 )内的遗传变异。 方法 实验室饲养的F1钉螺 ,单个抽提基因组DNA ,PCR扩增细胞色素c氧化酶I(COI)、细胞色素b(Cytb)基因并测序 ,用GENETYX MACver .9软件进行同源排序、DNA和氨基酸序列分析 ,同时与GenBank相同基因序列比较。 结果 实验室螺群内 ,COI基因差异为 12 .2 % ,94个氨基酸发生变化。Cytb基因差异 6.4% ,有 2 5个氨基酸发生变化。湖北亚种与滇川亚种COI基因序列差异率为 13 .5 %。与GenBank中湖北钉螺滇川亚种Cytb基因序列比较 ,差异为 13 .6% ,在 2 0 3个氨基酸中 6个氨基酸发生变化。 结论 F1实验室钉螺群内核苷酸与氨基酸序列均发生变异。
- 张仪Yamasaki Hiroshi刘和香冯婷冯正
- 关键词：湖北钉螺细胞色素C氧化酶子一代CYTB基因细胞色素B基因
- 华支睾吸虫特异性PPMP型抗原及其应用
- 本发明提供了三种华支睾吸虫的特异性PPMP型抗原，还提供了三种特异性的结合华支睾吸虫的特异性抗原的抗体。本发明还提供了三种分离的华支睾吸虫的特异性PPMP型抗原蛋白，由华支睾吸虫的特异性抗原基因的核苷酸序列所编码。本发明...
- 许学年周岩董玉婷包意芳徐斌冯正
- 新疆北部地区囊型包虫病的流行现状被引量：27
- 2004年
- 目的通过流行病学调查,确定本世纪初新疆北部地区囊型包虫病的流行态势及主要流行特征。方法选择在自然地理条件、民族组成、生产、生活条件等方面具有代表性的县、通过血清学调查确定居民包虫病的感染率;B 超普查确定患病率。通过屠宰场调查确定绵羊包虫病的患病率和通过粪抗原的检测确定家犬中细粒棘球绦虫成虫的感染率。以入户调查结合问卷调查确定居民养犬状况。对1991-2000年期间手术治疗的包虫病病例进行回顾性调查。对调查结果与以往资料进行比较分析。结果在5个县的调查点中.居民血清抗体的阳性率从18.3%至51.2%;包虫病的患病率从0.39%至3.01%,5个县的平均患病率为1.93%。家犬中成虫感染率从23.4%至34.8%。1岁龄绵羊患病率从43.7%至47.3%。两个县居民养犬户所占比例在40%以下,3个县在70%以上。1991-2000年期间额敏、木垒两县10年累计手术病例率各为337.31/10万和573.47/10万。结论与上世纪80年代相比,除布尔津县冲乎尔乡外,居民感染率和患病率、绵羊患病率、家犬感染率均处于高位,手术病例增加,表明北疆地区人、畜中的囊型包虫病在总体上处于稳定向上发展的流行态势,这与多年来除了在小范围内进行过包虫病防治试点工作外,没有进行过有计划的预防控制措施的实际情况是一致的。
- 柴君杰焦伟伊斯拉音常青孟贺巴特付承韩玲玲徐世东孙立峰白国琦赛力克马合木提多鲁肯薛海筹冯正
- 关键词：囊型包虫病自然地理条件细粒棘球绦虫预防控制措施手术病例B超普查
- 一种华支睾吸虫特异性PPMP型抗原
- 本发明一种华支睾吸虫的特异性PPMP型抗原，抗原基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示，还提供了一种特异性的结合上述华支睾吸虫的特异性抗原的抗体。还提供了一种分离的华支睾吸虫的特异性PPMP型抗原蛋白，由上述华支睾吸虫...
- 许学年周岩董玉婷包意芳徐斌冯正
- 华支睾吸虫富甘氨酸2a类抗原Cs4重组蛋白的免疫学特性与定位
- 目的：对华支睾吸虫富甘氨酸2a(GRA2a)类抗原Cs4重组蛋白(rCs4)进行免疫学特性分析,并对GRA2a类抗原进行组织定位.方法：使用蛋白质印迹法分析rCs4与华支睾吸虫病患者混合血清的免疫反应性,并分析GRA2a...
- 许学年CHENG NaXU Xue-nian程娜ZHANG Hong-man张鸿满ZHOU Yan周岩TAN Yu-guang谭裕光BAO Yi-fang包意芳ZHANG Lu-juan张陆娟XU Bin徐斌JIANG He江河黎学铭LI Xue-mingFENG Zheng冯正
- 关键词：华支睾吸虫病免疫学诊断重组蛋白
- 日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的生物信息学鉴定与分析被引量：5
- 2007年
- 目的鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征。方法采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方法获得日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的结构特征。结果获得了2条腺嘌呤磷酸核糖转移酶的同源蛋白序列;分析了这2条序列的EST丰度、理化性质及蛋白三维结构等信息。结论日本血吸虫至少存在2个腺嘌呤磷酸核糖转移酶的异构体。
- 杨忠胡薇苏谨马骊李亦学冯正魏东芝
- 关键词：日本血吸虫生物信息学
