刘世德
- 作品数：29 被引量：88H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金辽宁省教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒16型早期基因E7的克隆及其在原核细胞中的表达
- 1998年
- 目的进一步研究与宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的生物学活性。方法采用PCR法从中国妇女宫颈癌标本中扩增HPV16早期基因E7,测序分析其DNA的序列。结果克隆的HPV16E7基因与标准型进行比较表明,前者无核苷酸突变。将此基因装入原核表达载体,能在E.Coli中高效表达出谷胱甘肽S-转移酶(GST)-E7蛋白。Western印迹分析表明,此融合蛋白能与E7抗体特异地结合。结论克隆的HPV16E7基因及其表达的蛋白可为今后分子流行病学调查及疫苗研制提供有用的资料。
- 刘朝奇司静懿刘世德许雪梅宋国兴李昆
- 关键词：E7基因克隆人乳头瘤病毒
- HPV致宫颈癌的分子机理与基因治疗及疫苗研究(综述二)
- HPV16致宫颈癌的基因治疗研究据本组分子流行病学研究资料表明,中国妇女宫颈癌中HPV16阳性率高达84.6％,HPV16 E6E7为其致癌基因,抑制其表达则可消除其转化作用.鉴于至今无特效药物治疗HPV感染.因此,近年...
- 司静懿韩广洲许雪梅陈连凤吴璐陈浩李昆宋国兴刘世德胡延忠曾苹徐建青刘朝奇阎伦飙
- 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒分子机理基因治疗疫苗
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途
- 本发明涉及人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒，及其生产方法和用途，在生产中使用了对N端改造的主要衣壳蛋白基因和C末端融合改造的大肠杆菌热不稳定肠毒素LTK63的次要衣壳蛋白L2融合基因；在杆状病毒-昆虫细胞表达体系中生产L1N...
- 许雪梅许于飞张洪涛宋国兴司静懿刘世德
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的相关研究进展被引量：1
- 1997年
- 人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多，发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰ），并可用作预防性疫苗；基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文着重从近几年国际上ＨＰＶ１６预防性疫苗的基础性工作进展及预防性疫苗研究现状等方面及趋势作一综述。
- 王立良宋国兴司静懿刘世德
- 关键词：乳头瘤病毒疫苗预防性疫苗
- 人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。
- 刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1E7免疫原性
- 基因工程重组人乳头瘤病毒亚基因致癌的分子生物学及超微结构研究被引量：1
- 1990年
- 我们用基因分子生物学结合超微结构的方法在318例人宫颈癌标本中证明人乳头瘤病毒16型(HPV-16)与中国妇女宫颈癌的发生关系密切。它的亚基因片段,E_6-E_7早期基因可能是HPV-16的致癌基因。本文采用近年来开始发展起来的基因工程方法,将HPV-16的全部早期区基因及E_6-E_7基因分别重组至逆转录病毒(小鼠白血病病毒)的基因组中,将比重组的逆转录病毒导入培养细胞,在细胞中大量牛成并释放病毒颗粒到培养液中(此细胞称为重组病毒生成细胞)。借助重组病毒感染方式介导基因转移进行体外转化研究。采用重组逆转录病毒感染方式研究属于DNA病毒的HPV-16的致癌潜能,国内外尚未见报道。我们证明它是目前体外研究转化功能效率最高,最稳定的方法。
- 司静懿李昆张卫韩日才陈莲凤赵维敏宋国兴刘世德贾丽萍麦永嫣曾毅
- 关键词：乳头瘤致癌超微结构
- 人乳头瘤病毒16型转换基因的序列分析被引量：3
- 2000年
- 为了解中国地区宫颈癌病人中人乳头瘤病毒16 型E6E7 基因结构特点，从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取组织DNA，经HPV 多重引物PCR 法鉴定标本中感染HPV 型别，选单纯感染HPV16 型两例标本DNA为模板进行PCR 扩增，获得HPV16 E6E7 基因后，重组入pALTER-1 载体，进行双向测序、分析。DNA 序列分析表明:两例标本的HPV16 E6E7 序列全长均为776bp， 与已发表的德国标准株长度相等，两例均为变异株，共检出5 处核苷酸变异位点，其中4 处可导致氨基酸改变。中国山东地区宫颈癌病人中HPV16 E6E7 的基因结构与德国标准株的HPV16 E6E7 基因之间存在差异。
- 许雪梅宋国兴司静懿刘世德李昆
- 关键词：E6E7基因宫颈癌
- HPV16型E7C亚基因与共激活分子B7-1协同诱导E7特异性CTL研究被引量：5
- 1999年
- 目的利用去除Ｅ７的转化活性而保留其抗原性的Ｅ７Ｃ亚基因研制防治ＨＰＶ１６相关疾病的疫苗，并进一步探索利用Ｂ７－１研制更佳活化细胞免疫的加强疫苗。方法用ＰＣＲ方法扩增获得Ｅ７Ｃ后，插入真核表达质粒获得ｐＬＮＣＥ７Ｃ，体外真核细胞中证实其具有表达能力后，在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后腿肌肉内直接进行裸ＤＮＡ接种免疫，或与ｐＬＮＣｍＢ７－１联合免疫接种，用５１Ｃｒ释放法体外分析经免疫鼠的细胞毒性Ｔ淋巴细胞活性。结果经免疫小鼠获得较好的Ｅ７特异性ＣＴＬ活性；若Ｅ７Ｃ与小鼠Ｂ７－１的表达质粒联合接种，则活性明显得到加强。结论Ｅ７Ｃ可以用于ＨＰＶ１６ＤＮＡ疫苗研制。
- 徐建青徐建青司静懿宋国兴张友会许雪梅宋国兴
- 关键词：人乳头瘤状病毒DNA疫苗
- 人乳头瘤病毒16型晚期基因L1在原核细胞的表达及免疫效果观察被引量：3
- 2007年
- 目的：人乳头瘤病毒16型（HPV16）疫苗的研制可望防治宫颈癌的发生、发展，本实验从中国感染人群中克隆L1基因，期望制备中国人群的HPV16的预防性疫苗。方法：从HPV16阳性的尖锐湿疣临床标本中，PCR扩增HPV16L1基因，克隆、测序，并在原核细胞表达L1蛋白，纯化蛋白经过复性后，电镜观察病毒样颗粒（VLP），VLP免疫动物观察抗体产生情况。结果：克隆的HPV16L1，测序结果发现有4个特异性突变位点是nt6240的C-G、nt6432 A→G、nt6901-03及nt6951-53。将HPV16L1基因克隆到原核表达载体pET-28a（＋），高表达的蛋白应用蛋白转印证实是HPV16L1蛋白，纯化的蛋白复性后可以自组装VLP，免疫动物产生高滴度的抗体。结论：从临床标本克隆表达了HPVl6L1基因，可以在原核细胞高表达及体外组装VLP，并且具有良好的免疫原性。为研制HPV16预防性疫苗探索一条易于推广而经济的制备途径。
- 刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德
- 关键词：HPVL6L1基因蛋白表达
- 冠状病毒透射电子显微镜形态学鉴定方法
- 本标准规定了应用透射电子显微镜观察与鉴定冠状病毒的方法、要求和冠状病毒的形态和形态发生学特征（参见附录A、附录B）。本标准适用于利用透射电子显微镜对冠状病毒形态的鉴定。
- 陈德蕙曾荣树杨怡刘世德杨勇骥俞彰毕舒
- 关键词：寄生物动物学微生物学显微分析
- 文献传递
